【摘要】 目的：探讨乳腺癌组织芯片免疫组化结果的可靠性，为临床病理诊断及科研工作提供一种新的可靠的技术方法。方法：对由98例乳腺癌标本构建的组织芯片进行免疫组织化学nm23染色，并对照常规组织切片结果，比较其表达的可靠性。结果：乳腺癌组织芯片免疫组化nm23检测结果与常规组织切片免疫组化结果符合率为91.40％（85/93），二者结果之间无显著差异（P>0.05）。结论：组织芯片上的组织样本具有代表性，可以反映原组织结构的信息，适用于大样本、回顾性的临床研究。

【关键词】 乳腺癌； 组织芯片； 免疫组织化学染色； nm23

Research of the reliability of tissue chip with immunohistochemistry in breast cancerSUN Gang，MA Binlin，ZHAO Feng, et al

（Department of Breast and Headneck Surgical Oncology，Affiliated Tumor Hospital, Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， China）

Abstract： Objective: The reliability of tissue chip in breast cancer with immunohistochemistry was studied. It could provide a new and reliable technique for clinicopathological diagnosis and scientific research. Methods： In tissue chip which was constructed by specimens from 98 patients with breast cancer， was detected the nm23 by immunohistochemical technique， and compared the express of those cases array cores with the whole tissue sections. Results： The coincidence rate of nm23 between the tissue chip and the whole tissue sections were 91.40%（85/93）. There were no significant differences between them (P>0.05). Conclusion: The cores in tissue chip were representative， and could reflected the information of the wholetissue. It could be sed on large sample and retrospective clinical research.

Key words： breast cancer； tissue chip； immunohistochemistry； nm23

随着人类基因组计划的完成以及基因芯片（gene chip）、蛋白芯片（protein chip）日益广泛的应用，越来越多的与肿瘤相关新的候选基因或蛋白被人们发现。但现行的常规病理组织切片技术无法快速、高效的对众多的临床肿瘤标本进行检测,从而研究这些新基因或蛋白的功能，从中筛选与肿瘤诊断、治疗及预后相关的基因。组织芯片( tissue chip)技术正是在此背景下应运而生发展起来的一种高通量的生物芯片技术［1］，它能够高效地对大量组织样本进行分析，为肿瘤病理研究工作开辟了新的天地。由于组织芯片是从石蜡包埋的组织标本中选择具有代表性的区域穿刺构建而成的，芯片上每个位点大小有限，同时肿瘤细胞具有较大的异质性，因此运用组织芯片检测肿瘤标志物的有效性和可靠性就成了人们关注的焦点。在参考近年相关文献［2,3］的基础上，我们构建了包含98例乳腺癌标本的组织芯片，运用免疫组化染色方法进行nm23检测，与存档的常规组织切片nm23免疫组化结果比较，评价组织芯片免疫组化结果的可靠性。

1资料与方法

1.1一般资料收集新疆医科大学附属肿瘤医院2004年间初诊收治并经手术切除的原发性乳腺癌石蜡包埋标本98例，除外合并其它肿瘤以及术前行新辅助化疗病人。所有病例均有组织病理确诊，并与存档的常规病理切片免疫组化nm23结果做对照。

1.2乳腺癌组织芯片制作每个供体蜡块分别选取3个最有代表性的肿瘤区域穿刺构建乳腺癌组织芯片，设计组织阵列点数为40，采用在镜下容易识别的正常人肝组织标记方向。芯片上每个标本直径1.0 mm，相邻两样本之间的距离为1.0～1.5 mm。

1.3免疫组织化学染色采用二步法免疫组化（PV9000）进行免疫组化nm23检测。

1.4结果判断nm23阳性细胞胞浆中呈现有棕黄色细颗粒。采用双盲法，由两位病理科医师对组织芯片上每个位点的免疫组化染色进行评价，分别记数每个位点高倍镜下100个细胞，取其平均数。阳性细胞数≤25％标记为（－），>25％为阳性（＋）。

1.5组织芯片与常规组织切片nm23免疫组化表达一致性的评价标准对组织芯片上每个标本的各个位点的免疫组化结果结合起来与常规组织切片nm23免疫组化结果进行对比，评判组织芯片与常规组织切片的染色结果表达的符合率，标准如下：（1）如果该标本在组织芯片上位点全部脱落丢失或因为卷曲、移位等原因无法读取结果时，视为“无法评价”。（2）如果该标本在组织芯片上有1个位点可供评价，当其与常规组织切片免疫组化结果一致时判断为“符合”；否则判断为“不符合”。（3）如果该标本在组织芯片上有2个位点可供评价，当2个位点都与常规组织切片免疫组化结果一致时判断为“符合”；否则判断为“不符合”；当2个位点结果不一致时，判断为“无法评价”。（4）如果该标本在组织芯片上有3个位点可供评价，其中有 2个位点与常规组织切片免疫组化结果一致就可以判断为“符合”；否则判断为“不符合”。最后，将乳腺癌组织芯片免疫组化结果与常规组织切片免疫组化结果进行比较，其中“无法评价”均视为“不符合”。分析二者表达一致性和结果可靠性。

1.5统计学处理组织芯片与常规组织切片免疫组化nm23结果可靠性比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2结果

组织芯片上各个位点nm23表达有45个位点组织芯脱落、严重卷曲、移位及为无效组织等原因无法读取结果，按照前述评价标准有5例结果“无法评价”。在可供评价的93例中，存在1个位点的有5例，其中3例两者表达情况符合；存在2个位点的有26例，23例表达情况相符；3个位点全部存在的64例，两者表达符合的有59例。组织芯片与常规组织切片nm23的表达符合率为91.40％（85/93），二者的表达无显著差异(P>0.05)（表1、2）。

表1组织芯片与常规组织切片免疫组织化学nm23表达一致性比较（略）

表2组织芯片与常规组织切片免疫组织化学nm23染色表达（略）

注:χ2＝0.125, P>0.05

3讨论

组织芯片中的组织样本是否具有代表性是组织芯片设计中最重要的问题。首先由于肿瘤形态以及生物学特征的异质性，即使同一个肿瘤，在不同的肿瘤细胞间生物标志的表达水平也不尽一致，特别在多组织起源的肿瘤中这个问题很难避免［4］。其次，组织芯片上组织样本数量越大，组织芯的面积肯定越小，细胞数量也越少。认为直径为0.6 mm的组织芯片不能很好代表整个肿瘤的情况，主张采用标本直径为2.0 mm的组织芯片进行检测。理论上，0.6 mm直径的组织样本可包含600～1 300个以上细胞［1］，足可以反映原组织结构的信息。因此在组织芯片的设计中并不是组织片的数量越多越好，尤其在肿瘤分化程度的差异大或肿瘤的异质性明显时要注意这一点。Kononen等［1］研究证实组织芯片结果与常规病理切片结果一致。Moch等［5］也对针对组织异源性的影响进行了组织芯片与常规病理切片对比性研究，结果显示从普通切片中能观察到的参数从组织芯片中也都得到了。因此在大多数情况下从组织芯片中得到的研究结果应该能够代表原组织。我们的研究结果也表明组织芯片中每个组织样本可以反映原始组织结构的信息，具有可靠的代表性。同时，组织芯片上标本位点的丢失是影响检测结果可靠性的重要因素［4,6,7］。以往的研究发现，在组织芯片切片和染色过程中会导致大约15 %～30 %的芯片位点标本的丢失。如果在组织芯片构建时，每个肿瘤标本只在芯片上构建一个标本位点，就可能会导致有病例标本丢失，从而无法评价结果，大大减低了组织芯片检测的有效性和可靠性。为此，近年来有研究者就组织芯片检测乳腺癌、前列腺癌中肿瘤标志物表达情况的有效性和可靠性进行了探讨［1,6］ ，建议增大样本组织或采取2点甚至多点取材，可有效减少组织芯片和常规组织标本检测结果的差异，提高组织芯片检测的可靠性和有效性［8,9］。理论上，随着每个肿瘤在芯片上标本位点的增加，组织芯片检测的准确性和可靠性会进一步提高。Camp等［10］研究乳腺癌时指出，如每个病理石蜡块中取出直径为0. 6 mm一片组织进行实验与用传统方法相比，90 %实验结果都相互吻合；如果取直径为0. 6 mm的两片组织进行测试，95 %实验结果都相互吻合。认为从经济性和准确性考虑，每个病例取2点是最佳选择，所达到的准确性和可靠性，已经足够用于常规的免疫组化检查。本研究在组织芯片构建时对每个肿瘤标本分别选取3个在形态学上最具代表性的区域进行穿刺，并对比了组织芯片及其对应的常规组织切片中免疫组化nm23的表达情况。研究结果表明乳腺癌组织芯片与常规组织切片nm23的表达符合率为91.40％（85/93），二者表达一致性良好，无显著差异。

【参考文献】
［1］Kononen J， Bubendorf L， Kallioniemi OP， et al. Tissue microarrays for high throughput molecular profiling of tumor specimen［J］.Nat med，1998，4（7）：844847.

［2］罗晓青，曹进，王瑞国，等.手工组织芯片制作［J］.数理医药学杂志，2004，17（3）：278279.

［3］向正华，吕军，蒋平，等.组织芯片技术及其应用［J］.解剖学杂志，2002，25（4）：403406.

［4］Schraml P， Kononen J， Bubendorf L， et al. Tissue microarrays for gene amplification surveys in many different tumor types