【关键词】 疮洗剂;盐酸小檗碱;薄层扫描

摘要:目的 建立痤疮洗剂有效成份检测方法。 方法 采用薄层色谱法对处方中的黄柏和大黄进行定性鉴别;用薄层扫描法测定黄柏中盐酸小檗碱的含量。 结果 薄层图谱斑点清晰，阴性对照无干扰。盐酸小檗碱进样量在0.04μg～0.20μg范围内线性关系良好（r=0.9950），平均加样回收率为98.69%，RSD=1.66%。 结论 本方法易于操作，结果准确，重现性好。

关键词:痤疮洗剂;盐酸小檗碱;薄层扫描

The detection of active component of Berberine hydrochloride in Acne Lotion.

PENG Jian-mei，PENG Xiao-yun，XIE Qiao-e，et al.

（Dongguan Municipal chronic Disease Hospital，Dongguan523008，Guangodng，P.R.China）

Abstract:Objective To establish a method for detection of active component in acne lotion. Methods The scutell aria and phellodendron were identified by thin layer chromatography and the content of berberine hydrochloride was determined by thin layer chromatography scanning. Results The chromatogram spots were clear and no interference was found in the negative reference.The linear range of berberine hydrochloride on calibration curve was between0.04μg and0.20μg（r=0.9950）.The average recovery rate was98.69%and RSD=1.66%. Conclusion This preparation method was easy to manipulate and the qualitywas stable and controllable as well as reproducible.

Key words:Acne;Lotion;Tthin lay chromatography;Berberine hydrochlor-ide;TLC-Scanning

痤疮是多种因素、综合作用所致的毛囊皮脂腺疾病，其中包括皮脂分泌过多，毛囊中过度角化。痤疮丙酸杆菌增殖，过度的免疫反应，是临床常见病、多发病。轻者数月，重者数年不愈。局部外用药物是治疗轻度寻常痤疮的首选方案，也是中重度痤疮的基础治疗 ［1］ 。西药治疗痤疮疗法虽多，但许多患者用药后出现不同程度的不良反应。中医治疗痤疮尚处于起步阶段。我们据中医辩证施治原则，研制了痤疮洗剂应用于临床，以清热宣肺解毒，活血化瘀、消炎散结为主。为保证其临床治疗效果及洗剂质量，建立了洗剂中盐酸小檗碱有效成份检测方法。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

薄层色谱仪:瑞士CAMAG ScannerII;微量进样器:上海安亭微量进样器厂;硅胶G:青岛海洋化工分厂（硅胶预制板20cm×10cm）;盐酸小檗碱:中国药品生物制品检定所;痤疮洗剂:东莞市慢性病防治院制剂室提供，所有试剂均为分析纯。

1.2 洗剂质量

本品为棕褐色液体，气香，味苦。相对密度应不低于1.02。pH值应为5.0～7.0。其他按《中国药典》2005年版一部附录I V”洗剂”项下检查，应符合该项下的各项规定。

1.3 实验方法

1.3.1 薄层色谱鉴别

1.3.1.1 黄柏鉴别试验

取本品20ml蒸至近干后置具塞锥形瓶中，加甲醇10ml，加热回流30min，滤过，滤液作为供试品溶液。同法制备缺黄柏的阴性对照药材溶液。另取黄柏对照药材2g，加水30ml，煮沸30min，过滤，滤液蒸至近干，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。然后吸取上述4种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水（10:6:1:1）为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。在与对照药材和对照品相应的位置上，供试品显示相同的黄色荧光，而阴性对照药材则无黄色荧光。详见薄层色谱图1。

1.3.1.2 大黄鉴别试验

取本品20ml蒸至近干后，置具塞锥形瓶中，加甲醇20ml，浸泡1h，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml溶解，再加盐酸1ml，加热回流30min，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺大黄的阴性对照药材。另取大黄对照药材2g，加水30ml，煮沸30min，滤过，蒸干，加甲醇20ml，同法制成对照药材溶液。再取芦荟大黄素、大黄酸对照品加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸收上述4种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（365nm）下检视，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同的5个橙黄色斑点，置氨蒸气熏后，斑点变为红色，而阴性对照药材色谱则无斑点。详见薄层色谱图2。

1.3.2 盐酸小檗碱的含量测定 ［2］

1.3.2.1 供试品溶液的制备

取本品2ml，加水20ml，置具塞锥形瓶中，加盐酸2ml，加热回流30min，立即冷却。用乙醚分5次振摇萃取，每次20ml，合并乙醚液，弃去;再用乙酸乙酯分5次振摇萃取，每次20ml，合并乙酸乙酯液，弃去;萃取后的水溶液蒸至近干，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，加热回流30min，放冷，称定重量，用甲醇补足失重，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液。同法制备缺黄柏的阴性对照药材溶液。

1.3.2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，作为对照品溶液。

1.3.2.3 薄层色谱条件及扫描条件

吸收上述供试品溶液2ul，对照品溶液1μl与3μl，交叉点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液（6:3:1.5:1.5:0.5）为展开剂，另槽加入等体积的浓氨试液，预平衡15min，展开8cm，取出，晾干，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定。氘灯，激发波长366nm，反射法扫描测定供试品与对照品的峰面积，外标两点法回归计算。详见色谱图3。

2 结果

2.1 线性试验

精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5μl按以上条件展开、扫描测定，以测定的峰面积积分值为纵坐标（Y），对照品的点样量为横坐标（X），绘制标准曲线，盐酸小檗碱在0.04μg～0.20μg范围内，积分面积与点样量呈线性关系，回归方程为:Y=3.398×10 6 X-1.199×10 6 ，r=0.9950。

2.2 稳定性试验

吸取对照品溶液与供试品溶液点于硅胶G薄层板上，展开，间隔0.5h，连续扫描6次（n=12），实验表明在2.5h内较稳定，其RSD分别为1.14%和1.46%。

2.3 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开、测定，结果表明方法的精密度较好，RSD=0.87%。

2.4 加样回收率试验

取已知含量的同一批样品，精密称取适量，分别精密加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按“1.3.2.1”项下方法制备供试品溶液，每次吸取供试品溶液2μl，按“2.8”项下测定含量，平行做5组，测得其平均回收率为98.69%，RSD=1.66%。表1 加样回收率试验结果（略）

2.5 样品含量测定

取6个批号样品，按“1.3.2.1”和“1.3.2.2”项下方法分别制备供试品溶液和对照品溶液。分别吸取供试品溶液2μl、对照相品溶液1μl、2μl，点于同一薄板上，展开、扫描、测定，计算盐酸小檗碱的含量，结果详见表2。盐酸小檗碱的平均含量为0.6195mg/ml，按均值的80%计，每ml样品中盐酸小檗碱的含量不得低于0.7585mg/ml。

3 讨论

本品为棕褐色液体，气香、味苦。中医称痤疮为肺风粉刺或面疱。病为素体阳盛，复加饮食辛辣、肥甘厚味，郁久化生湿热，蕴于肺胃，复感风邪，亦有月经不调，瘀滞化。表2 样品中盐酸小檗碱的含量测定结果（略）

热而发病。故治疗应以清热宣肺解毒、活血化瘀，消炎散结为主。现代中药药理研究证明 ［3］ :许多中药对痤疮有治疗作用，如黄芩、黄连、大黄、丹参等有抗菌、解毒作用，能抑制皮肤细菌生长，并能改善微循环，减少渗出，调节组织的修复和再生。黄芩中含有的睾酮5a-还原酶抑制剂，对痤疮杆菌有良好的杀灭作用。川芎行气活血、丹参活血祛瘀平痤 ［4］ 。据近代医学研究 ［5，6］ :黄芩对革兰氏阴性、阳性球菌有较强的抑制作用。黄芩、大黄、野菊花、金银花等均有抗炎、抗菌、抗过敏的作用;白芷芳香通窍，外用敷面可渗入肺胃之浮络，以祛湿泻火、消肿排脓。

本制剂组方合理，制备工艺简单，质量稳定。笔者采用薄层扫描法测定了黄柏中盐酸小檗碱的含量，结果显示，该方法简单，结果准确，稳定，重现性好，灵敏度高，且空白样品对含量测定无干扰，因此本方法可有效控制痤疮洗剂的质量。

参考文献:

［1］赵辨.临床皮肤病学［M］.第2版.南京:江苏科学技术出版社.

［2］魏波，代雪平，刘平香.薄层扫描法测定消积片中盐酸小檗碱的含量［J］.中国药房，2000，11（1）:40.

［3］刘一民，何泽霖.中药临床研究［M］.哈尔滨:黑龙江省科学技术出版社，1993:65、186、174.

［4］王海棠.中医美容［M］.北京:中医药出版社，1997:98.

［5］江苏新医药学院.中药大词典［M］.上海:科学技术出版社，1997，2017～2021