【摘要】 目的 探讨乳腺癌组织中骨桥蛋白（OPN）、骨连接蛋白（ON）的表达及其临床病理意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测61例浸润性乳腺癌OPN、ON的表达，并与临床病理特征及钼靶X线征象进行对比分析。结果 本组乳腺癌组织中OPN和ON的阳性高表达率分别为72.13%和77.05%，均明显高于乳腺良性肿瘤（44.83%和37.93%，P<0.05）。钼靶X线发现微钙化的钙化组乳腺癌病例中OPN、ON高表达率分别为87.50%和91.67%，明显高于无钙化组(62.16%和67.57%，P<0.05)。（P＞0.05 ）。结论 OPN、ON在乳腺癌组织中高表达，OPN、ON高表达与钼靶X线微钙化征象密切相关，但与各临床病理特征及X线片中毛刺征无相关性。

【关键词】 乳腺癌骨桥蛋白骨连接蛋白；钼靶X线摄影

Expression and Clinicopathlogic Significance of OPN and ON in Breast Carcinoma

YANG Guang1,2, ZHANG Xianghong1 , WANG Xiaoling3 , ZHAO Junjing2, ZHANG Zhigang1, YAN Xia1 , WANG Junling1

1.Lab of Experimental Pathology, Hebei Medical University, Shijiazhuang,050017,China;2.Department of Radiology,The Fouth Hospital, Hebei Medical University; 3.Department of PathologyAbstract：Objective To investigate the expressions of osteopontin (OPN) and osteonectin (ON) and their clinicopathologic significance in breast carcinoma. Methods Immunohistochemical method was used to examine the expression of OPN and ON in 61 cases invasive breast carcinoma The relationships of OPN and ON expression with clinicpathologic and mammographic features were analyzed. Results The high positive expression rates of OPN and ON expression in 61cases breast carcinoma were 72.13% and 77.05% respectively, which were significantly higher than that in benign breast tumors (P<0.05). The high positive expression of OPN and ON in cases with microcalcification in mammography was significantly higher than that in the cases without microcalcification (P<0.05). No statistical relationship was found between the expressions of OPN and ON in breast carcinoma with the ages of patients, pathologic types, differentiation, lymph node metastasis as well as spicule signs in mammography. Conclusion The expression of OPN and ON is higher in breast carcinoma, which is significantly related with microcalcification, but not with other clinicpathologic features.

Key words：Breast carcinoma; Osteopontin; Oteonection; Mammography;

骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）是一种含有特异短肽RGD（ArgGlyAsp）序列的磷酸化糖蛋白。骨连接蛋白（Osteonectin，ON）又名SPARC，即富含半胱氨酸（Cys）的酸性蛋白（Secreted Protein Acidic and Rich in Cystein）。最近研究显示，OPN、ON不仅与骨组织的矿化有关，而且在肿瘤的侵袭转移方面具有重要作用。目前，就乳腺癌OPN、ON表达与其临床病理意义的研究较少；而与其钼靶X线征象相关性研究尚未见报道。有鉴于此，我们采用免疫组织化学SP方法，观察了二者在乳腺癌组织中表达情况，探讨了其与临床病理因素、影像学表现及患者预后之间的关系。

1 资料与方法

1.1 资料

收集我院2003年9月～2004年11月，行改良根治术，且钼靶X线检查及临床资料齐全的61例浸润性乳腺癌组织标本。患者均为女性，28～75岁，中位年龄50岁，其中，28～40岁9例，41～55岁39例，55～75岁13例。均单侧发病，右乳27例，左乳34例。按WHO肿瘤病理诊断标准，其中浸润性导管癌34例，浸润性小叶癌20例，其他类型7例；其中高分化11例 ，中度分化45例，低分化5例。病理证实腋下淋巴结转移31例（50.82%）。根据1997年国际抗癌联盟（UICC）临床TNM分期标准：Ⅰ期、Ⅱa期共28例（45.90%），Ⅱb期16例（26.23%），Ⅲ期17例（27.87%）。由三位有经验的影像诊断医师阅片，参照美国放射学会乳腺影像报告及数据系统（BIRADS）标准，对癌瘤微钙化征象及毛刺征进行描述和分组，其中微钙化表现24例（39.34%），包括肿块伴微钙化18例和单纯微钙化6例，见图1；毛刺征24例（39.34%），包括肿块伴有毛刺16例，见图2，星芒状长毛刺8例。收集同时期门诊手术病理证实的乳腺良性肿瘤29例（导管内乳头状瘤8例，纤维腺瘤21例）做对照分析。

1.2 方法

鼠抗人OPN单克隆抗体、羊抗人ON多克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司。SP试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。免疫组化SP法严格按照说明书操作步骤进行，采用微波抗原修复。结果判定：PBS代替一抗作空白对照，胞浆和胞膜中棕黄色颗粒染色为OPN、ON阳性表达细胞。选择5个高倍视野，按阳性细胞数占同类细胞的百分比，将结果分为：阴性（-），<5％ ；弱阳性（+），5％～25％；阳性（++），26％～50％；强阳性（+++），>50％。 其中（-）和 （+）为低表达，（++）和 （+++）为高表达。

1.3 统计学处理 SAS统计学软件χ2 检验，P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 OPN、ON在乳腺癌组织中的表达

OPN、ON表达位于癌细胞胞膜及胞浆，见图3、4，此外，血管平滑肌细胞及乳导管上皮细胞亦可见表达。本组病例，OPN蛋白阳性表达率为83.61%（51/61），其中高表达率为72.13%（44/61）。ON蛋白阳性表达率为88.52%（54/61），其中高表达率为77.05%（47/61）。二者均高表达36例。对照组29例乳腺良性肿瘤中OPN、ON高表达13例和11例，高表达率分别为44.83%和37.93%。乳腺癌组织OPN和ON高表达率均明显高于乳腺良性肿瘤（OPNχ2=6.310，P=0.012；ONχ2=13.126，P=0.001）。

2.2 OPN、ON表达与乳腺癌各临床病理特征的关系

统计学结果显示，本组病例年龄组、临床分期、组织类型、分化程度及淋巴结转移各组间OPN、ON高表达率均无显著差异（P＞0.05），见表1。

2.3 OPN、ON高表达与乳腺癌钼靶X线征象的关系

钙化组乳腺癌OPN、ON高表达率明显高于无钙化组，提示乳腺癌组织OPN、ON高表达与钼靶片中微钙化表现密切相关。毛刺组乳腺癌OPN、ON高表达率均低于无毛刺组，但无统计学意义（P＞0.05），见表2。

3 讨论

OPN和ON作为骨基质蛋白，参与骨组织的矿化形成。最近研究显示二者可能与肿瘤的侵袭转移有关，其机制可能主要是OPN中特异RGD序列能够与分泌整合素及CD44 等受体的组织细胞粘附，诱导细胞迁移[1，2]；ON能够通过影响细胞间的粘附及诱导细胞产生MMPs，降解基底膜，促进肿瘤的转移[3]。

目前，OPN和ON与乳腺癌各临床病理关系的研究观点不一。Rudland等[4]认为OPN表达与肿块大小、组织分级、淋巴结情况等临床病理因素相关；而Tokes、Kim等 [5,6]研究认为无关。我们的研究结果与后者一致。我们认为乳腺癌TNM分期、腋下淋巴结转移等指标的高低与患者的就诊时间有关，主要反映了癌瘤的进展程度，而不能简单作为判断其恶性度及侵袭性高低的指标。OPN、ON高表达与淋巴结转移及癌瘤周围组织浸润无明显相关性，但是二者高表达可能与乳腺癌远处转移有关。研究显示分泌骨基质蛋白的乳腺癌细胞与骨组织具有某种组织亲和性[7]，OPN、ON在乳腺癌血行转移，特别是骨转移中可能发挥了重要作用。

微钙化征象在钼靶片乳腺癌诊断中具有重要价值。Tokes等[5]在对26例乳腺癌研究中提示OPN表达可能与微钙化有关。本组61例浸润性乳腺癌研究显示钙化组与无钙化组间OPN、ON高表达率表1 OPN、ON表达与乳腺癌各临床病理特征的关系表2 OPN、ON表达与乳腺癌钼靶X线征象的关系 *,χ2=4.649，P=0.031；Δ,χ2=4.761，P=0.029均具有显著差异，说明乳腺癌组织中微钙化的出现与OPN、ON的高表达密切相关。钼靶片中微钙化的出现反映了癌组织中OPN、ON的表达水平，为我们从影像学角度预测肿瘤的预后提供了可能，即乳腺癌钼靶片中表现微钙化的者，OPN、ON蛋白高表达率高，癌瘤可能更易发生骨转移，预后不佳。毛刺征被认为是一种癌组织向周围侵润的典型表现，是目前公认的判断良恶性的征象。本组24例表现有毛刺征，研究显示OPN、ON高表达无毛刺组较有毛刺组略高，但无统计学意义，毛刺征尚不能作为判断OPN、ON高表达的影像学指标。

【参考文献】
［1］ Yokosaki Y, Matsuura N, Sasaki T, et al. The integrin alpha(9) beta(1) binds to a novel recognition sequence(SVVYGLR) in the thrombincleaved aminoterminal fragment of osteopontin[J]. J Biol Chem,1999,274(1):3632836334.

[2]Shijubo N, Uede T, Kon S, et al. Vascular endothelial growth factors and osteopontin intumor biology[J]. Crit Rev Oncog,2000,11(2):135146.

[3] Gilles C, Bassuk J A, Pulyaeva H., et al. SPARC/osteonectin induces matrix metalloprote