【摘要】 目的 探讨乳腺癌中Ki-67抗原表达和DNA倍体的相关性及临床意义。 方法 采用SP免疫组织化学方法和DNA图像分析技术检测130例乳腺癌组织中Ki-67抗原表达和DNA倍体，结合临床病理资料进行分析。 结果 Ki-67抗原表达率与乳腺癌TNM分期、腋淋巴结转移以及DNA非整倍体率之间均存在显著正相关关系（P<0.01）。 结论 Ki-67表达和DNA倍体可以反映乳腺癌的细胞增殖活性，联合检测两指标对评估乳腺癌的生物学行为有一定的参考价值。

【关键词】 乳腺肿瘤;Ki-67抗原;DNA;倍性;免疫组织化学

增殖细胞核抗原Ki-67是一种与细胞周期相关的蛋白质，DNA倍体则可反映细胞增殖能力［1-3］ 。已有研究表明，Ki-67蛋白表达或DNA倍体情况与乳腺癌的某些生物学特性有关［4-5］ 。笔者采用免疫组织化学方法和图像分析技术，同步检测乳腺癌组织中Ki-67蛋白表达和DNA倍体，探讨其相关性及其临床意义。

1 对象与方法

1.1 对象 收集我科2002年1月～2004年6月根治或改良根治切除乳腺癌患者130例，均为女性，年龄（50.2±10.9）岁（25～78岁）。组织学类型:浸润性导管癌80例，浸润性小叶癌12例，髓样癌21例，单纯癌7例，黏液腺癌4例，小管癌6例。有区域淋巴结转移者65例。按TNM分期:Ⅰ期27例，Ⅱ期74例，Ⅲ期29例。另取20例距离癌组织边缘>5cm的癌旁正常乳腺组织作对照。标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，常规切片4μm。

1.2 Ki-67测定 鼠抗人Ki-67单抗、免疫组织化学SP试剂盒购自福州迈新生物技术工程公司。标本脱蜡、水化，经高温、高压抗原修复后，按常规SP染色，DAB显色。以PBS分别代替一抗、二抗作阴性对照，已知Ki-67阳性乳腺癌作阳性对照。阳性率判断标准参照文献［6］:阳性细胞数<5%为（-），5%～25%为（+），26%～50%为（），>50%为（）。以（-）和（+）为低表达组，（）和（）为高表达组进行分析。

1.3 DNA倍体测定 常规Feulgen染色，使用CMIAS007真彩色医学图像分析系统（软件由空军总医院和北京航空航天工业大学联合研制）。每例标本随机测定100个左右分散、无重叠的肿瘤细胞核的积分吸光密度，以同切片中40～50个小淋巴细胞核作为正常二倍体（2C）对照。计算机自动统计出肿瘤细胞核和小淋巴细胞核的平均积分吸光密度（两者之比值为DNA指数），分析2C、3～4C、5C和>5C细胞各自占该例测量细胞的百分比，并打印出DNA直方图。以DNA指数（均数±标准差）作为DNA相对含量，以>5C细胞比例作为DNA非整倍体率（均数±标准差）进行分析［2-3］ 。

1.4 统计学处理 应用SPSS10.0统计软件进行χ 2 或t检验，P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 Ki-67阳性定位于细胞核，光镜下显示细胞核细小棕黄色或棕褐色颗粒（图1）。癌旁正常的乳腺组织切片中未见Ki-67阳性表达。130例乳腺癌中Ki-67阳性表达102例，总的阳性表达率为78.5%，其中表达（+）33.7%（43/130）、（）21.5%（28/130）、（）23.8%（31/130）。各组表达见表1。

表1 Ki-67阳性表达与临床病理特性的关系（略）

同组间高表达比较，*:P<0.01.

2.2 乳腺癌Ki-67高表达率与其肿瘤细胞的DNA指数及DNA非整倍体率均明显正相关（P<0.01），见表2。

表2 Ki-67表达与DNA含量、倍体的关系（略）

同组中与低表达比较，*:P<0.01.

3 讨论

Ki-67抗原是位于第10号染色体上与增殖相关的非组核蛋白，主要功能与细胞合成代谢有关。除了G 0 期和G 1 早期外，其他各期均有此抗原表达，M期达到高峰［1］ 。许多文献报道Ki-67异常表达程度与多种肿瘤的临床病理特性和预后有关［7-8］ 。已有研究发现Ki-67表达与乳腺癌分化、淋巴结转移和预后密切正相关［4-5］ ，但近年也有学者报道Ki-67表达与乳腺癌年龄、临床分期和淋巴结转移无关［6］ 。

本研究结果显示，癌旁正常的乳腺组织无Ki-67阳性表达，而乳腺癌有78.5%Ki-67阳性表达率，从蛋白水平证实乳腺癌细胞生长调节失控、增殖异常活跃。笔者研究中亦有部分不同分期和淋巴结转移阳性的浸润癌呈Ki-67表达阴性，表明Ki-67尚不足以作为乳腺组织细胞是否恶性变的标志。研究观察到，随TNM分期的进展，乳腺癌组织Ki-67高表达率显著增高;伴腋淋巴结转移者Ki-67高表达率显著高于无转移者的高表达率，与文献报道相符［4-5］ 。提示检测Ki-67抗原表达对评估乳腺癌恶性生物学行为有一定的价值。

笔者注意到，属于浸润性非特殊癌类型的肿瘤，如浸润性导管癌、浸润性小叶癌和单纯癌，其Ki-67表达率比属于浸润性特殊癌的黏液腺癌和小管癌的Ki-67表达率相对增高，但差异无显著性，可能与后组的病例数较少有关。有必要扩大病例数进一步研究，才能对Ki-67表达率与乳腺癌组织学类型之间 关系得出更确切的结论。

本组资料还显示，在乳腺癌中Ki-67表达与其肿瘤细胞DNA倍体之间存在显著正相关关系，即Ki-67高表达组的乳腺癌细胞DNA含量和DNA非整倍体率均显著高于Ki-67低表达组者，反之亦然。提示乳腺癌Ki-67表达情况与其细胞的增殖程度是一致的。以往研究已表明，肿瘤细胞DNA倍体情况也与其恶性程度和预后关系密切［2-3］ 。因此笔者认为，联合检测Ki-67和DNA倍体，对乳腺癌恶性程度判断将更有裨益。有报道Ki-67表达量和DNA非整倍体率两指标均高的胃癌患者容易发生肝、卵巢等远隔脏器转移［9］ 。在乳腺癌中是否也存在类似情况，能否将其用作临床甄别高危病例的指标，笔者正在进一步随访中。

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