【关键词】 乳腺肿瘤； 人表皮生长因子受体２（ＨＥＲ-２）； 荧光原位杂交；免疫组织化学

Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｎ Ｐａｒａｌｌｅｌ ＨＥＲ-２ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｂｏｔｈ ＦＩＳＨ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｉｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｉｓｓｕｅｓ∥

Ｒｅｖｉｅｗｅｒ：ＬＩＵ Ｙａｎ-ｈｕｉ； Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ Ｃｏ-ｗｏｒｋｅｒ：ＺＨＡＮＧ Ｇｕｏ-ｃｈｕｎ

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂｒｅａｓｔ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ； ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２（ＨＥＲ-２）；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）； ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＨＣ）

Ｒｅｖｉｅｗｅｒ’ｓ ａｄｄｒｅｓｓ： Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００８０， Ｃｈｉｎａ

１ 文献类型

诊断。

２ 证据水平

１ｂ。

３ 文献来源

Ｈａｄｉ Ｙ， Ｌｙｎｎ ＣＧ， Ｔｏｄｄ ＳＢ， ｅｔ ａｌ． ＨＥＲ-２ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｕｓｉｎｇ Ｐａｒａｌｌｅｌ Ｔｉｓｓｕｅ-Ｂａｓｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ［Ｊ］． ＪＡＭＡ， ２００４， ２９１（１６）：１９７２－１９７７．

４ 背景

乳腺癌的人表皮生长因子受体２（ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２，ＨＥＲ-２）检测可以预测疗效及预后。检测方法主要有免疫组化法（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＩＨＣ）和荧光原位杂交法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）。前者检测蛋白表达，后者检测基因扩增。不少研究结果认为ＦＩＳＨ的敏感性和特异性较高，应作为一线检测方法。然而，ＩＨＣ操作简便、费用低廉，适于初筛，但多数ＩＨＣ检测方法并未最佳化，而且蛋白表达与基因扩增两者本应具有一致性。本研究对大样本量的乳腺癌标本同时进行了ＨＥＲ-２的ＦＩＳＨ和ＩＨＣ检测，旨在寻找两者的最佳结合方式。

５ 目的

研究乳腺癌ＩＨＣ ＨＥＲ-２弱阳性标本的ＦＩＳＨ检测与ＩＨＣ检测方法的相关性，验证ＩＨＣ ＨＥＲ-２阳性和阴性标本的基因扩增状态。

６ 条件

肿瘤组织标本的多中心回顾性研究。

７ 方法

对乳腺癌组织标本同时进行ＨＥＲ-２的ＩＨＣ检测与ＦＩＳＨ检测，并在检测过程中采用严格的质量控制措施。

８ 对象

２ ９６３例乳腺癌组织标本进入本研究中。其中２ ９１３例标本两种检测方法均成功得出结果，而有１６３例标本未能得出ＦＩＳＨ检测结果，有２５例标本未能得出ＩＨＣ检测结果。

９ 评价指标

主要指标：以ＦＩＳＨ作为标准检测方法，ＩＨＣ方法与其比较，得出ＩＨＣ的阳性预测率、阴性预测率、敏感性和特异性。

次要指标：ＦＩＳＨ的检测费用，ＩＨＣ的检测费用。

１０ 结果

在２ ９６３例标本中总共进行了３ ２６０次ＦＩＳＨ检测， 共有２ ９３３次成功得出结果。所有标本中，共有２ ９１３例标本同时成功得出ＦＩＳＨ和ＩＨＣ的结果。以ＦＩＳＨ作为标准，ＩＨＣ与之比较，其阳性预测值在ＩＨＣ 阳性（＋＋＋以上）标本中为９１．６％，阴性预测值在ＩＨＣ阴性（０或＋）标本中为９７．２％。在ＩＨＣ弱阳性和阳性（＋＋或＋＋＋）标本中其敏感性为９２．６％。在ＩＨＣ阳性标本中其敏感性为９８．８％。ＦＩＳＨ的检测失败率高于ＩＨＣ的检测失败率（５％ ｖｓ ０．０８％），试剂的费用高于后者（■１４０ ｖｓ ■１０），检测时间长于后者（３６ ｈ ｖｓ ４ ｈ），结果判读时间也长于后者（７分 ｖｓ ４５秒）。

１１ 结 论

ＩＨＣ辅以ＦＩＳＨ检测可准确获得乳腺癌ＨＥＲ-２的检测结果。ＩＨＣ弱阳性标本需再行ＦＩＳＨ检测，而阳性和阴性标本无须再检。由于ＩＨＣ阴性结果约占所有病人的７０％～７５％，阳性和弱阳性各占约１５％，因此，只有约１５％的标本需再行ＦＩＳＨ检测。本研究建议的ＩＨＣ和ＦＩＳＨ联合检测ＨＥＲ-２的最佳流程见图１。

１３ 评论

原癌基因ＨＥＲ-２（ＨＥＲ-２／ｎｅｕ或Ｃ-ｅｒｂＢ-２）是生长因子受体家庭成员之一。人的ＨＥＲ-２基因位于染色体１７ｑ２１，编码分子量为１８５ ＫＤ的跨膜糖蛋白，简称为ＨＥＲ-２蛋白或受体。ＨＥＲ-２蛋白具有酪氨酸激酶活性，与其配体之间相互作用，通过细胞间信号传导，调节细胞生长、生存、分化与增殖。研究发现ＨＥＲ-２基因的扩增和／或ＨＥＲ-２蛋白的过表达见于２０％～３０％的浸润性乳腺癌患者，尤其是浸润性导管癌［１，２］。ＨＥＲ-２蛋白的表达水平对乳腺癌患者具有预后和预测意义。ＨＥＲ-２基因的扩增是乳腺癌ＨＥＲ-２蛋白过表达的主要机理［３］。另外ＨＥＲ-２过表达可以预测对蒽环类化疗的敏感性，以及对于转移性乳腺癌采用抗ＨＥＲ-２抗体治疗的有效性［４，５］。

自从１９９８年人源化抗ＨＥＲ-２抗体（曲妥珠单抗，Ｔｒａｔｕｚｕｍａｂ）进入临床应用治疗以来，对于乳腺癌患者ＨＥＲ-２状态最好检测手段的选择成了人们研究的热点。曾经用过的方法有Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ等印迹杂交试验，ＰＣＲ、ＦＩＳＨ、ＩＨＣ以及酶联免疫吸附试验等。经过大量研究积累的经验，ＦＩＳＨ和ＩＨＣ成为人们比较公认可取的方法。但在两者之间是选择ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ-２基因的扩增，还是选择ＩＨＣ检测ＨＥＲ-２蛋白的过表达？由于一些研究报道中ＨＥＲ-２检测结果的不一致性而引起了人们的争论［６，７］。

ＦＩＳＨ是一种以组织为基础的细胞遗传学技术，可适用于存档保存的石蜡包埋组织块，与斑点杂交技术一样，通过检测基因拷贝数来评价ＨＥＲ-２ ＤＮＡ的水平。ＩＨＣ是以组织为基础的蛋白检测方法，可利用抗ＨＥＲ-２单克隆抗体来检测ＨＥＲ-２蛋白。ＨＥＲ-２基因扩增的肿瘤细胞存在明显的膜着色，而含有正常ＨＥＲ-２基因拷贝数的乳腺癌不会有特殊的着色反应。因此ＩＨＣ染色可用于鉴别ＨＥＲ-２基因扩增相关的ＨＥＲ-２蛋白水平与正常ＨＥＲ-２蛋白水平。由于组织结构的保存，ＩＨＣ可在细胞和组织中精确地定位过度表达的ＨＥＲ-２蛋白。用曲妥珠单抗治疗的有效性，需要人源化抗ＨＥＲ-２单克隆抗体与乳腺癌细胞膜上ＨＥＲ-２蛋白的结合。ＨＥＲ-２蛋白是抗ＨＥＲ-２治疗的直接靶点，用ＩＨＣ检测ＨＥＲ-２蛋白的过表达应能更好地预测治疗的反应。由于ＩＨＣ较ＦＩＳＨ费用低，劳动强度小，实验过程短，阅片快且有形态学基础。因此在病理实验室病理医师通常把ＩＨＣ作为ＨＥＲ-２状态评价的首选检测方法。经美国食品药品监督管理局批准推荐采用的ＩＨＣ ＨＥＲ-２检测标准试剂盒有Ｈｅｒｃｅｐ Ｔｅｓｔ（ＤＡＫＯ产品），而ＦＩＳＨ ＨＥＲ-２检测标准测试有Ｐａｔｈ Ｖｙｓｉｏｎ（Ｖｙｓｉｓ产品）和Ｉｎｆｏｒｍ（Ｏｎｃｏｒ／Ｖｅｎｔａｎａ产品）。ＩＨＣ ＨＥＲ-２检测普遍采用的判读规则为０（未观察到着色或 ＜ １０％的肿瘤细胞膜观察到着色）和（＋）（ ＞ １０％的肿瘤细胞观察到淡的／较难觉察的着色，为不完整的细胞膜着色）均为阴性，（＋＋） （ ＞ １０％的肿瘤细胞呈完整的弱至中等强度的膜着色）为弱阳性，（＋＋＋）（ ＞ １０％的肿瘤细胞呈完整的高强度膜着色）为强阳性。对于ＩＨＣ ＨＥＲ-２检测（＋＋）的患者通常建议做ＦＩＳＨ检测以确定有无ＨＥＲ-２基因的扩增，而（＋＋＋）的患者则直接用曲妥珠单抗治疗。

影响ＩＨＣ和ＦＩＳＨ之间一致性的因素包括技术本身的固有因素。如ＩＨＣ中有抗体的选择，所用的技术操作程序、检测前组织的固定，观察者解释方面的差别等。影响ＦＩＳＨ检测的因素包括组织保存、组织形态学、ＤＮＡ探针的选择以及解读的方法等。

Ｙａｚｉｊｉ等［８］采用高度标准化实验流程，严密的质量控制和质量保证措施，对来自美国２９个州１３５个研究机构的２ ９６３个乳腺癌标本，应用ＩＨＣ和ＦＩＳＨ方法在肿瘤组织切片上平行检测ＨＥＲ-２状态，得出了相当有意义和可靠的结果。其研究显示在应用ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ-２基因扩增和应用ＩＨＣ检测ＨＥＲ-２蛋白过表达结果之间有极好的相关性（９１．６％）。ＦＩＳＨ失败率仅５％，ＩＨＣ失败率为０．０８％。阴性的ＩＨＣ检测结果能准确预测９７．２％的肿瘤标本的ＦＩＳＨ结果，假阴性率为２．８％。ＩＨＣ作为筛查工具优于ＦＩＳＨ，既经济又快捷，尤其对大量样本易于操作，敏感性高，实验室内部和实验室间可重复性高。

该项研究验证了目前所采用的ＩＨＣ作为ＨＥＲ-２检测初筛，ＦＩＳＨ对不确定病例（＋＋）进行补充确认的检测方案是可行的。同时也说明任何检测方法只要有严格的标准化的实验室操作规程和标准化试剂，有严格的质量控制和质量保证的要求，均可得到高质量及可靠的检测结果。