【关键词】 免疫组化

【摘要】 目的：探讨抑癌基因p16，p53蛋白表达在胃癌发生发展过程中的意义. 方法：应用免疫组织化学SP法检测15例正常胃黏膜组织，20例轻度不典型增生，16例中度不典型增生，12例重度不典型增生，12例早期胃癌和42例进展期胃癌中p16，p53蛋白的表达情况. 结果：p16，p53蛋白在正常胃黏膜组织、轻度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生、早期胃癌及进展期胃癌中阳性率分别为100.%,0；90%,0；81.2%,6.2%；50%,16.7%；41.7%,58.3%；35.7%,73.8%. 随着胃黏膜病变的进展，p16蛋白的阳性率逐渐下降，而p53蛋白的阳性表达则与p16相反，其阳性率逐渐上升. p16和p53蛋白在癌前病变与胃癌之间的阳性表达以及它们在早期胃癌和进展期胃癌之间的表达均有显著差异(P<0.05). 结论：p16，p53蛋白表达与胃癌发生发展有关，在此过程中它们的表达呈明显负相关系.

【关键词】 胃肿瘤;癌前状态;p16蛋白;p53蛋白;免疫组化

0引言

胃癌的发生发展是一个多因素和多阶段逐步演化的过程，该过程涉及多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活. 多肿瘤抑制基因(multiple tumor suppressor gene I, MTSI) 又称p16基因，其在黑色素瘤、胰癌及胃癌等肿瘤中均检测到p16基因的高频率突变与缺失［1］. 抑癌基因p53的缺失或突变已被证实是许多肿瘤发生的重要原因之一，突变型p53基因可促进细胞增殖与转化. 目前联合检测p16, p53蛋白表达在胃癌发生发展过程中的变化规律的报道甚少. 为探讨p16，p53基因在人胃癌中的表达，我们采用SP免疫组织化学方法检测了正常胃黏膜，各级胃黏膜非典型增生，早期及进展期胃癌组织中p16, p53蛋白的表达，分析其与胃癌发生发展的关系.

1材料和方法

1.1材料井冈山学院附属医院及吉安市中心医院1996/2003的胃切除标本102例，其中，非典型增生轻度20例，中度16例，重度12例，胃癌早期12例，进展期42例，无区域淋巴结转移26例，区域淋巴结转移28例，正常胃黏膜组织15例（取自井冈山学院病理学教研室尸解病例）. 全部标本均经40 g/L中性甲醛液固定，石蜡包埋. 诊断标准参照全国胃癌协作组提出的标准进行复检，每例选取1~3张切片的蜡块进行连续切片，制成4 μm厚的切片. 抗p16多克隆抗体、抗p53 mAb和SP试剂盒均购自福州迈新生物技术公司.

1.2方法采用SP法，严格按试剂盒推荐的石蜡切片微波修复抗原染色程序操作，DAB显色，苏木素衬染. 以已知阳性切片作阳性对照，以PBS液置换一抗作阴性对照. p16蛋白表达以肿瘤细胞核及细胞质中出现棕黄色颗粒染色为阳性，阳性细胞<5%肿瘤细胞者为阴性(－)；阳性细胞>5%肿瘤细胞者为阳性(+). p53蛋白表达以肿瘤细胞核呈棕黄色颗粒染色为阳性，阳性细胞<5%肿瘤细胞者为阴性(－)，阳性细胞>5%肿瘤细胞者为阳性(+).

统计学处理：采用χ2检验及参照单位分析（Ridit分析），P＜0.05表示差别有统计学意义.

2结果

2.1p16蛋白的表达p16蛋白在正常胃黏膜中全部表达(100.0%)，统计学分析显示，轻度非典型增生的阳性率(90.0％)显著高于重度非典型增生(50.0%)、早期胃癌(41.7%)和进展期胃癌(35.7%)(P<0.05)；中度非典型增生的阳性率(81.2%)与进展期胃癌(35.7%)相比，也具有显著差异(P<0.05).

2.2p53蛋白的表达p53蛋白在正常胃黏膜和轻度非典型增生均不表达(0.0%)，在中、重度非典型增生中，阳性表达率分别是6.2%和16.7%，其差异无显著性意义(P>0.05)，而在早期胃癌及进展期胃癌中，p53蛋白表达分别为58.3%和73.8%，统计学分析显示，p53蛋白表达在重度非典型增生的阳性率(16.7%)明显低于早期胃癌(58.3%)和进展期胃癌(73.8%)(P<0.05). 按淋巴结有无转移将胃癌分为两组，p16蛋白表达，淋巴结转移组的阳性率明显低于淋巴结未转移组，分别为23.8%和51.6%，其差异有显著性意义(P<0.05)；p53蛋白表达则与p16蛋白表达相反，淋巴结转移组的阳性率明显高于淋巴结未转移组，分别73.6%和47.2%，也存在显著差异(P<0.05).

2.3胃癌组织中p16和p53的表达关系胃癌组织p16阳性表达与p53阳性表达呈明显负相关(r=-0.681, P<0.05, 表1).

表1胃癌组织中p16和p53的表达关系［略］

3讨论

p16基因是1994年分离鉴定的一种新型抑癌基因，位于人9号染色体的p21区域，全长8.5 kb，由二个内含子和三个外显子组成. 已发现在食管癌、神经胶质瘤、肺癌、子宫内膜癌和卵巢癌等原发性肿瘤中有较高频率缺失或突变［1-3］. 其基本功能为细胞周期依赖激酶（cyclin