摘要目的:测定血浆中氯氮及其主要代谢物的含量。方法:血浆用乙醚提取，经薄层层析分离，分别洗脱，残渣溶于50mmol^．L^-1H₂SO₄水溶液中，用二阶导数差示脉冲极谱法测定。结果:氯氮及其代谢物(Ⅰ、Ⅱ)的二阶导数差示脉冲极谱峰电位分别为：-0.600V、-0.590V、-0.645V，检测限分别为：0.27，0.11，0.22ng^．ml^-1。结论:该法简便、快速、灵敏，结果准确。

关键词氯氮

Study on quantitative determination of

chlordiazepoxide and its metabolite in blood by

secondary derivative differential pulse polarography

Zhao ShengmingLi MengLiang Yunaiet al

Beijing Hospital of the Ministry of the Public Health,Beijing 100730

ABSTRACTOBJECTIVE：To determine the content of chlordiazepoxide and its metbolite in blood.METHODS：The blood sample was first purified by ethey,then separated by thin-layer chromatography, residue was dissoled in 50 mmol^．L^-1 sulfuric acid-water solution, and then determined by secondary derivative differential pulse polarography.RESULTS：Secondary derivative differential pulse polarogram peak of chlordiazepoxide and its metabolite (Ⅰ、Ⅱ) was -0.600V,-0.590V and -0.645V.The detection limit was 0.27，0.11 and 0.22 ng^．ml^-1.CONCLUSION：This method is simple,rapid and sensitive.The result is accurate.

KEY WORDSsecondary derivative differential pulse polarography,plasma,chlordiazepoxids, metabolite

氯氮是临床上常用的抗焦虑、抗惊厥药。但该药可导致依赖性，并且毒性较强，若服用过量，可导致急性中毒，重者可导致昏迷甚至死亡。由于氯氮服用量较小，体液中浓度较低，其代谢物与原药化学结构相似，大多仍具有药理活性，要求检测方法必须灵敏度较高，并且原药品及其代谢物均能测出，故其体内药物检测具有一定难度。本文采用二阶导数差示脉冲极谱法(SDPP)^［1］对人体血浆中氯氮及其主要代谢物进行了定量研究，操作简便、快速、灵敏、结果准确，对本品的血药浓度监控及其毒理学、药物动力学的研究具有实用价值。

1方法

1.1仪器DP-A型微分脉冲极谱仪(山东日照市药品检验所与中科院大气物理研究所联合研制，1995年获得联合国TIPS发明创新科技之星奖)。

1.2药品与试剂氯氮、去甲基氯氮、去甲氧安定标准品(中国药品生物制品检定所)；薄层层析用硅胶(青岛海洋化工厂)；试剂均为分析纯；实验用水为去离子双蒸馏水。1mol^．L^-1磷酸盐缓冲液(pH9.0)：称取磷酸氢二钾174.17g、磷酸二氢钾2.00g，置1000ml量瓶中，加水溶解，定容。50mmol^．L^-1硫酸液：精密量取硫酸3.00ml，移入装有约600ml水的1000ml量瓶中，冷至室温，加水定容。

1.3血样处理取血浆样品2ml，置15ml的具塞玻璃离心管中，加水1ml、磷酸盐缓冲液(pH9.0)2ml、乙醚7ml，于旋涡混合器上混合10min，置离心机上以2000r^．min^-1离心5min，将乙醚吸出，于45℃水浴中蒸干。

1.4极谱条件将仪器功能置SDPP处，选用滴汞电极为工作电极，滴汞间隔为28s,Ag/AgCl电极为参比电极，内装1mol^．L^-1KCl参比溶液，微铂电极为辅助电极，预置电压为-0.400V，扫描范围为-0.400～-0.800V，脉冲振幅为40mV，扫描速度为150mV^．s^-1，电流灵敏度为5μA^．V^-1。

1.5测定方法用乙醚100μl溶解残渣，点样于20cm×20cm硅胶薄层板上。用氯仿∶丙酮(6∶4)展开剂展开至溶液前沿约15cm时为止。将板置紫外灯下观察，可见3个斑点：氯氮卓(R_f=0.20)，去甲基氯氮(R_f=0.05)，去甲氧安定(R_f=0.33)。将3个斑点(连同硅胶吸附剂)分别刮下，置3支15ml离心管中，加甲醇5ml，置旋涡混合器上混合30s，以2000r^．min^-1的速度离心5min，取上清液移入15ml具塞玻璃离心管中，在65℃水浴上蒸干，加50mmol^．L^-1盐酸液8.00ml，混匀，加入极谱池中，富集5min，分别在上述极谱条件下，自-0.400～-0.800V以150mV^．s^-1的速度进行阴极扫描。精密称取氯氮(A)、去甲基氯氮(B)、去甲氧安定(C)标准品适量，用氯仿制成含A为200μg^．ml^-1、B为150μg^．ml^-1、C为10μg^．ml^-1的溶液。按1.3和1.5项处理和扫描，得A、B、C标准品的SDPP图，见图1。取空白血浆2ml，按1.3项处理，加50mmol^．L^-1盐酸溶液8.00ml，混匀，加入极谱池中，富集5min，在1.4项极谱条件下扫描，得空白血浆的SDPP图。取空白血浆2ml，精密加入A、B、C标准品适量，制成含A为200μg^．ml^-1、B为150μg^．ml^-1、C为12μg^．ml^-1的血浆混合液，按1.3和1.5项处理后，在1.4极谱条件下扫描，得A、B、C的SDPP图。

图1氯氮(A)、去甲基氯氮(B)和去甲氧安定(C)的SDPP图

2结果

2.1线性试验分别精密称取3种对照品适量，用氯仿制成含氯氮、去甲基氯氮、去甲氧安定分别为：0.01，0.05，0.5，5.0，50.0，100，150，200，250，300μg^．ml^-1；0.01，0.40，4.0，20，40，60，80，100，150，200μg^．ml^-1；0.01，0.025，0.05，0.10，1.00，2.5，5.0，7.5，10.0，20.0μg^．ml^-1的系列标准溶液。取空白血浆33份(其中3份做每种标准品的空白对照)，每份2ml分别加入上述3种标准品的溶液2ml，按1.3项下处理、测定。实验结果表明，在此范围内，氯氮及其代谢物的浓度C与其SDPP峰幅值d²i/dE²(mm)呈线性关系(P＜0.01)。根据实验结果，求出回归方程为：

氯氮：C=5.0731d²i/dE²-19.1188(r=0.9999,n=10,P＜0.01)

去甲基氯氮：C=4.5308d²i/dE²-1.5095(r=0.9985,n=10,P＜0.01)

去甲氧安定：C=5.1076d²e/dE²-0.0333(r=0.9999,n=10,P＜0.01)

氯氮、去甲基氯氮<