摘要：目的：制订蒲黄药材的质量标准。 方法：采用TLC对国内10个城市市售蒲黄中异鼠李 素-3-O-新橙皮糖甙、香蒲新甙、异鼠李素和β-谷甾醇进行鉴别，用高效液相色谱 法测定异 鼠李素-3-O-新橙皮糖甙、香蒲新甙的含量。结果：异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙、香蒲新甙、 异鼠李素的定性鉴别专属；异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙在0.188～0 .940 μg呈良好线性关系， 回收率为97.77%；香蒲新甙在0.164～0.820μg呈良好线性关系，回收率为 98.42 %。结论：建立的定性、定量方法，可作为本品的质量控制标准。

Studies on Quality Standards for Pollen typhae(Puhuang)

ZHANG Shui-han,WANG Shi-qiang,LIU Chun-hai , YANG Yong-hua

(Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica, Changsha 410006,Hunan， China)

Abstract：Objective:To work out quality standards for Pol len Typhae(Puhuang).Me thod:Isorhamnetin-3-O-neohesperidoside,typhaneoside,isorhamnetin and β-sitosterol in Pollen Typhae marketed in ten cities of China were identified by TLC.The con tents of isorhamnetin-3-O-neohesperidoside and typhaneoside were determin ed by H PLC.Result:The method is sensitive and specific for identifyin g isorhamnetin-3-O -neohesperidoside,typhaneoside,isorhamnetin and β-sitosterol.The linear range s of isorhamnetin-3-O-neohesperidoside and typhaneoside were 0.188～0.940 μg with and average recovery of 97.77%;and 0.164～0.820 μg with an average recovery of 9 8.42% respectively.Conclusion:The method can be used both qual itat ively and quantitatively as standards for the quality control of Pollen Typhae.

Key words：Pollen Typhae;TLC;isorhamnetin-3-O-neohe speidoside,typhaneoside;HPLC▲

蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲Typha angustifolia L.、东方香蒲T.orie ntalis Presl或同属 植物的干燥花粉。蒲黄化学成分的研究已有报告^［1～4］，但未见对药材质量标准 进行系统研究。我院对蒲黄进行了系统研究，在此工作的基础上，我们对蒲黄的质量标准进 行了研究，为考查药材真伪优劣提供了简便、可行的方法，也为完善《中国药典》蒲黄标准 提供了实验依据，报道如下。

1仪器、试剂与药材

LC-6A高效液相色谱仪(岛津)；定量毛细管(Drummond)；SPD-6AV紫外检测器(岛津)。

异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙、香蒲新甙对照品(自制，经HPLC法测定，纯度在98%以上 )，异鼠 李素、β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定所)。乙腈(色谱纯)，其它试剂均为分析纯 。商品药材：购自10个地区，经电镜扫描鉴定，其中湖南长沙收集药材为东方香蒲T.orie nt alis，山东潍坊收集药材为长苞香蒲T.angustifolia，陕西西安收集药材为水烛香蒲 T. angustifolia，鉴定者系我院谢昭明副研究员，其它样品因品种混杂，无法鉴定其种属。

2蒲黄药材的薄层鉴别

2.1蒲黄中异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙、香蒲新甙的鉴别取本品 粉末2 g，加甲醇45 ml，超 声处理30 min，滤过，滤液浓缩至约2 ml，作为供试品溶液。另取异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙 、香蒲新甙2种对照品，加甲醇制成每1 ml各含2 mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取供 试 品溶液5～10 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上(自制)，以 醋 酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1.1∶0.9)为展开剂，展开，取出，晾干，于紫外光灯(254 nm) 下检视。供试品色谱中，与对照品色谱相应的R_{f(异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙}) =0.48，R_{f(香蒲新甙)}=0.31位置上，显相同颜色的斑点，见图1。

图1异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙香蒲新甙TLC图

1.异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙2.香蒲新甙3.湖南长沙

4.山东潍坊5.四 川成都 6.江苏南京

7.陕西西安8.广西南宁9.贵州贵阳

10.北京11.海南海口12. 广东广州

2.2蒲黄中异鼠李素的鉴别取本品粉末2 g，加80% 乙醇50 ml加热回流1 h，滤过，滤液蒸干 ，残渣加醋酸乙酯10 ml加热溶解，过滤，滤液浓缩至2 ml，作为供试品溶液。另取异鼠李 素 对照品，加醋酸乙酯制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液10～15 μl ，对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上(自制)，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶2 ∶ 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%AlCl₃乙醇溶液，105 ℃加热数分钟至斑点显色 清 晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的R_{f(异鼠李素)}=0.43位置上，显相同颜色 的斑点，见图2。

图2异鼠李素TLC图

1.异鼠李素2.湖南长沙3.山东潍坊4.四川成都

5.江苏南京6.陕西西安7 .广西南宁8.贵州贵阳

9.北京10.海南海口11.广东广州

2.3蒲黄中β-谷甾醇的鉴别取本品粉末2 g，加80%乙醇50 ml加热回流 1 h，滤过，滤液蒸 干，残渣加2 ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1 ml含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液，吸取供试品溶液5～10 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一硅 胶 G薄层板上(自制)，以石油醚-氯仿-醋酸乙酯(5∶8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以 10%硫酸乙醇液，105 ℃烘至紫红色斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的R _f(谷甾醇)=0.60位置上，显相同颜色的斑点，见图3。

图3β-谷甾醇TLC图

1.β-谷甾醇2.湖南长沙3.山东潍坊4.四川成都

5.江苏南京6.陕西西安7 .广西南宁8.贵州贵阳

9.北京10.海南海口11.广东广州

3蒲黄中异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙、香蒲新甙的含量测定

3.1色谱条件色谱柱YWG C₁₈柱，5 mm×200 mm，粒度5 μm；流 动 相乙腈-水(15∶85)；流速：1.0 ml·min^-1；柱温：25 ℃；检测波长λ=254 nm 。

3.2对照品溶液的制备精密称取异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙、香 蒲新甙对照品(自制，经H PLC法测定，纯度在98%以上，见图4)适量，用甲醇溶解制成每1 ml各含0.1 mg的对照品溶液 。

3.3供试品溶液的制备取蒲黄样品0.5 g，精密称 定，置50 ml量瓶中，加甲醇45 ml，超声 处理30 min，放置至室温后加甲醇稀释至刻度，静置，取上清液用0.45 μm微孔滤膜滤过， 弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

3.4色谱峰的绘制精密吸取供试品溶液、异鼠李素-3-O-新橙皮 糖甙对照品溶液、香蒲新 甙对照品溶液各5 μl，注入高效液相色谱仪中，按前述条件测试，绘制液相色谱图。在对 照 品色谱峰的相应位置上，供试品色谱图中有相同保留时间的色谱峰。样品中异鼠李素-3- O-新橙皮糖甙、香蒲新甙与其他成分得到较好分离，见图4。

图4蒲黄HPLC色谱图

A.对照品B.湖南蒲黄药材(Typha orientalis)

1.香蒲新甙2.异鼠李素-3-O-新橙皮糖皮糖甙

3.5 标准曲线的制备吸取异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙，香蒲新甙对照品溶液2，4，6，8 ， 10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标， 异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙、香蒲新甙对照品的量为横坐标，绘制标准曲线，得回归 方程： Y=517.64X-1794.81,r=0.9999，异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙在0.188～0.940 μg 与吸收度呈良 好线性关系；Y=422.31X-1492.76,r=0.9998，香蒲新甙在0.164～0.820 μg与吸收度呈 良好线性关系。

3.6精密度试验精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次，异鼠李素-3 -O-新橙皮糖甙，香蒲新甙峰面积的相对标准偏差分别为0.75%和1.03%。

3.7重现性试验取同一批药材样品5份，按上述色谱 条件测定 ，异鼠李素-3-O-新橙皮糖甙、香蒲新甙含量的相对标准偏差分别为1.71%和2.57% 。