【摘要】 目的 研究乳腺癌手术前细针穿刺涂片免疫细胞化学检测(ICA)P53基因蛋白的表达及意义。方法 对86例乳腺癌手术前进行FNA涂片，应用ICA乳腺癌P53基因蛋白在FNA涂片上的表达情况，并与术后病理组织切片上的P53基因蛋白的表达进行对照。结果 乳腺癌FNA涂片ICA检测P53基因蛋白的阳性率为30.2%(26/86)，相应病理组织切片的阳性表达率为27.9%(24/86)，手术前ICA和手术后免疫组化检测（IHA）P53基因蛋白的表达结果具有显著的一致性(χ2=53.71, P<0.005)，两种方法之间无差异性。P53基因蛋白在FNA涂片上的阳性表达率与乳腺癌的病理组织学分级(χ2=8.671,P<0.025)、临床分期(χ2=10.20,P<0.01)明显正相关，与雌孕激素受体显著负相关(ER:χ2=18.38,P<0.005.PR:χ2=6.351,P<0.025)。结论 乳腺癌P53基因蛋白在FNA涂片上的表达和组织切片上的表达具有显著的一致性，无差异性。P53阳性是乳腺癌不良生物学行为的指标。本研究对乳腺癌的早期诊断、早期判断其生物学行为、指导治疗判断预后具有重要意义。

【关键词】 乳腺癌;细针穿刺抽吸（FNA）;免疫细胞化学检测（ICA）; P53基因

Expression and significance of P53 gene on the preoperative FNA smears of breast cancer by immunocytochemical assaying

LIU Yu-he, WANG Qing-bao, SUN Xi-bo，WANG Peng

Dept. of general surgery, Affiliated Hospital, Taishan Medical College, Taian 271000, China

Abstract: Objective: To study the expression and significance of P53 gene on the preoperative FNA smears of the breast cancer by immunocytochemical assaying(ICA). Methods Using immunocytochemical assay, we investigated the expression of P53 gene protein on FNA smears of 86 cases of preoperative breast cancer, and compared with its expression on the postoperative histological sections. Results The positive expression rate of P53 gene protein on the FNA smears of breast cancer by ICA was 30.2%(26/86), and it was 27.9%(24/86) on the postoperative histological sections. The results of P53 expression by ICA and immunohistochemical assay(IHA) had significant identity(χ2 =53.71,P<0.005), and had no difference. There were positive correlation between expression of P53 on FNA smears and histological grading (χ2 =8.761,P<0.025), between its expression and clinical TNM stages(χ2=10.20,P<0.01). But there was negative correlation between its expression and ER(χ2=18.38, P<0.005)、PR(χ2 =6.351,P<0.025). Conclusion: There were significant identity and no difference of P53 expression between on FNA smears and on the postoperative histological sections. P53 was a director of poor biological behavior of breast cancer. This study had important significance for diagnosing breast cancer early, judging their biological behavior early, directing their treatment and predicting their prognoses.

Key Words: breast cancer; fine-needle aspiration(FNA) ; Immunocytochemical assay (ICA) P53 gene

乳腺癌为女性中最常见的恶性肿瘤之一，其诊断和生物学行为受到人们的广泛重视。目前较多地报道应用免疫组化检测乳腺癌的某些生物学指标，进行手术后回顾性分析，探讨与生物学行为的关系。P53基因是位于17号染色体短臂上的癌基因，对控制细胞的增生起着重要的作用，该基因突变是人类恶性肿瘤中常见的基因改变之一，我们在术前应用细针穿刺抽吸（Fine-needle Aspiration, FNA）涂片进行免疫细胞化学检测（Immunocytochemistic Assay, ICA）乳腺癌P53癌基因蛋白的表达情况，并探讨与乳腺癌临床指标之间的关系，以期手术前对病人生物学行为作出预见，进一步指导乳腺癌的治疗改善预后。

1 材料和方法

1.1 临床资料

本组病例为我们医院普外科近10年间住院的乳腺癌患者，术前行FNA涂片和术后石蜡切片得到确诊，行FNA涂片前均未经任何化疗和放疗。本组选择资料完整病例86例，均为女性乳腺癌，年龄27岁～73岁，平均42.6岁。全部为原发性乳腺癌，组织学分级I级23例，II级43例，III级20例。临床TNM分期一期20例，二期51例，三期15例，无四期病例。腋淋巴结阳性者53例。

1.2 方 法

1.2.1 标本采集方法

FNA涂片。用22标准号针头（国内常用7-9号）固定于10ml的空针上，对疑患有乳腺癌者，患侧乳腺常规消毒，术者用左手消毒手指后通过触诊确定乳腺肿块的部位，右手持针对准乳腺肿块穿刺或在超声引导下进行穿刺，刺入乳腺肿块后空针回抽5 ml，产生一定的负压，空针在肿块内前后或上下进退穿刺抽吸，见有少量组织细胞进入空针后保持负压拔出针头。将抽吸的组织细胞进行涂片，分别作H-E染色确定诊断后，再行免疫细胞化学染色。

1.2.2 染色原理

本实验采用卵白素－生物素－过氧化物酶复合物（Avidin-Biotin-Perospidase Complex, ABC）法，简称ABC法。先由一抗（P53抗体）和相应的特异性抗原结合形成复合物，生物素化的二抗（抗－抗体）与之结合，最后ABC和生物素二抗结合，形成抗原－抗体－生物素化二抗－ABC，在过氧化物酶作用下由DAB显色剂显色。试剂采用P53癌基因蛋白免疫组化ABC法染色试剂盒。

1.2.3 结果判断

光镜下观察P53癌基因蛋白ICA阳性表达者为细胞核和细胞浆内出现棕黄着色。

1.2 统计学处理

结果采用统计学χ2检验，根据P值作出判定。

2 结 果

2.1 P53癌基因蛋白在乳腺癌术前FNA涂片上的表达和病理组织切片上表达的关系（表1）。表1 86例乳腺癌术前P53基因免疫细胞化学检测和术后免疫组化检测的关系免疫组化检测（略）

本组86例乳腺癌在术前FNA涂片上进行了免疫细胞化学检测P53癌基因蛋白的表达，同时在相应的术后病理组织切片上进行了P53癌基因蛋白的免疫组化研究，免疫细胞化学检测P53癌基因阳性表达率为30.2%(26/86)，免疫组化的阳性率为27.9%(24/86)。两种方法其结果具有显著的一致性(χ2=53.71, P<0.005)，两种检测方法之间无差异性。

2.2 乳腺癌患者术前P53癌基因蛋白的表达与其组织学分级、肿瘤大小、腋淋巴结状况和临床TNM分期的关系（表2）。表2 P53癌基因蛋白ICA阳性表达与临床指标的关系临床指标例数P53阳性表达例数（略）

P53癌基因蛋白的阳性表达与组织学分级（χ2=8.671, P<0.025）、临床分期（χ2=10.20, P<0.01）明显正相关，随分级、分期的增加其表达阳性率逐渐增高，但与肿瘤大小和腋淋巴结状况的关系不大。3.3 乳腺癌患者术前P53基因蛋白的表达与雌、孕激素受体（ER、PR）表达的关系（表3）。表3 P53癌基因ICA阳性表达与乳腺癌ER、PR表达的关系（略）

3 讨 论

P53基因是一种抑癌基因。P53基因分野生型P53（Wildtype P53,WtP53）和突变型P53（Mutanttype P53,MtP53）。实际上利用免疫组化方法只能检测到突变型P53的表达，这是因为WtP53在正常组织内含量低，半衰期短仅30～60分钟。因此免疫组化的敏感性无法检测到如此微量的抗原成份，检测到的只是MtP53。当P53发生突变后，能和进入组织内的各种病毒蛋白、WtP53蛋白、正常等位基因蛋白和热休克蛋白等结合形成稳定的复合物，在组织内的半衰期长，含量逐渐积累。WtP53抑癌基因在正常细胞中参与细胞G0期进入G1期的负调节，从而控制细胞的增生。同时发现WtP53还具有促进细胞死亡的功能［1,2］，可诱导细胞的程序性死亡(Programmed Cell Death ,PCD)或称为凋亡(Apoptosis)，其机制与调节转录的功能有关，WtP53可以特异性的结合到一个特殊的DNA序列上，通过抑制或激活其它基因的转录从而降低细胞对凋亡刺激的抵抗力，在正常细胞中WtP53表达水平很低，但在细胞周期控制中的作用很大，尤其是对于因DNA损伤而诱发的细胞凋亡来说，WtP53的表达是必不可少的。然而MtP53则相反，它可抑制细胞的程序性死亡。有实验证实［3］将P53基因经细胞转染至无P53基因的白血病细胞中，发现细胞出现凋亡，当P53基因突变后则丧失了启动凋亡的能力，如用抗MtP53基因的单克隆抗体与之结合，使MtP53失活则又能非常有效地介导培养中的白血病细胞出现凋亡。可见失去正常P53功能的突变型P53，其结果使肿瘤细胞数目增加，促使细胞呈现无止境地生长而凋亡受到抑制。

本研究应用FNA涂片免疫细胞化学检测乳腺癌手术前MtP53蛋白的阳性表达出现在癌细胞的细胞核和细胞浆内，表达阳性率为30.2%，与近年来文献报道一致。Bozzetti报道［6］MtP53的阳性表达率为26%(19/74)。本研究发现MtP53蛋白的阳性表达率与病理组织学分级呈显著正相关，说明分级越差的乳腺癌MtP53的表达率越高。MtP53基因蛋白的阳性表达与肿瘤大小、腋淋巴结状况无关，研究结果与Colecchia的结果一致［7］。MtP53的表达与乳腺癌的腋淋巴结状况的关系目前观点不<