蛋白酶体抑制作用诱发内质网功能障碍以及人胆囊癌细胞死
2022-07-28
来源：求医网
为确定蛋白酶体抑制作用能否诱发人胆囊癌细胞凋亡，如果可以，则阐明细胞学机制，研究人员选择了人KMCH、KMBC和Mz-ChA-1胆囊癌细胞以及正常大鼠细胞株，给与MG132，一种肽醛可以抑制蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样活性，采用评估4'-6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)核染色以及荧光显微镜评估凋亡，采用荧光未淬灭试验检测线粒体膜电位，细胞死亡过程中的超微结构的改变通过透射电子显微镜(TEM)观察，Caspase 3/7活性则采用酶基础的荧光实验评估，细胞内游离钙离子浓度采用Fura-2和数字荧光显微镜检测。结果可见，蛋白酶体抑制剂MG132可以诱导检测到的所有胆囊癌细胞株凋亡，且凋亡是呈现时间和浓度依赖的；相比之下，MG132也可见到对正常大鼠胆管细胞具有很小的细胞毒性。在经过MG132处理和未处理的细胞间未见线粒体膜电位改变。透射电子显微镜进行的超微结构检查显示出现凋亡的典型改变，而且出现显著的内质网(ER)空泡化。出乎意料的是，MG132处理过的细胞caspase 3/7活性无增加，pancaspase抑制剂Q-VD-OPh也不阻断细胞死亡。蛋白合成抑制剂cycloheximide可以阻断蛋白体抑制剂诱导的凋亡，这提示ER功能异常依赖于新蛋白的形成。因此，蛋白体抑制剂可以诱导人胆囊囊癌细胞ER功能异常以及独立于caspase的细胞死亡，蛋白酶体抑制剂确认可以作为治疗人胆囊癌的药物。
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