【关键词】 食管癌 端粒 免疫组织化学

0 引言

食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，其发生不仅与原癌基因激活和抑癌基因突变或缺乏有关，而且与细胞端粒酶的活化也密切相关。本实验用PCRTRAP法对食管癌组织中的端粒酶活性进行了检测，报道如下:

1 资料和方法

1.1 临床资料

本组36例，其中男19例，女17例。年龄46～68岁，平均60.2岁。术前均经病理确诊。术中将肿瘤组织及距肿瘤边缘10cm以上的正常食管粘膜组织快速取材，超低温保存备用。

1.2 检测方法

将食管癌组织及正常食管粘膜组织各取100mg研磨成匀浆， 加入200μl预冷的裂解液， 经离心后提取2.0μl上清液加入反应液中， 进行PCR循环35次后， 取15μl反应产物进行电泳。 电泳结束后， 经固定、 浸胶、 银染、 显色等步骤， 获得检测结果。

2 结果

端粒酶阳性表达者为50个核苷酸以上位置出现间隔为6bp的等距离梯形产物。分别与阳性对照和阴性对照作比较，36例食管癌中检出端粒酶阳性者30例，占83.3％（30/36），24例正常食管粘膜组织的阳性率为12.5％（3/24），其差别有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

端粒是真核细胞染色体末端特殊的DNA多个重复序列， 含有大量的5′TTAGGG3′结构，其功能是防止染色体末端融合、丢失、重排和DNA降解，维持染色体结构的完整性和稳定性。随着细胞的不断分裂，端粒逐渐缩短，最终细胞发生凋亡。端粒的复制与延长必须依赖端粒酶来完成。端粒酶是一种核糖核蛋白体，能够以自身的RNA为模板，合成新的端粒重复序列，使端粒保持一定长度，从而保持细胞的永生化，甚至转为无限分裂增殖的癌细胞。用PCRTRAP法检测端粒酶活性因具有所需样品量少、敏感性高等优点，自Kim等首创以来，已得到了广泛应用[1]。研究发现，正常组织和良性肿瘤中端粒酶的检出率仅为4%左右，而恶性肿瘤组织中端粒酶的检出率高达84%～95%[2]，因而端粒酶可作为恶性肿瘤特异性标记物之一。本实验对食管癌组织及正常食管粘膜组织端粒酶活性进行了检测，结果显示食管癌组织中端粒酶阳性率83.3％，而正常食管粘膜组织仅12.5％，与文献报道基本一致[3,4]，表明端粒酶在正常组织中失活，而在食管粘膜上皮癌变过程中发挥重要作用，提示食管癌的发生与端粒酶的激活密切相关。由于端粒酶在食管癌中呈高表达，而在正常食管粘膜组织中呈低表达，因此端粒酶活性检测为食管癌的早期诊断和判断预后提供了分子生物学依据，同时也为食管癌基因治疗提供了新的思路。

【参考文献】
［1］ Kim NW, Piatyszek MA, Prowse KR, et al. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer[J]. Science, 1994, 266 (5193): 20112015．

[2] Shay JW, Bacchetti S. A Survey of telomerase activity in human cancer[J]. Eur J Cancer, 1997, 33(5):787795．

[3] 姚柯，余祖滨，闵家新. 端粒酶在食管癌组织中的表达及临床意义[J]. 肿瘤防治杂志, 2004, 11(4): 370371．

[4] 钱晓彬，成静，陈淼. 食管癌组织中端粒酶活性的原位检测及其意义[J]. 肿瘤, 2003, 23(5): 401403．