【摘要】 目的探讨细胞周期素D1（Cylin D1）、转化生长因子α（TGFα）在胃癌及癌前病变中的表达及意义。方法用免疫组织化学的方法检测Cylin D1、TGFα在10例正常胃组织、15例慢性浅表性胃炎、26例肠上皮化生、25例非典型增生及67例胃癌中的表达。结果 Cylin D1、TGFα的表达在癌前病变出现，随病变加重表达增强；在胃癌中显著高于癌前病变(P<0.05),并且与胃癌的分化程度、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 Cylin D1、TGFα与胃癌的发生、发展有密切关系，并且与胃癌的恶性程度有关，二者可能发挥协同作用。

【关键词】 Cylin D1；TGFα；胃肿瘤；癌前病变

The Representation and Significance of CylinD1,TGFαinGastric Carcinoma and Precancerous Lesion

MIAO Fang, LIU Ya-ling, LIU Wei

Dept. of Pathology,Taishan Medical College,Taian 271000,China

Abstract:Objective:To discuss the representation and significance of CylinD1,TGFαin gastric carcinoma and precancerous lesion. Methods: Cheeking the representation of CylinD1,TGFαin 10 cases of normal gastric tissues,15 cases of chronic superficial gastritis,26 cases of intestinal metapiasia,25 cases of atypical hyperplasia,and 67 cases of gastric carcinoma by immunohistochemical method. Results:The representation of CylinD1,TGFαappears in precancerous lesion.With the seriousness of the pathological changes,it will be simultancously intensified.The representation of CylinD1,TGFα is higher in gastric carcinoma than that in precancerous lesion(P<0.05).Besides this,it is closely related to the dissociation of gastric carcinoma and lymphatic metastatis(P<0.05).Conclusion:CylinD1,TGFαcontribute a lot to the development and the seriousness of gastric carcinoma;moreover,they two may have synergistic effect to each other.

Key words: Cylin D1；TGFα； gastric neoplasm；precancerous lesion

Cylin D1是G1期细胞增殖信号的关键蛋白，是细胞周期素之一，参与细胞周期的调控，其过表达与许多肿瘤相关［1］。转化生长因子α（transforming growth factor alpha,TGFα）是作用于上皮细胞的重要生长因子之一，可促使细胞增殖和发生转化［2］。研究表明，TGFα的高表达与许多上皮发生的恶性肿瘤发生、发展密切相关［3］。本研究通过检测Cylin D1、TGFα在胃癌及癌前病变中的表达，分析与病变进展的关系，为进一步探讨胃癌的发病机制提供依据。

1 材料与方法

1．1 材料

收集泰山医学院附属医院2004年－2005年胃镜活检和手术切除的组织标本143例。其中正常胃组织10例、慢性浅表性胃炎（chronic surperfical gastritis,CSG）15例、肠上皮化生(intestinal metaphasea,IM) 26例、非典型增生（atypical hyperplasia AH）25例、胃癌（gastric carcinoma GCA）67例。所有标本均经10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。

1．2 临床资料

143例患者中男性86例，女性57例，年龄32～78岁，平均年龄56岁。所有组织切片，HE染色后，均经病理学检查确诊，并根据中国抗癌协会胃癌分类（1990年）标准进行胃癌分类。胃癌组高分化胃腺癌18例、中分化胃腺癌23例、低分化胃腺癌26例。无淋巴结转移13例，伴有淋巴结转移的54例。

1．3 方法

免疫组化染色采用S-P法。Cylin D1单抗、TGFα单抗及S-P试剂盒均为北京中山生物技术公司产品，所有抗体均为浓缩液。石蜡切片常规脱蜡至水后置枸掾酸溶液，水浴修复，98 ℃，15分钟，每批染色均设置已知阳性对照，阴性对照用PBS替代一抗。

1．4 结果判定

参照许良中等［4］的方法，综合考虑切片中阳性细胞所占观察细胞数的百分比和阳性细胞着色强度两项指标，半定量判定结果。根据着色强度判断阳性程度：标本无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。根据阳性细胞在所观察细胞中所占比例分为：阳性细胞数≤10%为1分，11～50％为2分，51～75％为3分，≥75％为4分。按这两项指标的总积分将结果分为4级，0～3分为（-）；4～5分为（＋）；6～7分为（＋＋）；8分以上为（＋＋＋）；其中＋～＋＋＋为阳性表达。

1．5 统计学处理

应用SPSS11.5软件进行分析。

2 结 果

2．1 Cylin D1在胃癌及癌前病变的表达

Cylin D1主要表达于细胞核（图1）。在正常胃组织无阳性表达，15例CSG中1例（6.7％）阳性，26例IM中有8例（30.8%）阳性，25例AH中有9例（36％）阳性，67例GCA中有31例（46.3%）阳性，并且随着病变由CSG、IM、AH、GCA的演变，表达逐渐增强，统计学分析有显著性差异P<0.05（表1）。表1 Cylin D1、TGFα在正常胃组织、慢性浅表性胃炎、癌前病变及胃癌中的表达分组例数（略）

2．2 TGFα在胃癌及癌前病变的表达

TGFα主要表达于胞浆（见图2），在正常胃组织仅有1例表达（10％），在GCA表达最高，有41例（61.2％）阳性表达，在AH中有13例（52％）阳性表达，在IM中有11例（42.3％）阳性表达，在CSG中有3例（20％）阳性表达，统计学分析有显著性差异P<0.05（表1）。表2Cylin D1、TGFα在胃癌中的表达分组例数（略）

2．3 Cylin D1、TGFα在胃癌中的表达

从表2可见，Cylin D1、TGFα两者在低分化胃癌中表达均高于中、高分化胃癌，有显著性差异，并且其表达与有无淋巴结转移相关（P<0.05）。

2．4 Cylin D1、TGFα表达的相关性分析

经分析发现，不管是在癌前病变还是在胃癌中，二者常常表现为协同表达。经吻合度分析，两者表达的吻合度有统计学意义（表3）。表3Cylin D1、TGFα在癌前病变及胃癌中的表达相关性（略）

3 讨 论

Cylin D1基因又称PARD1，参与细胞周期的调控［5］。许多研究表明，在乳腺癌、肝癌、食管癌等多种肿瘤发现Cylin D1基因突变及过表达，并且在癌变的早期阶段就已经出现，与肿瘤的浸润、淋巴结转移及预后有关［6］。我们研究表明Cylin D1在CSG即有表达，在胃癌表达最高，显著高于癌前病变，并且与胃癌的分化程度、有无淋巴结转移有关。因此我们推测，Cylin D1基因的突变发生在癌变的早期阶段，可能是重要的促癌因素，并且与胃癌的发展、演进和预后有着重要作用。

TGFα是一种重要的上皮生长因子，通过与细胞膜上的特异性受体结合，激活受体上的酪氨酸激酶，促使细胞内DNA的合成，导致细胞增殖、分化［7］。研究表明TGFα在消化道广泛存在，其基因突变及高表达与胃肠道肿瘤关系尤为密切［8］。本实验发现在慢性浅表性胃炎TGFα即有表达，在肠上皮化生、非典型增生表达增高，在胃癌表达最高，提示TGFα在胃粘膜早期癌变过程中可能起重要作用。

分析Cylin D1、TGFα两者在胃癌及癌前病变中的关系发现，二者在癌前病变阶段即有显著性高表达，在病变最严重的胃癌组表达最高，并且低分化胃腺癌明显高于中、高分化胃腺癌，显示出两者的表达与肿瘤的恶性程度有关。经统计学分析两者的表达具有相关性，强烈提示，Cylin D1、TGFα的表达增高与胃癌的发生、发展有密切关系，并且发挥协同作用。但两者通过什么途径相互作用还不清楚，需进一步研究。

【参考文献】
［1］Yue Xiong,Tinm Courolly,Rutcher,et al.Human D type cyclin ［J］.Cell,1991,65(10):691.

［2］De-Paulsen N, Brychzy A,Fournier MC,et al. Role of transforming growth factor-alpha in von Hippel-Lindau(VHL) clear cell renal carcinoma cell proliferation:a possible mechanism coupling VHL tumor suppressor inactivation and tumorigenesis［J］.Proc Natl Acad Sci USA,2001,98(4):1387-1392.

［3］Chiang CP,Chen CH,Liu BY,et al.Expression of transforming growth factor-alpha in adenoid cystic carcinoma of the salivary gland［J］.J Formos Med Assoc,2001,100(7):471-477.

［4］许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判定标准 ［J］.中国癌症杂志，1996，6（4）：229-231.

［5］Alkou Okamoto,Doohglas J.Mututation and altered expression of P16,INK4 and cyclin D in human cancer［J］.Proc Natl Sci USA,1994,19,(21):11045.

［6］Barekova J,Luks J,Muller H, et al.Cyclin-D1 protein expression and function in human breast cancer［