of autoimmune chronic urticaria

慢性荨麻疹(chronic urticaria,CU)是一种常见病、多发病，临床表现迁延顽固，对常规抗组胺药物反应性差，治疗效果不好。较多的慢性荨麻疹患者找不到明确的过敏原及病因。近年研究显示，部分此类患者血清存在组胺释放活性。进一步研究证实，这种组胺释放活性是由自身抗体所致，大部分为抗高亲和力IgE受体(FcεR1)自身抗体，少部分为抗IgE抗体或其它。此类自身免疫性荨麻疹的病情与自身抗体的滴度和组胺释放活性相平行。自身免疫性CU在临床上难以治疗，给予血浆透析或免疫调节治疗后常可使症状得到缓解，所以CU自身抗体的检测，将有助于对自身免疫性CU的诊断、病情监测及治疗。

1自身抗体的检测方法

1.1自身血清皮肤试验常规抽血后，使血液在无菌试管里凝结30min，并在室温下离心，取血清100μL用无菌注射器重新注入该抽血病人的真皮内。注射部位为前臂屈侧。取等体积无菌生理盐水注入对侧同样部位做为对照。注射后观察皮肤反应，如有风团红斑发生，需要用尺子测量并记录，阳性标准为注射血清后2h内，出现风团，直径大于对照5mm，或出现红斑直径大于对照10mm。有的作者注射血清量为50μL，采用磷酸盐缓冲液作对照，阳性标准为注射后60min，风团直径超过9mm。自身血清皮肤试验阳性，表明血清中存在可使皮肤MC脱颗粒的物质。它不可能是IgE，因为IgE不可能使同一个体的MC致敏。正常对照的自身血清皮肤试验均显示阴性，且皮试阳性血清与CU病情有明显的相关性，与病情的改变相平行^[1,2]。

1.2组胺释放试验取正常人外周血，用葡聚糖泛影葡胺沉淀法分离白细胞。收集富含嗜碱粒细胞的白细胞层，平衡盐缓冲液洗细胞两次，用含2mmol/LMgCl₂及2mmol/LCaCl₂的缓冲盐溶液冲洗细胞。取50μL待检血清与同体积白细胞悬液37℃孵育40min。在4℃条件下，测定血清中的组胺含量，等量的白细胞悬液煮沸后，测定总的嗜碱粒细胞组胺含量。组胺释放以加入刺激因子，引起的组胺释放占嗜碱粒细胞所含有组胺总量的百分比来表示^[3～5]。组胺释放试验是一种在体外进行的功能性试验，它可以证明患者血清中组胺释放活性的有无，而不能鉴定该种活性的引起是何种抗体。Hide利用乳酸使IgE与嗜碱粒细胞解离，或用骨髓瘤IgE使嗜碱粒细胞致敏的方法，可鉴定出这种组胺释放活性是否依靠IgE，进而判断是否为抗IgE自身抗体^[4]。人工培养和分离的肥大细胞及正常皮肤的超薄切片均可用于上述的组胺释放试验。

1.3免疫印迹方法人高亲和力IgE受体的α链是IgE的结合配体。实验证明含IgE结合表位的膜外区α链，不需要其跨膜区、胞内末尾及β、γ链即能在体外与IgE及抗FcεR1抗体结合^[6～8]。有几位作者用基因工程表达的可溶性重组α链(FcεR1α)进行免疫印迹，检测抗FcεR1自身抗体。实验首先将纯化的FcεR1α煮沸并用2巯基乙醇还原，经10％～13％SDSPAGE电泳后，转印至硝酸纤维素膜上，用5％脱脂奶粉封闭90min，与1∶500的待检血清反应后，加入碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG抗体，最后加入BCIP/NBT显色。Ferrer用该方法检测CU患者的血清得到了64％的阳性率，阳性率虽高于上述两种方法，但也有上述两种方法检测到的阳性的血清，而用免疫印迹方法则为阴性，这说明慢性荨麻疹患者血清中存在非功能性的自身抗体。

用免疫印迹方法也可以检测抗IgE自身抗体。Fiebiger将硝基苯乙酰与血清白蛋白的偶合物转印到膜上，使之与人抗硝基苯乙酰的基因工程IgE抗体结合，然后加入待检血清进行检测。

1.4利用酶联免疫吸附实验Fiebiger报告的基于酶联免疫吸附实验的分析方法(ELISA-based assay)主要是用来测定抗FcεR1自身抗体的^[8]。先用抗人IgE的单克隆抗体吸附待检血清中的IgE，因为IgE可以结合或封闭重组人高亲和力IgE受体α链(rsFcεR1α)的表位。而后，在液相条件下，让待检血清与生物素标记的rsFcεR1α37℃反应3h。将反应体系加入到亲和素包被的反应板上，室温下孵育1h，加入酶标二抗羊抗人IgG抗体，最后加入底物，显色，测定比值。如在待检血清与靶蛋白反应之前，加入一定浓度的重组靶蛋白，可以对反应结果进行精确的定量。该方法测定自身抗体不需要电泳转膜，相对较为简便，它所识别的为非变性蛋白。但该方法所测定的自身抗体与功能无关，即ELISA阳性血清在体外不一定具有组胺释放能力。

2治疗研究进展

2.1静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)IVIG应用的免疫球蛋白是一种多价抗体，来源于正常人的血浆，它已成功地应用于对一些自身免疫性疾病的治疗，包括特发性血小板减少性紫癜和抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)阳性的血管炎。尽管其治疗机理尚不完全清楚，但它可能参与阻断IgGFc段与受体的结合，抑制了对带有自身抗体血小板的破坏。IVIG也可能对抗独特型抗体网络有修饰作用，直接抑制B细胞和(或)T细胞的功能。O’Donnell^[9]对10例慢性荨麻疹病人进行了治疗观察，该10例病人均为自身血清皮肤试验阳性及体外嗜碱粒细胞组胺释放试验阳性，并且临床症状严重，常规方法治疗效果不佳。治疗的方法是病人住院治疗，静脉滴注免疫球蛋白0.4g/(kg^．d)，5天为1个疗程，第1天使用3％的浓度，随后4天用6％的生理盐水溶液静滴。10例病人9例获得疗效：3例跟踪3年病情未复发，2例症状消失2个月后复发，继续治疗后症状又消失，其它4例症状缓解。治疗后2周及6周的荨麻疹活动指数(urticaria activity scores)和直观模拟评分(visual analogue scores)均较治疗前有明显改善(P＜0.01)。荨麻疹活动指数的降低与治疗后荨麻疹病人自身血清皮肤试验的反应性降低相平行。治疗期间所有的病人均有头痛，给予扑热息痛可获缓解，有部分病人有轻微的畏光、鼻塞、发热、静脉炎等，治疗后这些不良反应均自行消失。肝肾功能未见异常。IVIG可以降低血清自身抗体的滴度，在抗Ⅷ因子自身免疫性疾病，IVIG治疗后病人病情的改善归因于体内产生了抗自身抗体的独特型抗体。对自身免疫性慢性荨麻疹，也可能产生独特型抗体，进而抑制了抗FcεR1自身抗体的组胺释放作用。

2.2血浆透析Gratten报道8例自身免疫性慢性荨麻疹病人，常规治疗不能缓解临床症状，给予血浆透析后，其中6例症状明显改善，或完全消失，另外2例症状只有轻微缓解。自身血清皮肤试验显示，治疗后的血清比治疗前的血清反应性明显降低，体外嗜碱粒细胞脱颗粒试验也显示治疗后的血清较治疗前降低。血浆透析可以做为一种对严重病例的辅助治疗措施，不宜单独使用^[11]。

2.3其它其因工程重组的FcεR1－IgG嵌合体^[10]及化合物2，3，4羟基嘧啶[2,1－α]异喹啉(2，3，4－trihydropyrimidino[2,1－α]isoquinoline)对过敏反应有抑制作用，但仍处于动物实验阶段，尚不能用于临床^[12,13]。

参 考 文 献

1，Grttan CEH, Wallington TB, Warin RP, et al. A serological mediator in chronic idiopathic urticaria?a clinical, immunological and histological evaluation. Br J Dermatol, 1986,114(5):583～ 590

2，Tong LJ, Balakrishnan G, Kochan JP, et al. Assessment of autoimmunity in patients with chronic urticaria. J Alleray Clin Immunol, 1997,99(4):461～ 465

3，Fiebiger E, Maurer D, Holub H, et al. Serum IgG autoantibodies directed against the alpha chain of Fc epsilon R1: a selective marker and pathogenetic factor for a distinct subset of chronic urticaria patients? J Clin Invest. 1995,96(6):2606- 2612

4，Hide M, Francis DM, Grattan CEH, et al. Autoantibodies against the high affinity IgE receptor as a cause of histamine release in chronic urticaria. N Engl J Med. 1993,328(22):1599～ 1604

5，Zweiman B, Valenzano M, Atkins PC, et al. Characteristics of histamine- releasing activity in the sera of patients with chronic idiopathic urticaria. J Allergy Clin Immunol, 1996,98(1):89～ 98

6，Fiebiger E, Wichlas S, Stinl G, et al. Autoantibodies directed against Fcε R1: IgG subtype composition. Prevalence, and disease specificity. J Invest Dermatol, 1996,107(3):492

7，Frrer M, Kinet JP, Kaplan A, et al. Comparative studies of functional and binding assays for IgG anti- Fcε R1(α - subunit) in chronic urticaria. J Allergy Clin Immunol, 1998,101(5):672～ 676

8，Fiebiger E, Hammerschmid F, Stingl G, et al. Anti- Fcε R1 antibodies in autoimmune- mediated disorders. J Clin Invest, 1998,101(1):243～ 251

9，O'Donnell BF, Barr RM, Black Ak, et al. Intravenous immunoglobulin in autoimmune chronic urticaria. Br J Dermatol. 1998,138(1):101～ 106

10，Haak- Frendscho M, Ridgway J, Shields R, et al. Human IgE receptor α - chain IgG chimera blocks passive cutaneous anaphylaxis reaction in vivo. J Imm