摘要：目的：探讨大鼠和猴iv、im重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh－bFGF）的药动学特征。方法：大鼠iv¹²⁵I－rh－bFGF1 600ng/kg，猴分别iv和im¹²⁵I－rh－bFGF 750ng/kg后，用SDS－PAGE结合放射性计数测定生物样品中rh－bFGF含量。结果：rh－bFGF在大鼠和猴血浆中的T1/2较短，在大鼠肺和坐骨神经的放射性计数最高，48h尿累积排出降解物为给药量的92.52％。结论：大鼠和猴iv¹²⁵I－rh－bFGF后，血中消除快，降解产物主要由肾脏排出，主要分布于大鼠在肺和坐骨神经。猴im给药的绝对生物利用度为90％。

电泳法（SDS－PAGE）

中图分类号：R965文献标识码：B文章编号：1001－0408（2000）02－0062－03

Pharmacokinetics of Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor in Rats and Monkeys

LONG Qicai,FU Zhili(Dept.of Clinical Pharmacology,Sun Yatsen University of Medical Sciences,Guangzhou 510080)

ABSTRACT：AIM：To study pharmacokinetic characteristics after iv and im injection of recombinant human basic fibroblast growth factor(rh－bFGF)to rats and monkeys.METHODS：¹²⁵I－rh－bFGF 1 600ng/kg was intravenously administered to 10 rat_

s.¹²⁵I－rh－bFGF 750ng/kg were intravenously and intramuscularly given to 3 monkeys separately.SDS－PAGE and radioactive_count were used to determine the rh－bFGF concentrations in biological samples.RESULTS：T1/2α of rh－bFGF in rats and mon_

keys were rather short.Radioactive counts of the lungs and sciatic nerves in rats were the highest.A ccumulated degradation products in 48h urine were 92.52％ of dose given in rats.CONCLUSIONS：Prototype in blood eliminated rapidly and a majority of degradation products excreted via kidneys after iv injection of ¹²⁵I－rh－bFGF to rats and monkeys.rh－bFGF mainly distributed in sciatic nerves after iv administration to rats.Absolute bioavailability of im administration to monkeys was 90±5％.

KEY WORDS：rh－bFGF;rat;monkey;pharmacokinetics;bioavailability;¹²⁵I labeling tracer method;SDS－PAGE

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是分子量16.4KD的多肽，有多种生物学活性和临床用途。其中神经营养活性最引人注目^[1～4]。虽然重组牛碱性成纤维细胞生长因子已用于临床，但同源性优于重组牛碱性成纤维细胞生长因子的重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh－bFGF），尚未见到药动学研究的较全面的实验资料的报道。本实验旨在探讨rh－bFGF在啮齿动物和灵长动物体内的药代动力学特点，为该药的临床应用提供参考资料。

1材料和方法

1.1药物、试剂和仪器

rh－bFGF由珠海东大生物制药有限公司提供，纯度98％，批号9510902；¹²⁵INa由北京原子能研究院出品；阴离子交换树脂（AG－1×8）和MTT为Sigma公司产品；Sephadex G－50、丙烯酰胺（Acr）、N，N'－亚甲基双丙烯酰胺（Bis）由PHARM-ACIA公司生产；BALB/c 3T3细胞由中国医学科学院血液研究所提供；杜皮克氏改良哥尔氏培养基（DMEM）及胰酶为GIBCO公司出品。所有试剂均为分析纯。Mini Protein Ⅱ型电泳仪为美国Bio－Rad公司产品；FMJ－182 型γ计数仪为中国科学院上海原子能研究所日环仪器厂产品；CO₂培养箱由Forma Scientific公司出品。

1.2动物

健康二级SD大鼠，体重（200±20）g，中山医科大学动物中心提供，动物合格证号95A05；健康成年食蟹猴，体重（4.7±1.1）kg，广东顺德实验动物研究所提供，动物合格证号95B19。

1.3¹²⁵ I－rh－bFGF的制备

¹²⁵I经氯胺T法标记于rh－bFGF，用阴离子交换树脂柱分离纯化标记物，并用纸层析和SDS－PAGE两种方法鉴定¹²⁵I－rh－bFGF放化纯度。MTT法鉴定标记物的生物学活性。用rh－bFGF和/或生理盐水将¹²⁵I－rh－bFGF配制成所需浓度供iv和im用。

1.4血浆药物浓度的测定

大鼠10只，♀♂各半。用乙醚麻醉后行颈动脉插管，待鼠清醒后给药和取血。经尾静脉iv¹²⁵I－rh－bFGF 1 600ng/kg。于0、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、5、7、10、15min自颈动脉插管取血0.2ml。血样本置于肝素化和含5％氟化钠10μl的试管中，分离血浆待测。猴3只，2♂1♀，用氯胺酮麻醉后，分别iv和im¹²⁵I－rh－bFGF 750ng/kg。两次给药间隔为8wk。iv后于0、1、3、5、10、15、20min，im后于0、2、5、10、15、20、30、45、60、90、120min，分别取静脉血0.2ml，分离血浆。

1.5组织药物浓度的测定

大鼠2组，每组5只，♂♀兼有。分别iv¹²⁵ I－rh－bFGF 1 600ng/kg。一组于给药后1h、另一组于给药后1.5h断头处死动物。取一定量的脑、心、肺、胃、肠、肝、双肾、脾、体脂、骨骼肌、坐骨神经及生殖器官组织，称重，加2倍体积的生理盐水磨成匀浆，离心后吸取上层液以测定药物在器官的分布。

1.6胆汁、尿、粪药物浓度的测定

大鼠10只，♂♀各半。用乙醚麻醉大鼠后行胆管插管，待鼠清醒后iv¹²⁵I－rh－bFGF 1 600ng/kg，分段（0～3h、3～6h、6～12h、12～24h）收集给药后24h胆汁，记录胆汁量，留样待测；分段（0～12h、12～24h、24～48h）收集48h尿。猴分别iv和im¹²⁵I－rh－bFGF 750ng/kg，给药后分段（0～24h、24～48h、48～72h）收集48h或72h尿和粪，记录尿量，烤干粪便后称重，取样待测。

1.7生物样品中rh－bFGF原型物的检测方法

用SDS－PAGE法分离rh－bFGF原型物。电泳条件：12％分离胶，5％浓缩胶，5×Tris－甘氨酸电泳缓冲液，2×SDS凝胶加样缓冲液。样品在浓缩胶中的电压为120V，在分离胶中的电压为150V。分离胶总长度为5cm。电泳到溴酚蓝距分离胶上缘2.5cm时，终止电泳。样品自浓缩胶开始，依次切成浓缩胶1片、分离胶1cm1片、0.5cm8片共10小片胶，分别装入测量管中，用γ计数仪测量cpm，计算dpm转换成mBq。

用rh－bFGF将注射用的¹²⁵I－rh－bFGF与血浆配成不同浓度，电泳后切胶，测定各片胶cpm值，作出rh－bFGF片胶mBq值与浓度的电泳标准曲线，计算回收率和变异系数。将血浆样品电泳后rh－bFGF片胶的mBq值代入电泳标准曲线得到rh－bFGF原型物的浓度。因组织内放射性计数太低，未进行电泳，仅测量cpm。

1.8数据处理

血药浓度－时间数据在3p87程序作曲线拟合，并计算药动学参数。

2结果

2.1¹²⁵I－rh－bFGF制备及电泳结果

¹²⁵I－rh－bFGF放射性浓度为（2.5±0.9）×10⁹cpm/ml，放射性比活度为（2.9±0.8）×10⁶ mBq/μg，纸层析和电泳鉴定放化纯度分别为（98.3±0.6）％和（97.4±1.1）％（P＞0.05）。经MTT法测定，同批rh－bFGF标记前、后的ED50分别为1.22ng/ml、1.75ng/ml（标准参照为2.0ng/ml）。说明经¹²⁵I标记后，rh－bFGF生物活性无差异（与标记前比较P＞0.05）。电泳图谱见图1。

图1rh-bFGF电泳图

2.2标准曲线

以mBq对浓度作图，用于大鼠iv¹²⁵I－rh－bFGF 1 600ng/kg的标准曲线的线性范围在0.19～12（0.19、0.38、0.75、1.5、3、6、12）ng/ml。回归方程为y=10 695x＋771，γ=0.9 998。低、中、高（0.38、0.75、6ng/ml）3个浓度的日内、日间变异系数分别为0％～1.9％和1.8％～3.3％。回收率为71％～75％。用于猴iv和im¹²⁵I－rh－bFGF 750ng/kg的标准曲线的线性范围在0.16～40（0.16、0.315、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40）ng/ml。回归方程为y=5 074x—2 236，γ=0.9 958。低、中、高（1.25、5、20ng/ml）3个浓度的日内、日间变异系数分别0.6％～3.7％和0.2％～1.2％。回收率为86％～109％。

2.3血浆rh－bFGF浓度及药动学参数

大鼠iv¹²⁵ I－rh－bFGF 1 600 ng/kg后，C0为（11.2±0.2）ng/ml。此后，血药浓度迅速下降，iv后2min，降至（2.90±0.08）ng/ml。用药后15min，血药浓度在（0.87±0.02）ng/ml。血药浓度－时间曲线经拟合呈二房室模型。平均血药浓度－时间曲线见图2。

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