【摘要】 目的 探讨胃癌组织β连接素、p53的表达水平,分析其与临床病理参数的关系。方法 应用免疫组化SP法检测45例胃癌和20例正常胃黏膜中β连接素、p53的表达。结果 β连接素在20例正常胃黏膜100%表达，45例胃癌中21例（46.7%）正常表达。胃癌中β连接素异常表达与组织学分级、浸润深度、淋巴结转移情况中差异具有统计学意义（Ｐ＜0.05）。胃癌中p53阳性表达随分化程度降低、浸润深度增加及淋巴结转移而增加,差异有统计学意义（Ｐ＜0.05）。β 连接素与p53在胃癌组织中的表达呈负相关（Ｐ＜0.01）。结论 β连接素、p53是影响胃癌发生发展的重要因素,是判断患者预后的重要指标。

【关键词】 胃癌β－连接素p53免疫组织化学

研究表明，细胞黏附功能下降是恶性肿瘤发展的关键因素之一，β连接素基因突变或功能异常导致细胞弥散甚至浸润。本实验应用免疫组化SP法检测45例胃癌组织中β连接素、p53的表达，分析它们与胃癌病理参数的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

选择2001年4月～2002年7月间我院收治的有完整资料的胃癌患者手术切除胃癌石蜡包埋组织标本45例,其中男32例,女13例,年龄27～73(平均46)岁。所有患者术前均未行放疗和化疗。另取20例胃癌切缘黏膜作为正常胃黏膜。标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋切片4 μm。按日本胃癌病理研究规范分类:高+中分化腺癌23例,低分化22例；浸润黏膜及黏膜下层7例，侵及肌层者13例，侵及浆膜层及浆膜层以上者25例；有淋巴结转移27例,无淋巴结转移18例。

1.2 实验所用试剂及来源

β连接素、鼠抗人p53单克隆抗体、SP试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。

1.3 方法

采用免疫组织化学ＳＰ法，石蜡包埋组织切片常规脱蜡，水化后,经3%过氧化氢处理，微波抗原修复，其余染色步骤按说明。苏木素轻度复染,二甲苯透明,中性树胶封片,光镜观察。磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗做阴性对照，β连接素用已知阳性结肠黏膜、p53用已知阳性胃癌标本做阳性对照。

1.4 结果判断

细胞中棕黄色颗粒为阳性，β连接素阳性表达在细胞膜，p53阳性表达在细胞核，根据抗体在切片中阳性反应细胞的比例分为:阳性细胞数＜10%或完全消失的标记为(-),阳性细胞数10%～90%标记为(+);阳性细胞数＞90%标记为() 。阳性细胞数的计算标准：观察500个肿瘤细胞，阳性细胞数/500×100%来计算。其中β连接素标记（）为正常表达；标记（+）/（-）判断为表达减弱或完全消失。

1.5 统计学处理

χ2检验和精确概率法检验。

2 结 果

2.1 β连接素、p53在正常胃黏膜及胃癌中表达

β连接素在20例正常胃黏膜中100%表达，且定位于细胞膜。在45例胃癌组织中21例（46.7%）表达正常，20例（44.4%）表达减弱（+），4例（8.9%）表达丧失（-）。β连接素在正常胃黏膜中的表达与在胃癌组织中的表达有差异（Ｐ＜0.05）。p53阳性表达在细胞核，p53在正常胃黏膜组织中无阳性表达。在45例胃癌中30例（66.7%）阳性表达（Ｐ＜0.05）。

2.2 β连接素、p53表达与胃癌病理参数的关系

多数癌组织β连接素表达于胞浆或胞核内，细胞膜染色较少或消失。胃癌中β连接素与p53的表达见表1。 表1 β连接素、p53表达与胃癌病理参数之间的关系（略）

2.3 β连接素与p53间的关系

45例胃癌组织中，β连接素正常表达（），21例中p53阳性表达8例；而β连接素异常表达（+/-），24例中p53阳性表达22例，结果分析显示β连接素正常表达（）与p53阳性表达强度间呈负相关（Ｐ＜0.01）。

3 讨 论

胃癌细胞本身所具有的促进微血管增生、降解周围基质、下调细胞间相互黏附性等功能是促进细胞增生、侵袭和转移的基础;其具有的侵袭、转移的恶性生物学特性也是影响临床治疗效果和导致死亡的主要原因,而这种恶性生物学特性的表达是依赖于多因素影响和多基因调控的。

浸润是恶性肿瘤主要的生物学特征之一，细胞膜黏附功能下降是恶性肿瘤发展的关键因素。已知Ecadherin/catenin在介导同型细胞间的黏附、抑制肿瘤浸润中起重要作用。β连接素是一种骨架蛋白，直接与Ecad结合形成Ecad/cats复合体，其在肿瘤浸润过程中的作用已受到人们的普遍关注，β连接素在细胞内分布的改变可反映可反应其功能变化。一般认为β连接素定位在细胞膜时参与细胞间的黏附，一旦被降解或发生细胞核的转位后，则失去其黏附功能〔1〕。龚玲玲等〔2〕在宫颈癌的研究中也显示淋巴结转移组中β连接素异常表达率明显高于无淋巴结转移组。Song等〔3〕用同样方法检测了60例早期胃癌中β连接素的表达,结果表明β连接素在核中的表达与肿瘤的分化程度和浸润性有关。上述研究结果分别表明细胞中β连接素的异常表达与肿瘤的发生、发展过程以及肿瘤的浸润甚至转移均有关系。

本结果表明:β连接素在正常胃黏膜中100%表达于细胞膜上，细胞质或细胞核着色较浅或不着色；在胃癌中多为细胞核和细胞质着色，说明胃癌组织中β连接素表达减弱的同时伴有结构和功能紊乱，这与胃癌的浸润转移有关。β连接素（）表达与胃癌分化程度呈正相关（Ｐ＜0.05），显示β连接素在调节细胞分化方面具有重要作用；另外，β连接素异常表达与浸润深度、淋巴结转移及远处转移密切相关，说明E钙黏蛋白连结素复合体介导的细胞间黏附功能下降可促进癌组织浸润和转移，其中β连接素表达异常对胃癌浸润深度、淋巴结转移及远处转移的影响更为重要。初步提示对肿瘤细胞核或细胞膜/质中β连接素含量的检测,有助于分析胃癌细胞的生物学行为,并可能成为判断肿瘤预后的指标之一。

本研究表明了胃癌中β连接素表达与p53基因异常表达密切相关。p53是很多肿瘤中易发生变异的一个抑癌基因，其DNA受损伤，正常p53蛋白就重复累积使复制停止，促使DNA修复，若修复失败，则通过调节下游WAF基因转录抑制细胞周期进程或诱导细胞凋亡，阻止具有癌变倾向的细胞产生。正常(野生型)p53蛋白由于其低水平表达及半衰期短,免疫组化方法通常检测不到,而突变型p53蛋白稳定且半衰期长,故可用免疫组化方法检测到,p53蛋白阳性表达与突变在实质上具有相同含义〔4〕。本实验正是利用了突变型p53蛋白的这个特点进行研究，结果表明p53在胃癌组织中的表达状态与胃癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移呈正相关。p53阳性及阳性表达强的患者其侵袭、转移能力强,p53可以作为胃癌侵袭、转移及预后预测的有价值的指标之一。本实验发现,p53阳性的胃癌组织中β连接素的正常表达降低,两者间呈负相关（Ｐ＜0.01）。

综上所述β连接素异常表达及p53阳性表达的患者,其与胃癌的组织学分级密切相关，且癌组织侵袭与转移能力增强,两者联合检测无疑会对胃癌的预后有一个更为客观的预测。

【参考文献】
1 Aplin AE,Juliano RL.Regulation of nucleocytoplasmic trafficking by cell adhesion receptors and the cytoskeleton〔J〕.J Cell Biol,2001；155(2):18791.

2 龚玲玲，李红英，曾 俊.宫颈癌中α/β连接素的联合表达及意义〔J〕.临床与实验病理学杂志，2005；21（1）：625.

3 Song BJ，Park YJ，Kim HS,et al.Expression of betacatenin and Ecadherin in early gastric cancer.Correlation with clinicopathologic parameters〔J〕.Korean J Gastroenterol,2004；43(2):8292.

4 Momand JG,Zambetti GP，Olson DG,et al.The MDM2 oncogene product forms a complex with the P53 protein and inhibits P53 mediated transactivation〔J〕.Cell,1992；69(12):123745.