【摘要】 目的 探讨胃癌及其区域淋巴结中MMAC1基因(PTEN)，胰岛素样生长因子1(IGF1)/胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)mRNA的表达及其在胃癌发生和淋巴结转移中的作用。方法 RTPCR方法检测胃癌组织、正常胃黏膜、胃癌区域淋巴结中PTEN，IGF1/IGF1R mRNA的表达。结果 胃癌组织中PTEN mRNA表达降低，IGF1/IGF1R mRNA表达增高，PTEN/IGF的表达与年龄，性别无关，与肿瘤的分期、分化程度及淋巴结转移明显相关。转移淋巴结中PTEN/IGF表达失衡，并且比原发灶中的失衡更加严重。结论 PTEN mRNA表达降低，IGF1/IGF1RmRNA表达增高对胃癌的发生和转移起着重要作用。

【关键词】 胃癌；淋巴结；PTEN；IGF1；IGF1R

胃癌的发生发展及其淋巴结转移的机制并不十分清楚。MMAC1基因(PTEN)，胰岛素样生长因子1(IGF1)/胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)被认为在恶性肿瘤的发生和转移中起重要作用〔1〕。PTEN/IGF共同通过PIK3/AKT信号传导通路起作用，并且存在相互作用〔2〕，但其在胃癌发病中的共同作用未见报道。本研究应用RTPCR检测胃癌及其区域淋巴结中PTEN，IGF1/IGF1R mRNA的表达，试图观察这些因素在胃癌的发生和淋巴结转移中的作用，为胃癌淋巴结转移的预防和治疗提供依据。

1 材料与方法

11 对象
选取2005年9月～2006年3月期间胃癌手术病人68例，其中进展期胃癌40例，早期胃癌28例（参考日本胃癌处理规约13版〔3, 4〕），男38例，女30例，平均年龄（56±115）岁，留取胃癌标本68例，胃区域病理阳性淋巴结标本120枚，阴性淋巴结100枚，另取正常胃黏膜20例作为对照。

12 试剂和仪器
Tridol Reagent购自Invitrogen 公司，反转录试剂盒购自Promgent公司，Alpha imager 2200自动凝胶成像系统，购自Alpha Innotech 公司，Mastercycler PCR仪购自Eppendorf公司。

13 方法

131 提取RNA
采集标本，Tridol一步法提取RNA，1％琼脂糖凝胶电泳判定RNA纯度。

132 RTPCR
按照试剂说明书进行反转录和扩增，以βactin为内对照。目的因子引物序列参照文献，并与Gene Bank核对，由赛百盛公司合成。IGF1上游为5′CAACAAGCCCACAGGGTATGGC3′，下游为3′GGAAACGAGACGTGCTCAATGGACA5′，扩增片段312 bp；IGF1R上游为5′ATGCTGTTTGAACTGATGCGCA3′，下游为3′GCCCCCGGCGTTCTTGCTCGCC5′，扩增片段354 bp；PTEN上游为5′CTGGAATTCAGGACCCACACGAC3′，下游为3′GTATGGTCCTGGTCTCCTTTGG5′，扩增片段234 bp；βactin上游为5′GTTTGAGACCTCAACAACACCC3′，下游为3′CTGAAGCTCGTTCTCTCTACCGGTG5′，扩增片段320 bp。

13电泳
取待测因子及βactin的扩增产物10 μl，分别凝胶电泳，凝胶成像仪进行扫描分析。

14 统计学分析
数据均用阴性、阳性表示，采用χ2检验，应用SPSS115统计软件处理。

2 结果

21 正常胃黏膜和胃癌组织中的PTEN，IGF1/IGF1R mRNA的表达
胃癌组织中IGF1/IGF1R mRNA表达高于正常胃黏膜；PTEN mRNA表达低于正常胃黏膜(见表1)。表1 正常胃黏膜和胃癌组织中的PTEN、IGF1/IGF1R mRNA的表达〔略〕

22 胃癌组织PTEN、IGF1/IGF1R mRNA的表达与临床生物学特性的关系
胃癌组织中PTEN、IGF1/IGF1R mRNA的表达与年龄，性别、肿瘤大小无明显相关，早期胃癌、高中分化组、无淋巴结转移组PTEN mRNA表达明显高于进展期胃癌、低分化组和有淋巴结转移组；IGF1/IGF1R mRNA的表达明显低于进展期胃癌、低分化组和有淋巴结转移组(见表2)。表2 床生物学特点与PTEN、IGF1/IGF1RmRNA的表达〔略〕

23 胃癌区域淋巴结中PTEN、IGF1/IGF1R mRNA的表达
IGF1/IGF1R mRNA在胃癌阳性转移淋巴结中表达明显增高，在胃周阴性淋巴结中几乎无表达；PTEN mRNA在胃周阴性淋巴结中高表达，在胃癌阳性转移淋巴结组织中表达减少。胃癌阳性转移淋巴结中IGF1/IGF1R mRNA表达比原发灶有升高趋势，胃癌阳性转移淋巴结中PTEN mRNA表达比原发灶有降低趋势(见表3)。表3 癌及区域淋巴结中PTEN，IGF1/IGF1R mRNA的表达〔略〕

3 讨 论

PTEN又名MMAC1基因，为1997年发现并命名的一种抑癌基因〔5〕，其编码产生的蛋白质可抑制细胞的不正常增殖分裂。已有很多研究表明PTEN的缺失或突变在很多肿瘤的发病中起重要作用，被认为是p53以外另一重要的抑癌基因〔6〕，在肿瘤中增加PTEN的表达可以抑制肿瘤的生长或者提高肿瘤对化疗药物的敏感性〔7,8〕。IGF1是一种强力的促细胞分裂素，有很强的促进细胞增殖和分化的功能，单独或与膜受体(IGF1R)结合发挥作用。IGF1/IGF1R在胃癌的发病中起着很重要的作用，阻止IGF1/IGF1R的作用可以抑制胃癌细胞的生长〔9〕。本研究发现胃癌组织中PTEN mRNA表达降低，IGF1/IGF1R mRNA表达增高，与前人的研究结果一致〔10〕，表明PTEN mRNA缺失、IGF1/IGF1R mRNA表达增强在胃癌的发病中起重要作用；胃癌组织中PTEN mRNA与IGF1/IGF1R mRNA的表达呈负相关，提示PTEN/IGF可能在肿瘤组织内存在着失衡。这种失衡可能是肿瘤过度增生和减少凋亡的原因之一，调整他们的失衡可能成为治疗胃癌的一种手段。本研究还发现，PTEN、IGF1/IGF1R mRNA的表达与年龄，性别无关，与肿瘤的浸润深度、分化程度、淋巴结转移明显相关，早期胃癌、高分化组中PTEN mRNA的表达明显高于进展期、中低分化组胃癌，IGF1/IGF1R mRNA的表达则明显降低，说明恶性程度高，侵袭性强的肿瘤细胞PTEN mRNA表达降低、I