【摘要】 目的 探讨外周血X线交错互补修复基因1(XRCC1)单核苷酸多态性与接受铂类药物化疗胃癌患者生存时间关系。方法 经病理确诊胃癌患者62例，治疗前提取其外周血DNA，采用TaqMan探针Realtime PCR方法对XRCC1第399位密码子进行多态性分析，并比较其基因型与接受铂类化疗患者生存时间关系。结果 62例胃癌患者平均总生存时间为461?d,携带XRCC1 Arg/Arg或Arg/Gln基因型胃癌患者的平均总生存时间为490?d，而携带Gln/Gln基因型患者的平均总生存时间仅为295?d，差异有统计学意义(P=0022)。结论 XRCC1基因多态性与接受铂类化疗的胃癌患者的总生存时间明显相关。

【关键词】 DNA修复基因；XRCC1；单核苷酸多态性(SNP)；胃癌；化疗

铂类药物主要是通过引起DNA损伤而发挥其抗肿瘤疗效，DNA修复能力(DNA repair capacity)是影响铂类药物疗效的重要原因。X线交错互补修复基因1(Xray repair cross complementing group 1,XRCC1)是DNA修复基因中的重要成员，主要参与DNA损伤的碱基切除修复途径(base excision repair,BER)〔1〕。该基因第10号外显子上399位密码子的单核苷酸多态性导致氨基酸的替代变化(精氨酸→谷氨酰胺)，从而可以改变DNA损伤修复能力的改变，影响个体对铂类药物的敏感性。本研究以接受铂类化疗的胃癌患者为研究对象，检测XRCC1基因第399位密码子多态性，探讨XRCC1基因多态性与化疗预后的关系。

1 对象与方法

11 对象 胃癌患者62例，其中男性45例，女性17例，年龄23～75岁，中位年龄55岁。所有患者均经手术，病理证实为胃腺癌，其中ⅢA期患者17例(2742%)，ⅢB期患者15例(2419%)，Ⅳ期患者30例(4839%)。化疗前，血常规、肝肾功能在正常范围内，心电图正常。

12 化疗方案 患者均采用以5氟尿嘧啶(5FU)+草酸铂为主的化疗方案。具体用量：采用草酸铂75?mg/m2，静滴2?h,第1，8?d；醛氢叶酸(CF)100?mg/m2，静滴2?h后，给予5FU 1?000?mg/m2，静脉持续输注22?h,第1，8?d,21?d为1个疗程。患者接受上述方案3个疗程以上。

13 临床观察及评价指标 总生存期作为最终评价指标。生存时间指从确诊日起至患者死亡(死于原发肿瘤或并发症)的日期。

14 DNA抽提及XRCC1基因型分析 所有患者接受化疗前抽取静脉血2?ml，提取全血基因组DNA。采用TaqMan探针法对XRCC1第399位密码子进行单核苷酸多态性(SNP)分析。引物序列为：5′TCTGACTCCCCTCCAGATTCC3′和5′；TAAGGAGTGGGTGCTGGACTGT3；探针序列为：FAM5′；CCTTACCTCTGGGAGGGCAGCC3′TAMARA和VIC5′；TTACCTCCGGGAGGGCAGCC3′TAMARA。采用实时定量PCR进行基因型分析。反应体系总体积为20?μl，含MgCl2 5?mmol/L,dNTP300?μmol/L,Taq热启动酶1?U，引物900?nmol/L,探针250?nmol/L，DNA 50?ng。在Stratagene MX3000P型荧光定量PCR仪上进行实时荧光PCR检测，扩增条件为95?℃ 45?s 1个循环；95?℃ 15?s，60?℃ 30?s，45个循环。由Stratagene分析软件得出基因型。

15 统计分析 采用KaplanMeier生存曲线和logrank检验进行生存分析。采用SPSS 120软件进行双尾检验。

2 结果

21 患者一般资料 62例胃癌患者平均生存时间为461?d(95% CI=371～552)。

22 XRCC1基因型分布 在62例胃癌患者中，20例(3226%)携带精氨酸/精氨酸(Arg/Arg)基因型，33例(5322%)携带精氨酸/谷氨酰胺(Arg/Gln)基因型,9例(1452%)携带Gln/Gln基因型。XRCC1基因型符合HardyWeinberg平衡。

23 XRCC1基因型与患者总生存时间的关系 62例胃癌患者平均生存时间461?d，其中携带XRCC1 Arg/Arg或Arg/Gln基因型的53例胃癌患者的平均总生存时间为490?d(95% CI=388～591)，而携带Gln/Gln基因型的9例患者的平均总生存时间仅为295?d(95% CI=118～471)，差异有统计学意义(P=0022)，提示携带Arg等位基因的胃癌患者采用铂类化疗生存时间延长。

3 讨论

XRCC1参与稳定DNA多聚酶β及多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶(PARP)的调控，从而对损伤的DNA进行修复〔2〕。研究表明，XRCC1的多态性与乳腺癌〔3〕、胃癌〔4〕、肺癌〔5〕、鼻咽癌〔6〕、食管癌〔7〕等多种恶性肿瘤的发病风险密切相关。研究显示，XRCC1的多态性与铂类药物化疗的敏感性与预后有明显关系〔8，9〕。而对于该基因的多态性与胃癌化疗预后的相关关系研究较少。本研究表明，对于接受5FU+草酸铂为主要化疗方案的ⅢⅣ期胃癌患者，其XRCC1基因型为Arg/Arg或Arg/Gln的患者的平均生存时间比Gln/Gln基因型的患者的平均生存时间长，且差异有统计学意义。本研究采用客观并最具有临床意义的总生存时间作为最终临床疗效预后评价指标，提示XRCC1单个碱基的多态性在一定程度上作为胃癌患者接受铂类药物化疗生存期的预测因子。且该研究标本均为患者外周血，取材容易方便；基因分型选择TanqMan探针，用定量PCR仪进行判定，比传统的聚合酶链反应限制性长度片段分析(PCRRFLP)高效客观，省时准确。由于本研究的样本量较小，为进一步明确XRCC1基因的单核苷酸多态性在预测胃癌铂类化疗疗效的作用，需在大样本研究的基础上进行前瞻性的研究，从而达到根据患者自身的遗传背景选择治疗敏感的化疗药物，初步实现对肿瘤的个体化治疗。

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