【摘要】 目的 分析乳腺癌中血管内皮生长因子（VEGF）的表达状况及其对预后的影响。方法 检测58例乳腺癌组织切片中VEGF及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达状况，统计分析VEGF表达与PCNA、雌激素受体（ER）表达的关系，与乳腺癌组织学分级的关系，并结合临床随访资料进行生存分析。结果 VEGF阳性表达33／58，组织学分级Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅲ级之间VEGF表达有显著性差异，P=0.037,VEGF表达阳性组PCNA的表达显著高于阴性组且其生存时间显著低于后者；COX模型比例风险回归分析显示，VEGF表达是影响乳腺癌预后的独立因素之一。结论 乳腺癌中VEGF的表达显著影响预后,是独立的预后因子.

【关键词】 乳腺癌;VEGF；免疫组化;预后

Expression of VEGF and its significance in breast cancer

CAO Rong|hua,YUAN Hong|yin,YANG Guo|liang

Institute of Organ Transplantation,Affiliated Tongji Hospital,

Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology ,Wuhan 430030,China

Abstract:Objective To research the expression of VEGF and it's influence to prognosis to breast cancer. Methods A retrospective analysis of the breast cancer tissue was examined immunohistochemically for VEGF and PCNA,and the data were analysed by SPSS statistic software according to clinical material . Results The positive expression of VEGF was 33/58.It was significantly higher VEGF expressing in higher histological grade and higher PCNA expessing group.However accompanied with poor prognosis.Cox proportional hazard model indicated that the positive expression of VEGF correlated positively with decreased survial(risk ratio=3.37,P=0.02). Conclusion The expression of VEGF had a significantly influence to prognosis of breast cancer,and it was a independent risk factor.

Key words：Breast cancer;VEGF; Immunohistochemistry; Prognosis

恶性实体肿瘤的生长、扩散和转移都依赖于其间质血管的生成，研究表明，血管生成因子在恶性实体瘤的发生、发展和转移中起重要作用。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）是其中促血管生成作用最强的一种[1]。本文将探讨VEGF在乳腺癌的表达状况，结合临床随访资料，分析VEGF与乳腺癌的预后关系。

1 材料与方法

1.1 材料 本实验采用武汉大学附属中南医院肿瘤科1988年4月～1995年12月乳腺癌手术后的组织石蜡块58例，临床常规行雌激素受体（ER）检测。

1.2 病例资料 每一病例均具有完整的临床资料，病理诊断及随访资料，本组病例共58例，均为女性，发病年龄自32～74岁，随访时间从1988年4月～2000年9月。

1.3 免疫组化法 采用S|P法，抗VEGF多克隆抗体及S|P试剂盒均购自福建福州迈新公司，实验操作按免疫组化操作规程进行。阳性染色反应判断标准：VEGF和PCNA阳性标准：阳性细胞>10%。每张切片2人双盲计数，至少观察阳性细胞最密集的5个高倍镜视野（5HP），取两人计数的均值。若两人计数结果相差10%以上，则需重新计数。

1.4 乳腺癌组织学分级方法 按Bloom|Richandsom法Nottingham改良方案依据组织分化程度（以腺管的形成为主要依据）、核多形性和核分裂三方面状况计分相加，分为Ⅰ级（3～5分）分化好，Ⅱ级（6～7分）分化中等，和Ⅲ级（8～9分）分化差。

1.5 统计方法 采用SPSS统计软件，做χ2检验，分析VEGF表达与乳腺癌组织学分级、ER表达、PCNA表达的关系及与淋巴结转移的联系，生存分析及COX比例风险模型进行预后判断。

2 结果

2 .1 VEGF、PCNA和ER的表达状况 VEGF阳性染色定位于肿瘤细胞浆内，乳腺癌中VEGF阳性表达33例,阴性表达25例.VEGF表达与患者年龄和淋巴结转移无显著相关性，ER表达情况：19例阴性表达，39例阳性表达。VEGF与ER的表达无显著相关性.但不同乳腺癌组织学分级之间VEGF表达有显著性差异，P=0.037,其结果见表1、表2。表1乳腺癌组织学分级与VEGF表达PCNA表达定位于肿瘤细胞核,阳性表达38例,阴性表达20例。VEGF阳性组与阴性组PCNA表达有显著性差异,P=0.015。表2 PCNA与VEGF表达的卡方检验变量状况VEGF表达(－)(+)合计PCNA(-)13720(+)122638合计253358

2.6 生存分析 生存分析显示，VEGF（+）组与VEGF（-）组患者累计生存率有显著性差异，Log|Rank检验P=0.0337，见图1。采用SPSS统计软件COX模型单因素比例风险回归分析发现，VEGF使乳腺癌患者死亡风险变大，危险度为3.088,与预后显著相关，P=0.020。而多因素回归显示，VEGF、淋巴结转移和ER表达是影响乳腺癌患者预后的独立因素。

3 讨论

新生血管的不断形成是肿瘤生长的必要条件，当实体肿瘤生长直径达到或超过1mm时，就需要新生血管的营养支持[2]。VEGF的表达与恶性肿瘤血管生成密切相关。癌细胞是产生VEGF的主要场所。VEGF又称为血管渗透因子，是一种内皮细胞特异性有丝分裂原，其两种受体Flt/Flk为酪氨酸蛋白激酶型膜受体，与VEGF有高度的亲和力[3,4]。VEGF与受体的结合刺激血管内皮细胞的增殖，并促进血管的渗透性，有助于肿瘤细胞侵出血管，促进肿瘤侵袭和转移。

Yamamura T等报道[5]，VEGF的过度表达和扩增与大肠癌的肝转移高度相关，有肝转移者的微血管密度(Microvessel density,MVD)显著高于无肝转移者；Masuya D等[6]的研究指出，血管生成因子，尤其是VEGF对非小细胞肺癌的预后有显著的影响。

本组研究中，VEGF的表达与乳腺癌的组织学分级密切相关，而乳腺癌的组织学分级从癌细胞的分化程度、核的多形性和核分裂像三方面综合分析，是反映乳腺癌生物学行为的根本指标。不同组织学分级之间的VEGF表达有显著性差异，表明VEGF对乳腺癌的发生发展和转移有直接的影响。

生存分析显示，高表达VEGF组的患者累计生存率显著低于阴性表达组，Lg|rank检验P=0.020，表明VEGF表达显著影响乳腺癌的生存率；COX模型单因素和多因素比例风险回归结果发现：VEGF表达是影响乳腺癌预后的一个重要因素，而且是独立的预后因子之一。其相对危险度为3.088,表明VEGF阳性表达者的死亡风险是阴性表达者的3倍以上。

血管生成是肿瘤发生发展的早期事件，积极干预肿瘤血管生成有可能成为恶性肿瘤治疗的重要措施。血管的新生受多种因素调节，正性调节因子主要有VEGF、PDGF（血小板衍生生长因子）、TGF（转化生长因子）和 FGF（成纤维细胞生长因子）等，它们促进血管的新生和生长；而负性调控因子是抑制血管生长的因素，主要有血管抑制素、内皮抑制素、紫杉醇、维甲酸和烟曲霉素及其内似物TPN|470等。利用血管生成抑制剂特异性的抑制血管内皮细胞增殖活性，理论上可有效抑制恶性肿瘤的生长和转移。McNamara DA等[7]体外实验及在大鼠的体内实验均表明，Tamoxifen直接阻止VEGF对内皮细胞的作用，可作为VEGF依赖性肿瘤的辅助治疗措施。

【参考文献】
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[2] Boehm|Viswanathan T. Is angiogenesis inhibition the Holy Grail of cancer therapy?[J].Curr Opin Oncol, 2000,12(1):89|94.

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[4] Giatromanolaki A,Sivridis E,Brekken R,Thorpe PE,etal.The angiogenic vascular endothelial growth favtor/flk|1(KDR)receptor pathay in patients with endometrial carcinoma[J].Cancer,2001,92(10) :2569|2577.

[5] Yamamura T,Tsukikawa S,Yamada K,etal.Morphologic analysis of microvessels in colorectal tumors with respect to the formation of liver metastases[J].J Surg Oncol,2001,78(4):259|264.

[6] Masuya D,Huang CI C,Liu D,etal.The intratumoral expression of vascular endothelial growth factor and interleukin|8 associated with angiogenesis in nonsmall cell lung carcinoma patients[J].Cancer,2001,92(10):2628|2638.

[7] McNamara DA,Harmey J,WangJH,et al.Tamoxifen inhibits endothelial cell proliferation and attenuates VEGF|mediated angiogenesis and migration in vivo[J].Eur J Surg Oncol ,2001,27(8):714|718.