【摘要】 目的 探讨食管癌Fhit蛋白表达与临床病理的关系。方法 采用免疫组化方法，检测53例食管癌Fhit表达并分析其与组织学分级、临床分期的关系。结果 癌组织Fhit表达为23/53例（43.4%），而癌旁非肿瘤粘膜为47/53例（88.7%）,相差有非常显著性（P<0.001）。Fhit蛋白表达癌在癌组织学分级中的分布为Ⅰ级癌55.6% (5/9),Ⅱ级癌40.6%(13/32),Ⅲ级癌41.7%（5/12），相差无显著性（P>0.05）。Fhit蛋白表达癌在临床分期中的分布为Ⅰ期癌77.8%(7/9),Ⅱ期癌42.9%（15/35），Ⅲ期癌11.1%（1/9），相差有非常显著性（P<0.001）。结论 Fhit表达状况可能与食管癌的侵犯和转移相关。

【关键词】 食管癌;Fhit;免疫组化

Loss of fragile histidine triad protein expression in esophageal carcinoma

ZHAO Po, LU Ya|li, ZHONG Mei,et al

Department of Pathology, Chinese General Hospital of PLA, Beijing 100853,China

Abstract:Objective To investigate the expression of fragile histidine triad protein, Fhit and the possible relationship between Fhit expression and clinicopathological indices in esophageal carcinoma.Methods Detecting Fhit protein expression in 53cases of esophageal carcinoma and analysing its relationship to histological grade and clinical stage by immunohistochemical method. Results The expression of Fhit protein was positive in 23/53 (43.4%) cases of cancer tissue and in 47/53 (88.7%) cases of adjacent non|tumoral tissue. There was a significant difference in the expression of Fhit protein between cancer and adjacent non|tumoral tissue（P <0.001）. It was showed that Fhit protein was expressed in 5/9 (55.6%), 13/32 (40.6%) and 5/12 (41.7%) cases of carcinomas in grade Ⅰ, Ⅱand Ⅲ, respectively and no difference was found between the grades of tumor (P>0.05). The significant difference in the expression of Fhit was found between cancers on clinical stage Ⅰ(7/9, 77.8%), Ⅱ(15/35, 42.9%) and Ⅲ(1/9,11.1%), respectively (P<0.001). Conclusion Loss of Fhit protein expression may be associated with invasion and metastasis in the esophageal carcinoma.

Key words:Esophageal cancer; Fhit; immunohistochemistry

脆性三联组氨酸基因（Fragile histidine triad, FHIT）最近在国外成功分离并定位于染色体3p14.2[1]。FHIT基因不仅横跨家族性肾细胞癌的易位断点t(3:8)(p14.2;q24),同时也见于大多数人类的共同脆性位点FRA3B。FHIT基因结构及表达的异常见于多种类型的肿瘤细胞株和原发瘤组织，包括肺癌[2,3]、乳腺癌[4]、头颈部癌[5]、胰腺癌[6]、宫颈癌[7]和结直肠癌[8]等,食管癌中FHIT基因或表达的异常国外已有少量研究[9,10]，目前尚未见中国食管癌中FHIT基因蛋白（Fhit）原位表达的报道，我们现报告食管癌Fhit表达状况及其与临床病理指标的可能关系。

1 资料与方法

1.1 样本 53例食管鳞状细胞癌手术标本为我院2000～2001年存档病例，其中男性41例、女性12例；年龄最小为37岁、最大为74岁、平均为57.8岁。其中50岁以下组为11人，50岁以上组为42人；按组织学分级：其中Ⅰ级癌9例、Ⅱ级癌32例、Ⅲ级癌12例；按临床分期：Ⅰ期癌9例、Ⅱ期癌35例、Ⅲ期癌9例；以癌旁非肿瘤形态粘膜作为自身对照。

1.2 免疫组织化学染色 切片脱蜡至水，在3%过氧化氢|甲醇中浸泡10min以灭活内源性过氧化氢酶，采用枸橼酸|微波|SP法在10mmol/L枸橼酸（pH 6.0）中煮沸5min，保温10min，10%羊血清封闭。兔抗人FHIT（Zymed, 购自北京中山公司）抗体稀释度为1：200， 4 oC过夜；免疫组化染色均按SP药盒（Zymed）说明书进行。

1.3 判断标准 胞浆着棕黄色者为Fhit蛋白阳性染色。先按染色强度计分：0分为无色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色；再按阳性细胞所占百分比计分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤10%，2分为11%～50%， 3分为51%～75%，4分为>75%。染色强度与阳性细胞百分比的乘积≥2分为免疫反应阳性（+）。

1.4 统计方法 采用Fisher′s exact确切概率法（双侧）检验判断Fhit表达与各病理指标的相互关系，P<0.05 为相差有显著性意义。

2 结果

2.1 食管癌组织及癌旁粘膜的Fhit表达 Fhit蛋白主要表达于癌旁正常或非肿瘤性食管粘膜和癌组织上皮细胞的胞质以及一些间质细胞如淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞的胞核及胞质（图略）。本组53例正常/肿瘤配对标本中，与癌旁正常或非肿瘤粘膜比较，癌组织Fhit表达阳性者为23/53例（43.4%），癌旁正常或非肿瘤粘膜为47/53例（88.7%）,二者比较，相差有非常显著性（P <0.001）。癌组织Fhit表达阴性为30例（56.6%）（图略）。

2.2 Fhit蛋白表达与癌组织学分级、临床分期的关系 本组53例食管癌标本中，Fhit阳性癌在癌组织学分级中的分布为Ⅰ级癌55.6% (5/9),Ⅱ级癌40.6%(13/32),Ⅲ级癌41.7 %（5/12），各组织学分级癌组间比较，相差无显著性（P>0.05）。Fhit阳性癌在临床分期中的分布为Ⅰ期癌77.8%(7/9),Ⅱ期癌42.9%（15/35），Ⅲ期癌11.1%（1/9），各临床分期癌组间比较，相差有非常显著性（P <0.001）。

2.3 Fhit蛋白表达与患者年龄、性别的关系 本研究结果中Fhit阳性癌在50岁以下年龄组分布为54.5%(6/11)；在50岁以上年龄组的分布为40.5%（17/42），二组比较，相差无显著性（P >0.05）。Fhit阳性癌在男性组的分布为43.9%（18/41）；在女性组的分布为41.7%（5/12），相差无显著性（P >0.05）。

3 讨论

在正常情况下，Fhit存在于大多数正常组织中。国外发现多种肿瘤组织中Fhit表达存在频繁地降低或丢失，并发现与FHIT基因转录及缺失有关，故提示FHIT基因为多种肿瘤的候选抑制基因[1]。Fhit蛋白抑制肿瘤的机理可能与以下方面有关：（1）具有Ap3A水解酶的作用。Ap3A为ATP类似物，能以底物方式提供磷酸基因从而提高蛋白激酶的活性。因此Fhit表达下降时Ap3A水平升高可增强生长信号传导途径，阻断抑制途径或凋亡通道导致肿瘤的发生和发展；（2）mRNA脱帽功能。Fhit蛋白具有去除mRNA 帽类似物的作用，影响重要基因mRNA 的翻译；（3）Fhit|底物复合物作用。Fhit蛋白还可与其底物结合通过Fhit|底物复合物产生抑癌作用，其抑癌作用可能比其水解酶作用更重要。国外Shimada和 Mori等[9，10]发现Fhit蛋白表达降低或丢失在食管肿瘤发生和演化中具有重要作用。本研究与该作者的结果比较，食管癌组织Fhit蛋白表达丢失率为56.6% (30/53),证实了国外的发现。本文中食管癌组织Fhit蛋白表达丢失率略低于国外的结果（77.9%，70%），可能与选用样本及数量的差异有关。本文结果中Fhit蛋白阳性表达癌在各临床分期组中的分布有非常显著性差异（P<0.001），提示Fhit蛋白表达减少与癌组织侵袭和转移相关，亦与国外的结果一致。本文结果提示Fhit蛋白为一种与食管癌发生和转移相关的重要抑癌蛋白。Fhit蛋白用免疫组化方法易于检测，可能成为一种新的分子指标监测患者预后。

【参考文献】
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[9] Shimada Y,Sato F,Wa