【摘要】 目的 探讨乳腺癌组织COX2表达的临床意义及其与VEGF表达的关系。方法 免疫组织化学SABC法检测 48例乳腺癌组织及12例正常乳腺组织COX2及VEGF蛋白表达,分析其与临床病理参数的关系。结果 正常乳腺组织中未见COX2表达，乳腺癌组织COX2的阳性表达率为79.17%。COX2的阳性表达率与肿瘤的病理分级、有无淋巴结转移有关。乳腺癌组织中COX2与VEGF表达密切相关 (r=0.607,P＜0.05)。结论 COX2在乳腺癌组织中表达上调,COX2可能在乳腺癌发生发展中起着重要的作用。

【关键词】 乳腺癌；环氧合酶2；VEGF

研究表明,环氧合酶 2(COX2)在多种恶性肿瘤的癌变过程中起重要作用〔1〕,血管内皮生长因子(VEGF)具有很强的血管生成和增强血管通透性作用,其表达的强弱直接影响着肿瘤的生长、浸润和转移〔2，3〕。为探索COX2与乳腺癌发病的关系,本研究采用免疫组织化学技术,研究COX2在乳腺组织中的表达及其对乳腺癌组织血管形成的影响。

1 材料与方法

11 标本来源 收集2002年12月～ 2004年12月开放手术切除的乳腺癌标本48例,经病理检查证实为乳腺癌。以12例正常乳腺组织作为对照组。年龄45～73岁,平均49岁，术前未经任何抗癌治疗。肿瘤病理分级按WHO诊断标准进行分类和分级。48例标本中，浸润性导管癌41例，髓样癌7例；Ⅰ级10例，Ⅱ级27例，Ⅲ级11例；有淋巴结转移29例，无淋巴结转移19例。标本以 4%的多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,作5 μｍ连续切片,备用。

12 免疫组织化学染色 即用型鼠抗人COX2多克隆抗体及即用型兔抗人VEGF多克隆抗体、SABC染色试剂盒、DAB显色试剂盒均购自武汉博士德公司。采用SABC法免疫组化染色,按SABC染色试剂盒及抗体染色说明书进行操作。以PBS液代替一抗作为阴性对照,用已知染色阳性的肿瘤组织切片作阳性对照。

13 结果判断 COX2、VEGF阳性结果判断标准:以细胞浆内出现棕色或棕黄色颗粒为阳性染色。根据光镜下观察阳性染色的细胞比例 (5个高倍视野下的均数)分为:(1)阴性(-)，染色细胞数＜10%；(2)阳性(+),染色细胞数在10%～50%之间；(3)强阳性()，染色细胞数 ＞50%。

14 统计学方法 计数资料用率(%)表示,组间差异采用χ2检验；COX2、VEGF阳性表达之间的关系采用相关性分析。所有数据在SPSS10.0统计软件上进行。

2 结果

21 COX2的表达与乳腺癌部分临床病理特征的关系 12例正常乳腺组织COX2表达均呈阴性,48例乳腺癌组织中COX2阳性至强阳性表达38例,阳性表达率为79.17%。COX2在乳腺癌组织中的阳性表达率与肿瘤的病理分级、有无淋巴结转移显著相关。随着肿瘤病理分级的增高，COX2的阳性表达率显著增高,淋巴结转移的乳腺癌组织中COX2的表达明显高于未转移者（表 1、图1）。

表1 COX2和VEGF 在乳腺癌中的表达与临床病理参数之间的关系（略）

图1 乳腺癌细胞免疫组化COX2染色（略）

22 VEGF的表达与乳腺癌部分临床病理特征的关系 12例正常乳腺组织VEGF表达均呈阴性,48例乳腺癌组织中COX2阳性至强阳性表达42例,阳性表达率为87.33%。VEGF在乳腺癌组织中的阳性表达率与患者年龄、组织学类型、病理分级无关，与有无淋巴结转移有一定关系，但无统计学意义（P＝0.076 6）（表 1、图2）。

图2 乳腺癌细胞免疫组化VEGF染色（略）

23 乳腺癌组织中COX2和VEGF表达的关系 乳腺癌组织VEGF阳性表达组中,COX2的阳性表达率为85.71%；VEGF阴性表达组中,COX2的阳性表达率为14.29%，两者之间差异具有显著性 (P＜0.05)（表2）。

表2 COX2和VEGF表达之间的关系（略）

3 讨论

COX2是催化花生四烯酸转化为前列腺素和其他类前列腺物质的限速酶。COX有两种同工酶,即COX1和COX2，COX1属于结构性基因产物,在正常组织和细胞中表达,而COX2是一种诱导酶,在正常生理状态下多数组织内几乎不表达,当细胞受到各种刺激时迅速合成,表达增加〔4〕。目前研究证实，COX2除参与炎症反应外,还与肿瘤的发生、发展密切相关。近年来，COX2在乳腺癌中的作用也逐渐受到人们的关注。Denkert等〔5〕的研究结果表明乳腺癌细胞中COX2高水平表达,而且其表达与乳腺癌组织类型及浸润程度密切相关。

本研究发现大部分乳腺癌标本中COX2呈不同程度的阳性表达,而12例正常乳腺组织中COX2无阳性表达。而且，COX2在乳腺癌组织中的阳性表达率与肿瘤的病理分级、淋巴结转移情况密切相关,随着肿瘤病理分级的增高，COX2的阳性表达率显著增高；这一发现证实了Pawel等的研究结果〔6〕,提示COX2在乳腺癌发生和发展过程中起着重要的作用,也表明COX2可能可以用于临床监控乳腺癌的进展。

COX2促进肿瘤发生和发展的机制一般认为与COX2可以促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡有关。此外,肿瘤细胞中COX2的过度表达还与新生血管的形成相关。Tsujii等〔7〕经研究发现,体外转染COX2基因的人结肠癌细胞株在过度表达COX2的同时,促血管生成因子VEGF、bFGF、PDGF、内皮素1等均明显上调。而COX2抑制剂NS398可明显抑制这些促血管生长因子的表达,动物实验也证实选择性COX2抑制剂Celecoxib能抑制小鼠移植瘤新生血管形成〔8〕。研究结果表明乳腺癌组织中COX2与VEGF表达呈明显的等级相关性。肿瘤组织中血管生成诱导因子的大量表达是诱导肿瘤血管生成的主要原因之一,迄今已知的各种血管生成诱导因子中,VEGF已被证实是作用最强、并在肿瘤和正常组织中起着最重要作用的促血管生成因子之一〔9〕。乳腺肿瘤组织中COX2与VEGF表达的密切相关性提示乳腺肿瘤中COX2可能通过促使VEGF表达,从而促进肿瘤新生血管生成,进而促进肿瘤生长和转移，抑制COX2活性对乳腺癌的防治可望具有较为广阔应用前景。

【参考文献】
1 Christopher S，Tsujii M，Reese J,et al.Host cyclooxygenase2 modulates carcinoma growth〔J〕.J Clin Invest，2000；105(11)：158994.

2 Takahashi Y，Susan L，Kitadai Y,et al.Vessal counts and expression of vascular endothelial growth factor as prognostic factors in node negative colon cancer〔J〕.Arch Surg，1997；132:541.

3 Guidi AJ,AbuJawdeh G，Tognazzi K，et alExpression of vascular endothelial growth factor and its receptors in endodometrial carcinoma〔J〕.Cancer，1996；78(3):45460.

4 Williams CS，Dubos RN.Prostaglandin endoperoxide synthetase：why two isoforms〔J〕.Am J Physiol，1996；270(3):393400.

5 Denkert C，Winzer KJ，Muller BM,et al.Elevated expression of cyclooxygenase2 is a negative prognostic factor for disease free survival and overall survival in patients with breast carcinoma〔J〕.Cancer，2003;97:297887.

6 Surowiak P，Materna V,Matkowski R.Relationship between the expression of cyclooxygenase 2 and MDR1/Pglycoprotein in invasive breast cancers and their prognostic significance〔J〕.Breast Cancer Res，2005;7(5)：R86270.

7 Tsujii M，Kawano S，Tsuji S,et al.Cyclooxygenase regulates angiogenesis induced by colon cancer cells〔J〕.Cell,1998；93(5):70516.

8 Masferrer JL，Leahy KM，Koki AT,et al.Antiangiogenic and antitumor activitiesof Cyclooxygenase2 inhibitor〔J〕.Cancer Res,2000；60(5):130611.

9 Koochekpour S,Merzak A，Pikington GJVascular endothelial growth factor production is stimulated in response to growth factors in human glioma cells〔J〕.Oncol Rep，1995；2:105961