关键词： 心脉安颗粒剂；化学；甘草酸；分析；高效液相色谱法；薄层色谱法

摘要：对心脉安颗粒剂中炙甘草、人参、桂枝、生姜进行了薄层鉴别，并应用高效液相色谱法对炙甘草中的甘草酸进行了含量测定，方法灵敏，重现性好，加样回收率为99.7%，RSD为1.12%。

中图分类号：R284.1

文献标识码：A文章编号：1003-9783(1999)04-0228-04

The Standard of Quality Control for Xinmaian Granule

Hong Xin,Mi Sui Qing

(Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 51040 5)

Abstract:In this study,Radix Ginseng,Radix Glycyrrhizae Prepar atae ,Ramulus Cinn amomi and Rhizoma Zingiberis Recens in Xinmaian Granule were ide ntified by TLC,and the content of Glycyrrhizic acid was analyzed quantitatively by HPLC.The results showed that the recovery ratio is 99.7% and the RSD is 1.12%(n=6).The method is found to be highly sensitive and reproducible,and may be used as a standard of the quality control for this compound preparation.

Keywords:@Xinmaian Granule/chem.;Glycy rrhizic acid/analysis;HPLC;TLC scanner

心脉安颗粒剂是由《伤寒论》第117条炙甘草汤改进研制而成的中药抗心律失常的新制剂。由炙甘草、人参、桂枝、生姜、生地等多味中药组成，具有养血滋阴，补益肺气之功效。主要用于治疗冠心病引起的心律失常。本文对方中君药炙甘草，臣药人参、桂枝、生姜进行了薄层鉴别研究，并应用高效液相色谱法对炙甘草的主要成分甘草酸进行定量测定。结果灵敏度高，重现性好，操作简便，可作为心脉颗粒剂的质控标准。

1实验部分

1.1仪器、试药及样品

Waters高效液相色谱仪，配有510泵，486可调节紫外检测器，U6K进样器，810色谱工作站；电子分析天平(日本岛津公司)；超声波清洗器(上海超声波仪器厂)；SPU—1型自动喷雾器(日本岛津公司)；定量毛细管(DrummondScientificUSA)；手工涂布器(陕西前进鼓风机械厂)；硅胶G(德国MERCK公司)；其他试剂均为分析纯。

甘草酸单铵盐、人参皂甙R_g1、R_e、桂皮醛对照品(中国药品生物制品检定所)；炙甘草、生姜对照药材购自广东省药材公司；心脉安颗粒剂及阴性对照品均由第一军医大学药剂教研室提供。

1.2鉴别

1.2.1炙甘草、人参^［1］

(1)供试品溶液的制备取本品粉末5g,加氯仿40mL，超声处理20min，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇50mL，超声处理20min，滤过，滤液浓缩至约5mL，加于已处理好的中性氧化铝柱(100～120目，15g，内径10～15mm)上，用40%甲醇150mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次25mL，合并提取液，用氨水洗涤3次，每次20mL，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，使成1mL，作为供试品溶液。

(2)对照品及对照药材溶液的制备取炙甘草对照药材1g,同法制成对照药材溶液。另取人参皂甙R_g1、R_e对照品，加甲醇制成1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

(3)阴性对照液的制备分别取缺炙甘草、人参的阴性对照品5g，按供试品溶液制备项下的方法制得阴性对照液。

(4)薄层层析分别依次吸取上述5种溶液8、4、2、4、4μL，点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中在与炙甘草对照药材相应位置上显相同的黄色斑点；在与人参皂甙R_g1、R_e对照品色谱相应的位置上显相同的紫色斑点，阴性对照品均无干扰，见图1。

图1炙甘草、人参薄层色谱图

1.炙甘草2.缺炙甘草阴性对照3.样品

4.人参皂甙R_g1(上)、R_e(下)5.缺人参阴性对照

1.2.2生姜^［2］

(1)供试品溶液的制备取本品粉末5g，加50%甲醇60mL，超声提取30min，过滤，滤液浓缩至干，加正已烷10mL，超声提取5min，过滤，滤液浓缩至干，残渣加正己烷溶解，使成1mL，作为供试品溶液。

(2)对照药材溶液的制备取生姜对照药材3g，加水50mL煎煮30min，过滤，滤液浓缩至干，加乙醚50mL振摇30min，过滤，滤液浓缩至干，按供试品溶液制备项下方法操作，制得对照药材溶液。

(3)阴性对照品溶液的制备取缺生姜的阴性对照样品，按供试品溶液制备项下方法操作，制得阴性对照品溶液。

(4)薄层层析吸取上述三种溶液各20μl，点样于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲酸-乙酸乙酯(9∶0.5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在105℃烘至斑点显色清晰。在日光下检视，供试品色谱中在与对照药材相应位置上显相同的蓝紫色斑点，阴性对照品无干扰，见图2。

1.2.3桂枝^［1］

(1)供试品溶液的制备取本品粉末8g，加乙醚20mL，振摇15min，放置1h，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加乙醚溶解，使成1mL，作为供试品溶液。

图2生姜薄层色谱图

1.生姜2、3.样品4.缺生姜阴性对照

(2)对照品溶液的制备取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1mL含2μL的溶液，作为对照品溶液。

(3)阴性对照品溶液的制备取缺桂枝的阴性样品，按供试品溶液制备项下方法操作，制得阴性对照品溶液。

(4)薄层层析分别吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各12μL，对照品溶液2μl，点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)—乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼溶液。在日光下检视，供试品色谱中在与对照药材相应位置上显相同的橙黄色斑点，阴性对照品无干扰，见图3。

图3桂枝薄层色谱图

1.桂皮醛2、3.样品4.缺桂枝阴性对照

1.3含量测定

1.3.1色谱条件SperisorbC18柱(4.6×250mm110μm)，G(4)-ODS保护柱；流动相：甲醇-0.2%冰醋酸(70∶30)；流速：1.0mL/min；检测波长：249nm；柱温：35℃；灵敏度：0.01AUFS。在此色谱条件下，样品中甘草酸与相邻的峰已达到基线分离(图中色谱峰a)，且阴性对照品在相应的位置无干扰，见图4。

图4心脉安颗粒剂HPLC图谱1.3.2标准曲线的制备精密称取甘草酸单铵盐对照品10.0mg，用甲醇溶解，定容至10mL，作为对照品储备液(浓度为1mg/mL)。精密吸取上述溶液1.0mL，置10mL量瓶中，定容至刻度，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8，10，12μL注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，得回归方程为：Y=60705X-185，r=0.9998。实验结果表明，进样量在0.10～1.20μg之间呈良好的线性关系。

1.3.3稳定性试验精密吸取上述对照品溶液6.0μL，每隔一定时间注入液相色谱仪中测定，共测30h，测得峰面积积分值为361715，371865，357013，358007，361734，RSD=1.62%。

1.3.4精密度试验精密吸取上述对照品溶液5.0μl，连续重复进样7次，测得峰面积积分值为313715，310228，309837，310923，312545，314397，313865，RSD=0.60%。

1.3.5样品测定取心脉安颗粒剂约1.1g，精密称定，置5mL容量瓶中，加50%甲醇适量，超声提取30min，加50%甲醇至刻度，用滤纸初滤，再用0.45μm微孔滤膜复滤，弃去初滤液，收集续滤<