【摘要】 目的 探讨微卫星不稳定性（MSI）在胃癌中的表现及其临床诊断价值。方法 选择60例通过胃镜标本活检确诊为胃癌的初治患者，另外选择需要胃镜检查的健康成年人20例。实验组患者收集胃液的同时做胃镜活检，对照组只收集胃液。所有标本均进行DNA提取、选择10个微卫星位点银染聚合酶链式反应简单序列长度多态法（PCRSSCP）检测MSI，并追踪随访患者20个月。结果 胃液沉渣中MSI检出率要高于镜检标本（P＜005）；MSI与肿瘤生物学特性有很好的相关性（P＜005）；随访20个月，胃液沉渣MSI对肿瘤复发有很好的预测性。结论 MSI与肿瘤生物学特性有很好的相关性，胃液沉渣MSI检出率要高于镜检标本。

【关键词】 胃液沉渣；MSI；胃癌；镜检标本

目前研究认为微卫星不稳定性(microsatellite instability，MSI)可能是胃癌发生过程中的早期分子标记〔1〕。国外研究认为MSI与胃癌的分化程度、发生部位、临床分期、组织类型、是否发生了转移及预后相关，但是不同研究对上述结论有很大分歧。国内研究认为BAT26，TP53，D2S123等几个主要位点的MSI与国人胃癌的分化程度、发生部位、临床分期、及预后相关〔2〕。目前所有关于MSI检测的报道都是针对胃癌组织标本的研究，而未见胃液沉渣中MSI的报道。本研究利用胃液沉渣做标本同时与镜检标本对比检测MSI，并建立MSI与肿瘤的分化、分期等生物学特性的关系。

1 材料与方法

11 患者来源 收集2003年11月～2005年6月60例经胃镜标本活检确诊为胃癌的初治患者，其中早期胃癌11例，进展期胃癌49例；中、高分化腺癌27例，低分化腺癌33例；肠型胃癌32例，弥漫型胃癌26例，混合型胃癌2例，确诊的患者均常规给予5～7 d的四联疗法抗HP（幽门螺杆菌）。另选需胃镜检查的成年人20例做对照组，对照组需要排除慢性萎缩型胃炎患者。

12 方法 采用银染PCRSSCP法检测MSI。

121 胃镜收集胃癌和非胃癌对照组患者禁食12 h后次日晨胃液标本300 ml,采用酚、氯仿、异戊醇抽提DNA。

122 微卫星DNA引物 选用D3S1067、D3S1577、D8S279、D9S257、D1S248、D7S520,D2S147 BAT26，TP53，D2S123 10个微卫星位点分析胃癌组织的MSI。采用美国2400型PCR扩增仪扩增引物。

123 简单序列长度多态性（SSCP） 取上述PCR产物10 μl加入10 μl变性剂，30 μl石蜡油，煮沸5 min，取出立即冰浴2 min以上，再将水相全部上样于8％非变性聚丙烯酰胺凝胶板(含5％甘油，丙烯酰胺与亚甲基双丙烯酰胺之比为29∶1)上。开始在600 V电压下电泳50 min，电泳后的凝胶用10%的乙酸和113%的硝酸(固定液)处理5 min,水冲洗2～3次,再用12 mol/L的硝酸银(染色液)染2次,每次10 min,水冲洗3次,最后用3%碳酸钠00515%甲醛(显色液)显色约5 min,至带型清楚而背景不过高为止。肿瘤组织、癌周组织和对应正常组织DNA在同一条件下进行PCR扩增，电泳，银染。

124 判定标准 与正常组织比较，胃癌条带出现增多，丢失或移位，则MSI阳性。如果出现完全一致的电泳条带，则MSI阴性。

13 统计学分析 MSI检出率比较采用χ2检验，相关性采用Spearman秩相关检验。

2 结果

21 两种方法各位点检测的阳性率比较 见表1。从表1中可以看出胃液沉渣和镜检标本MSI检出率差异具有统计学意义（P＜005)。

表1 两种方法各位点检测的阳性率（略）

22 MSI与临床病理参数之间的关系 60例胃癌患者MSI与肿瘤的分期、分化程度、淋巴结转移、发生部位、病理类型之间关系见表2。从表2可以看出MSIH组胃液沉渣和镜检标本在分期、分化程度、淋巴结转移、发生部位、病理类型均与MSIL组有显著性差异（P＜005)。与镜检标本相比，胃液沉渣在MSIL组的分期、发生部位、病理类型，在MSIH组的分化程度、发生部位均有显著性差异（P＜005)；胃液沉渣和镜检标本MSI与肿瘤生物学特性有很好的相关性（P＜005)。

表2 MSI与肿瘤的分期、分化程度、淋巴结转移、发生部位、病理类型之间关系（略）

与镜检标本（MSIL）及胃液沉渣（MSIH）相比：1）P＜005

23 随访20个月，60例患者有54例获得随访,共有41例通过胃镜诊为胃癌复发,复发的病例中30例胃镜发现肿瘤的同时胃液沉渣中出现MSI(MSIL和MSIH)，镜检标本也发现了MSI。另外还有5例首先在胃液沉渣中出现微卫星改变(镜检标本发现3例MSI),但胃镜未发现肿瘤,继续随访,分别在其后5～8个月经胃镜检查发现肿瘤。

3 讨论

MSI指由于复制差错引起的简单重复序列的改变，胃癌的MSI发生率较高〔2〕。检测MSI要充分考虑到人种之间、地域之间的差异、选择位点的数目及位点不同以及MSI的判定标准〔3〕。为避免HP感染、萎缩型胃炎对MSI的干扰，所有入选患者实验前均常规给予抗HP治疗并检查排除萎缩型胃炎〔4〕。胃癌的复发和初治患者MSI检出率也是不同的，所以统一选择初治患者。MSI与胃癌临床病理的关系目前研究结果不尽相同，但是多数学者认为MSIH多见于多发胃癌，多位于胃窦部，组织学上多为肠型，少有淋巴结转移，恶性程度较低，预后较好〔5〕。本研究发现MSIH患者一般发生在肿瘤早期，多位于胃窦部，分化程度较高，少有淋巴结转移。本实验显示胃液沉渣MSI较镜检标本阳性率高（P＜005)，原因可能是：①镜检标本检测范围较小，容易发生遗漏。②MSI检出率与肿瘤发生部位以及分期有关，这样在进行镜检时有可能检测到的是MSIL，而利用胃液沉渣则可对全胃进行检测。MSI和肿瘤生物学特性的关系是在大样本的调查中获得的,同时各家观点又不尽相同,所以如何评价镜检标本MSIL而胃液沉渣中MSIH的病人,还没有一个统一的看法。本实验中这种病人共有2例,1例处于早期,分化程度高,无淋巴结转移,发生在胃窦部,病理类型属管状癌。传统治疗后随访20个月没有复发。另外1例处于早期,分化程度高,有淋巴结转移,发生在胃底部,病理类型属管状癌。传统治疗后随访11个月复发。因为缺少大样本，所以很难对这样的病人有个彻底的统计学结果。同时对于胃液沉渣和镜检标本MSI检测的特异性和对于病情情况的预测性的比较都值得进一步研究。从复发病人的随访结果看，MSI对于复发有较好的预测性，而且这种预测性要优于镜检标本。另外，因为健康人群和低分化癌患者胃液沉渣检查MSI均为阴性，在MSI早期预测胃癌的发生发展就有一定的不确定性，所以目前它还不能成为一个预测胃癌风险的独立因素，需要和其他的检查结果综合考虑。总之胃液沉渣和镜检标本检测MSI和肿瘤的生物学特性有很好的相关性（P＜005）。同时因为胃液沉渣检查方便,痛苦小,又避免镜检取材的遗漏性,在临床上有广泛的应用前景。这方面工作需要在大量样本,各科互相协作下完成更具有统计学意义。

【参考文献】
1 Rugge M,Bersani G,Bertorelle R，et alMicrosatellite instability and gastric noninvasive neoplasia in a high risk population in Cesena〔J〕J Clin Pathol，2005;58(8):80510

2 宋伟庆，韩彩丽，周保军，等胃癌中微卫星不稳定性与错配修复酶的研究〔J〕中华实验外科，2005；22（11）：140811

3 Tahara EGenetic pathways of two types of gastric cancer〔J〕IARC Sci Publ，2004;157:32749

4 Musulen E,Moreno V,Reyes G,et alStandardized approach for microsatellite instability detection in gastric carcinomas〔J〕Hum Pathol，2004;35:33542

5 Roa JC，Villaseca MA,Roa I,et alMicrosatellite instability and loss of heterozygosity in chronic gastritis〔J〕Rev Med Chil，2003;131:136574

6 Garay J，Bravo JC，Correa P,et alInfrequency of microsatellite instability in complete and incomplete gastric intestinal metaplasia〔J〕Hum Pathol，2004;35:1026