摘要目的：研究肝损害大鼠ig泛昔洛韦(famciclovir)后体内喷昔洛韦(penciclovir)药代动力学， 探讨肝损害大鼠肝醛氧合酶体外氧化泛昔洛韦的酶动力学行为。 方法： 用HPLC法测定CCI₄引起肝损害的SD大鼠ig泛昔洛韦200 mg·kg^-1后的血浆中喷昔洛韦浓度及肝损害的SD大鼠肝醛氧合酶匀浆中泛昔洛韦浓度。结果： 肝损害大鼠喷昔洛韦药代动力学参数为t_1/2ka(0.34±0.13) h， C_max(43.4±27.6)mg·L^-1， AUC_0～8h106.3±19.5 mg·L^-1.h［对照分别为(0.53±0.14)h， (27.6±6.4)mg·L^-1， (91.8±17.3)mg·L^-1.h，P＜0.05］。 肝损害大鼠肝醛氧合酶体外氧化泛昔洛韦的酶动力学参数为K_m(0.1632±0.0882) mmol·L^-1、 V_max(36.87+15.46)nmol·min^-1.mg^-1protein［对照组K_m， V_max分别为(0.1184±0.0479)mmol·L^-1， (51.72±21.09)nmol·min^-1.mg^-1protein;P＜0.05和P＜0.01］。结论：肝损害大鼠对泛昔洛韦吸收和转化成喷昔洛韦能力明显减低， 但消除基本不变。 肝醛氧合酶的亲和力和最大反应速率均降低， 可能是肝损后泛昔洛韦药动学行为改变的因素之一。

Pharmacokinetic of ig Famciclovir in Rats with Liver Lesion

Long Qicai, He Lei, Zeng Guixiong

（Department of Clinical pharmacology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510080, P.R.China）

ABSTRACTAim： To investigate pharmacokinetics(PK) of penciclovir(PCV) in vivo after ig famciclovir(FCV) used for rats with hepatic damage, and study enzymatic kinetics of hepatic aldehyde oxidase(AO) for oxidizing FCV in vitro. Methods: Plasma PCV concentration were determined by HPLC after ig FCV 200 mg·kg^-1 used in rats of CCI₄-induced liver lesion. FCV concentration in hepatic homogenate of rats with liver damage was also determined by HPLC. Results: PK parameters were t_1/2ka 0.34±0.13 h， C_max43.4±27.6 mg^.-1 and AUC_0～8h 106.3±19.5 mg·L^-1.h in rats with liver damage (0.53±0.14 h, 27.6±6.4 mg·L^-1, 91.8±17.3 mg·L^-1.h, respectively， in controlled group， P＜0.05). The enzymatic kinetic parameters were K_m 0.1632±0.0882 mmol·L^-1 and V_max 36.87±15.46 nmol·min^-1.mg^-1 protein in rats with liver damage (0.1184±0.0479 mmol·L^-1 and 51.72±21.09 nmol·min^-1.mg^-1 protein, respectively， in controlled group， P＜0.05). ConclusionAbsorption of FCV and FCV transformation to PCV, obviously decreased in rats with liver damage, but there was no changed in elimination. Declined activity of AO was probably one of factors in PK change of FCV after hepatic lesion.

KEY WORDSFamciclovir; Pencilorvir; Pharmacokinetic; Aldehyde oxidase; Rats; Hepatic damage

泛昔洛韦， 即2-［2-(2-Amino-9H-purin-9-yl)ethyl］-1， 3-propanediol diacetate(ester)， 是核苷类抗病毒药物， 也是喷昔洛韦的前体药。 泛昔洛韦有效对抗疱疹病毒、 水痘病毒、 EB病毒和乙型肝炎病毒^［1］。 泛昔洛韦治疗带状疱疹， 具有用药次数少， 效果优于阿昔洛韦的特点。 在严重肝损害的病理情况下， 泛昔洛韦的体内药动学行为有无改变? 如果有， 改变的机制是什么? 本文试图对这些问题进行初步研究和探讨。 本实验研究泛昔洛韦在肝损害情况下在大鼠体内药动学规律的变化， 并对这种变化进行了体外酶动力学的分析， 为泛昔洛韦在肝损害病人临床应用提供参考。

1材料与方法

1.1药品泛昔洛韦原料(含量99.95%， 批号980105)、 喷昔洛韦(含量99.91%, 批号980705， 浙江省海正药业股份有限公司)。

1.2实验动物SD大鼠， 体重(190±20)g， 雌雄兼有， 第一军医大学实验动物部提供， 动物合格证号98A05。

1.3实验设计与实验方法

1.3.1肝损害大鼠药动学SD大鼠(190±20)g， 分别于第1天和第5天两次皮下注射CCI₄原液6ml·kg^-1。 第10天取血、 尿检测肝、 肾功能。 随机取3只肝损害和2只正常大鼠进行病理检查。 肉眼可见受损的肝呈灰白色， 明显萎缩， 质地变脆。 切片、 HE染色。 镜检可见肝细胞广泛的脂肪变性， 少部分肝细胞坏死。 第15天取有明显肝损害表现、 肌酐清除率无改变的8鼠作为药动学实验。 另取8只健康大鼠作为肝损害前对照组。 服药前12 h大鼠禁食但可自由饮水。 两组大鼠分别ig泛昔洛韦200 mg·kg^-1(30mg·ml^-1)。 ig后禁水2 h， 禁食4h。 于0， 0.25， 0.5， 0.75， 1， 1.5， 2， 3， 4， 6， 8 h分别于尾部各取血0.4 ml， 置于肝素化试管中， 分离血浆， 置-20℃保存至测定。

1.3.2大鼠肝醛氧合酶氧化泛昔洛韦的动力学

1.3.2.1大鼠肝醛氧合酶的制备SD大鼠39只。 其中19鼠按上述方法注射CCI₄诱发肝损害， 通过检查肝、 肾功能确认已产生肝损害但无肾损害。 20鼠为正常鼠(对照组)。 断头处死动物， 按文献^［2,3］方法制备正常大鼠和肝损害大鼠的肝醛氧合酶。 样本保存于4℃。

1.3.2.2大鼠肝醛氧合酶对泛昔洛韦的氧化反应配制30， 60， 120， 240， 480， 960 nmol·L^-1泛昔洛韦底物液(内含0.1mmol·L^-1和EDTA， PBS 67 mmol·L^-1， pH7.0)。 取2.9 ml放于离心管中， 37℃水浴振荡10 min。 加0.1 ml醛氧合酶提取液并振荡。 以此作为反应的起点， 温育15 min， 从各反应管中取200 μl， 移入含有200μl甲醇的试管中终止反应， 过滤后-20℃保存至测定。

1.3.3喷昔洛韦和泛昔洛韦测定

1.3.3.1血浆中喷昔洛韦浓度的测定由于泛昔洛韦在体内迅速转变成喷昔洛韦， 血中均不能检测到原型药， 只可检测到喷昔洛韦^［4］， 故只测定口服泛昔落韦后血的喷昔洛韦浓度。 用反相HPLC外标法(Waters M510高效液相色谱仪)， Hypersil BDS C₁₈柱， 粒径5μm， 柱长125×4.6mm。 取血浆0.25ml在旋涡中加10%高氯酸0.1 ml。 加3 ml三氯甲烷， 旋涡10 min， 600 g离心20 min。 收集上清液， 过滤后取10 μl进样测定。 流动相为甲醇： 乙腈： 磷酸缓冲液(pH 7.0)=5∶0.1∶94.9%(v/v)， 流速2.0ml·min^-1。 紫外检测波长为254nm。 AUSF 0.003。

1.3.3.2肝匀浆醛氧合酶提取物中泛昔洛韦的测定 HPLC外标法测定。 仪器及色谱柱与上述相同。 流动相为乙腈：乙酸铵缓冲液(0.5mmol·L^-1， pH 7.0)=7∶93(v/v)； 流速1.5 ml·min^-1。 取1.3.2.1项所述的过滤液10 μl进样测定。 紫外检波长306nm。 AUSF 0.005。 测定样品的峰面积， 用标准曲线计算样品中的(ΔS)。 用V=ΔS/(ΔT/C_pro)公式计算反应速率。 (差分方程式中的V为反应速率， ΔS为泛昔烙韦在时间T时的浓度， ΔT为反应时间， C_pro为蛋白含量)。 1/V(反应速率的倒数)对1/S(浓度的倒数)作图， 计算反应液中酶的动力学参数。

1.3.3.3数据处理采用梯形法计算AUC_0-8h。 用3P87程序计算出其它药动学参数。 用团体t检验检查两组数据的差异。 以P值0.05为显著性界限。 P＜0.05和P＜0.01分别为差异有显著性和差异显著。

2结果

2.1喷昔洛韦的色谱行为喷昔洛韦色谱峰的保留时间为4 min。 喷昔洛韦在大鼠血浆中的标准曲线线形范围在0.25～50(0.25， 0.5， 1， 5， 2.5， 10， 50)mg·L^-1。 峰面积A对浓度C作图。回归方程为C=20776.9A-2232.1(r=0.9983, n=7)。0.5， 5， 50 mg·L^-13个浓度的喷昔洛韦血浆标准样品的日内变异系数为2.7%～7.3%， 日间变异为5.8%～8.2%。 平均回收率为82.6%～91.3%。

2.2泛昔洛韦的色谱行为泛昔洛韦标准品肝匀浆粗酶提取物的色谱峰的保留时间为15 min。 峰面积A对浓度C作图。 线性范围在10～960(10， 20， 30， 60， 120， 240， 480， 960)μmol·L^-1。 回归方程为C=672.5 A-51.28(r=0.999 7, n=6)。 30， 240， 960 μmol·L^-13个浓度的泛昔洛韦标准在肝匀浆粗酶提取物样品的日内变异系数为5.1%～5.9%， 日间变异为6.7%～10.7%。

2.3肝功能损害大鼠口服泛昔洛韦的药动学8鼠在肝损害的前后， 分别ig泛昔洛韦200 mg·kg^-1， 测得的血药浓度并计算药动学参数。 与肝损害前比较， 大鼠体内喷昔洛韦C_max明显下降、 t_1/2ka延长、 AUC_0～8h变小， t_max和t_1/2β无显