【摘要】 目的 探讨P27和PTEN在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系。方法 应用免疫组织化学（SP方法）检测P27和PTEN在54例胃癌组织、20例正常胃组织中的表达。结果 胃癌组织中P27和PTEN基因的阳性表达均较正常胃组织降低（P＜0.05）；P27表达与胃癌的淋巴结转移、临床分期密切相关（P＜0.05），与分化程度、性别、年龄无关；PTEN的表达与胃癌的淋巴结转移、临床分期、分化程度密切相关（P＜0.05），与性别、年龄无关；胃癌组织中P27和PTEN基因的表达呈正相关。结论 P27和PTEN基因的表达可能与胃癌的发生、转移有关； P27和PTEN基因表达的检测可作为判断胃癌预后的重要指标。

【关键词】 胃癌 ； PTEN ； P27 ； 免疫组织化学

Ralationships between expressions of P27 and PTEN in

gastric carcinoma and pathological characteristicsWANG Xiang-jiang1, LIN Zhen-biao2(1.Medicial College of Putian University; 2.Putian Public Security Bureau,Putian 35100,China)

Abstract:Objective:To study the expression of P27 and PTEN in gastric carcinoma and their relationship with the clinicopathological features of the disease. Methods：The expression of P27 and PTEN were detected by immunohistochemistry S-P method in 20 specimens of normal gastric mucous and 54 of gastric carcinoma . Rusults ：The positive expression of P27 and PTEN between gastric carcinoma and normal gastric mucous was significantly different （P＜0.05）; The positive expression of P27 and PTEN in gastric carcinoma was much lower than that in normal gastric mucous; The positive expression of P27 was related with lymph node metastasis and TNM stage ,but it was not related with cellular differentiation,sex and age; The positive expression of PTEN was related with lymph metastasis , TNM stage and cellular differentiation, but it was not related with sex and age;There was a positive correlation between the P27 expression and PTEN expression.Conclusion ：The expression of P27 and PTEN were related with the occurrence and metastasis of gastric carcinoma; The detection of P27 and PTEN expression may be used as important indexes to judge pronosis of gastric carcinoma.

Key words: gastric carcinoma； PTEN； P27； immunohistochemistry

人类各种肿瘤形成和发展是非常复杂的。在肿瘤的形成和发展过程中，既有癌基因的激活又有抑癌基因的失活。PTEN又称为（MMAC1/TEP1）基因，是近年发现的一种具有磷酸酶活性的抑癌基因。在调控细胞生长及细胞调亡过程中发挥重要作用，并与肿瘤细胞的侵袭、转移能力密切相关。细胞周期调节失控是肿瘤发生过程中重要的分子事件,细胞周期同时受正向和负向因素调节，P27属于细胞周期负向调节因子，它通过与Cyclin-CDK复合物结合，控制细胞由G1期进入S期的“位点”，从而控制细胞增殖［1］。近年来在多种肿瘤中发现P27蛋白水平有下降。那么，胃癌的发生、发展是否与PTEN、P27的变化有关系呢？PTEN和P27在胃癌的发生、发展中的关系又是如何的？本研究通过对20例正常胃组织与54例胃癌组织的检测，探讨PTEN和P27在胃癌的发生、发展及转移中可能引起的生物学行为及PTEN和P27在胃癌的发生、发展中的相互关系。

1 材料和方法

1.1 标本来源及一般资料

收集2005年1月至2006年4月莆田学院附属医院手术切除并经病理证实为胃癌石蜡标本54例。患者年龄39至71岁，中位年龄58岁，男性36例，女性18例。组织学分级：中高分化30例，低分化24例。根据国际抗癌联盟（UICC）美国肿瘤联合会（AJCC）的TNM分期标准进行分期，Ⅰ/Ⅱ期33例，Ⅲ/Ⅳ期21例。有淋巴结转移32例，无淋巴结转移22例。所有患者均有完整的临床和病理资料。选择20例经病理证实为正常胃组织作为对照。

1.2 试剂和方法

实验用的鼠抗人PTEN、P27单克隆抗体及S-P试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发工色。实验过程采用SP法，按照试剂盒的说明书进行，每次实验均用PBS代替一抗作阴性对照，并用已知的胃癌阳性切片作阳性对照。

1.3 结果判断

PTEN蛋白染色阳性在细胞膜或胞质内出现黄色颗粒，P27以细胞核内出现棕黄色染色为阳性细胞。切片在400倍镜下观察5～10个视野，每个视野计数100～200个肿瘤细胞，共计1000个细胞，计算出每张切片的阳性百分数，阳性率＜10％为阴性（－），阳性率＞10％为阳性（＋）。

1.4 统计学分析

计数资料采用x2检验和Kappa一致性检验，应用SPSS12.0统计软件分析数据。

2 结果

2.1 PTEN和P27在胃癌和正常胃组织中的表达情况

PTEN、P27在胃癌组织中的表达较正常组织显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。结果见表1，图1，2。表1 胃癌和正常胃组织中PTEN和P27的表达注： 与正常胃组织比较，*P＜0.01。

2.2 PTEN、P27异常表达与胃癌临床病理特征的关系

PTEN与胃癌的分化、临床分期、淋巴结的转移的差异有统计学意义（P＜0.05）,与患者的年龄、性别的差异无统计学意义（P＞0.05）。P27与胃癌的临床分期、淋巴结转移的差异有统计学意义（P＜0.05），与胃癌的分化、患者的年龄、性别的差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表2。 表2 PTEN和P27表达与胃癌临床病理学特征的关系

2.3 PTEN和P27之间的关系

PTEN和P27表达的吻合度有统计学意义（P＜0.05），见表3，为中度一致。表3 PTEN和P27之间的表达关系注：kappa值=0.532，P=0.000 。

3 讨 论

肿瘤的发生、发展、转移、分化是一个多机制多步骤的复杂过程。PTEN和P27可能只是在这个过程中发挥了一部分作用。Li等［2］和Steck等［3］在1997年报道了PTEN位于染色体10q23.3上，其编码产生的蛋白质位于细胞质。PTEN基因是一个高度保守的基因，目前研究认为其抑癌作用主要通过FAK途径、三磷脂酰肌醇激酶途径、促细胞分裂激活的蛋白酶途径等完成［4～6］。

本研究显示，胃癌组织中PTEN蛋白的表达显著低于正常胃组织（P＜0.05），提示PTEN阳性表达在胃癌发生发展中起到一定作用。本研究发现，PTEN蛋白表达除在正常胃组织和胃癌组织中有显著性差异（P＜0.05），胃癌中的PTEN的表达还与肿瘤的分期、淋巴结的转移、肿瘤的分化密切相关（P＜0.05），而与患者的年龄、性别无关（P＞0.05）。

细胞周期的紊乱是大多数恶性肿瘤的形成过程中的一个重要环节。P27是一个推动细胞周期由G1-S期的cyclinE-CDK2和cyclinA-CDK2的抑制剂［7、8］，，具有促进细胞分化、介导细胞间黏附诱导调亡等功能。P27功能缺失有可能加速细胞周期的进程，预示细胞有可能向恶性转化。本实验研究表明，在正常胃组织中P27的阳性表达率较高（100％），而在胃癌组织中阳性表达率显著下降（61.1％），而且P27的阳性表达与胃癌的淋巴结转移、TNM分期有关（P＜0.05），与组织分化程度、患者年龄、性别无关。

Mamillapalli等［9］研究发现，在鼠胚胎干细胞PTEN缺失引起P27蛋白水平下调。有学者研究标明［10］抑癌蛋白PTEN是一个多功能的磷酸酶，它通过磷脂酰肌醇3－激酶通路抑制细胞的生长、控制细胞周期G1/S的转换等，其中P27是关键下游靶。本研究也表明，随着胃癌的转移、临床分期越高，P27和PTEN基因的阳性表达均呈现显著性降低，同时PTEN和P27表达的吻合度具有统计学意义（kappa值为0.532，P＜0.05），从另一个关系来说两者间具有相关性，而且是正相关，因此在胃癌的发生、发展过程中，PTEN和P27可能起着协同的作用。联合检测PTEN和P27的表达可以作为判断胃癌预后的一个重要指标。

综上所述，P27和PTEN蛋白的异常表达可能与胃癌的发生发展有关，采用免疫组织化学技术法联合检测这两种蛋白在胃癌中的表达可能可作为胃癌预后的指标。

【参考文献】
［1］ Toyoshima H,Hunter T.p27 a novel inhibitor of G1 cyclin-CDK protein kinase activity is relate to p27［J］.Cell,1994,78:67-68.

［2］ Li J,Yen C,liaw D,et al.PTEN ,a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain,breast,and prostate cancer［J］.Science,1997,275:1943.

［3］ Steck PA,Pershouse MA,Jasser SA,et al.Identification of a candidate tumor suppressor gene ,MMAC1,at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers［J］.Nat Genet,1997,15(4):356.<