【摘要】目的：观察总丹酚酸(Sal)对大鼠局灶性脑缺血损伤及抗氧化酶活性的影响。方法：用插线法阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO) 24 h再灌注2 h或24 h。梗塞灶面积用TTC染色分析，脑水含量用干湿重法，神经功能缺损采用8级评分。并分析缺血脑组织的4种抗氧化酶活性水平。结果：Sal 5.0, 10.0 mg/kg(于MCAO术后10 min及24 h由舌下静脉注射给药)可明显缩小脑梗塞面积，改善神经功能缺损，并减少脑水含量。大鼠MCAO 24 h再灌注初期(2 h)时，脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)的活性明显升高，谷胱甘肽S-转移酶(GSH-ST)的活性显著下降。而在再灌注后期(24 h)，则SOD，GSH-PX及CAT活性显著下降，GSH-ST的活性进一步降低。Sal可在缺血再灌注状态下进一步升高SOD，GSH-PX及CAT活性，但对GSH-ST的水平无明显影响。结论：Sal对大鼠局灶性脑缺血损伤具有神经保护作用，此作用可能与SOD，GSH-PX及CAT活性水平的升高有关。：观察总丹酚酸(Sal)对大鼠局灶性脑缺血损伤及抗氧化酶活性的影响。方法：用插线法阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO) 24 h再灌注2 h或24 h。梗塞灶面积用TTC染色分析，脑水含量用干湿重法，神经功能缺损采用8级评分。并分析缺血脑组织的4种抗氧化酶活性水平。结果：Sal 5.0, 10.0 mg/kg(于MCAO术后10 min及24 h由舌下静脉注射给药)可明显缩小脑梗塞面积，改善神经功能缺损，并减少脑水含量。大鼠MCAO 24 h再灌注初期(2 h)时，脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)的活性明显升高，谷胱甘肽S-转移酶(GSH-ST)的活性显著下降。而在再灌注后期(24 h)，则SOD，GSH-PX及CAT活性显著下降，GSH-ST的活性进一步降低。Sal可在缺血再灌注状态下进一步升高SOD，GSH-PX及CAT活性，但对GSH-ST的水平无明显影响。结论：Sal对大鼠局灶性脑缺血损伤具有神经保护作用，此作用可能与SOD，GSH-PX及CAT活性水平的升高有关。

【中图分类号】R743.31【文献标识码】A【文章编号】1003-3734(2000)07-0452-04

Effects of total salvianolic acid on focal cerebral

ischemic injury and antioxidase activities

WU Jun-fangWANG JieZHANG Jun-tian

（Institute of Materia Medica,Chinese Academy of Medical Sciences

and Peking Union Medical College,Beijing 100050）

【Abstract】Objective:To study the effects of total salvianolic acid(Sal)on focal cerebral ischemic injury and antioxidase activities.Methods:Focal cerebral ischemia in rats was produced by 24h occlusion of the middle cerebral artery(MCAO)and 2 or 24h reperfusion.The infarct area was measured by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC)staining technique.The cerebral water content was determined by wet/dry weighing method and the content of neurological deficits were evaluated by 0～7 scales.The activities of 4 antioxidases in ischemic tissue of brain were analyzed.Results:The decrease in infarct area and water content as well as improvement in neurological deficits were significant by intravenous injection of Sal 5.0,10.0 mg/kg 24h post operation.A significant increase in activities of SOD,GSH-PX and catalase and significant decrease in activities of GSH-ST in rats were observed during the early stage of reperfusion.However,the activities of all the enzymes mentioned above were significantly decreased 24h after reperfusion.The activities of SOD,GSH-PX,and catalase under reperfusion could be risen further by Sal but no effect on GSH-ST.Conclusion:Sal has a neuroprotective effect against focal cerebral ischemic injury and this effect may be related to increase in activities of SOD,GSH-PX,and catalase.

【Key words】total salvianolic acids; focal cerebral ischemia;ischemia-reperfusion; antioxidant enzyme;rats

总丹酚酸(total salvianolic acids, Sal)是从传统中药丹参中提取的含多个酚羟基的水溶性化合物。以往我室的研究发现^［1～4］，Sal在体外能直接清除黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系产生的超氧阴离子及Fe²⁺-H₂O₂体系产生的羟自由基,可抗Fe²⁺-半胱氨酸诱导的肝微粒体脂质过氧化，对白内障和心肌缺血再灌注损伤有预防和治疗作用。丹酚酸A还能改善小鼠脑缺血再灌注所致的学习记忆功能障碍。新近的研究发现^［5,6］，Sal具有抗脑缺血作用，可抑制小鼠脑突触体谷氨酸释放，并能抑制大鼠在体动静脉血栓形成。本实验在大鼠可逆性大脑中动脉阻塞(MCAO)模型上，观察Sal的神经保护作用及其对抗氧化酶活性的影响。

材料与方法

1材料

药品与试剂：Sal由中国医学科学院药物研究所植化室提供，含丹酚酸A和B，迷迭香酸，原儿茶醛等酚类化合物，其中以高效液相分析法测得丹酚酸B的含量为40 %。临用前以生理盐水溶解成所需浓度。红四氮唑(TTC)为北京化工厂产品；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽S-转移酶(GSH-ST)测试试剂盒由南京建成生物工程公司提供。其余试剂均为市售分析纯。

动物：Wistar大鼠，雄性，体重320～380g，由中国医学科学院实验动物中心提供。

2方法

2.1局灶性脑缺血模型^［7］大鼠以水合氯醛350 mg/kg，ip麻醉，仰卧固定，颈正中切口，依次暴露右侧颈总、颈外和颈内动脉，结扎颈外动脉及其分枝和翼腭突动脉以阻断颅外来源的侧副循环血流。在颈总动脉远心端近分叉处插入一根经10 mol/L硝酸溶液处理的玻璃纤维 (直径 0.285 mm)，当进丝约19 mm时可明显感到阻力，同时可见颈内动脉颅外段弯曲、紧张，此时再插入约2 mm，表明线的头端已穿过大脑中动脉起始部。然后将颈总动脉残段用丝线结扎，以防插线脱落。再通时只须将纤维抽去。假手术组纤维仅进至颅底。

术中、术后室温严格控制在24～25 ℃，大鼠体温维持在36.5～37.5 ℃。

2.2实验分组大鼠被随机分为10组，8只/组，分别为：假手术组、缺血24 h再灌注2 h或24 h组、再灌2 h Sal组(于MCAO术后10 min及24 h iv Sal 2.5, 5.0, 10.0 mg/kg，再灌注2 h)、再灌24 h Sal组(于MCAO术后10 min、24 h及36 h iv Sal 2.5, 5.0, 10.0 mg/kg，再灌注24 h)、对照组(iv等容量生理盐水)。

2.3神经功能缺损评分大鼠MCAO 24 h再灌注2 h或24 h时进行行为评分。参照文献^［8］方法，将神经功能缺损分为0～7级。

2.4脑梗塞面积和水含量的测定大鼠断头取脑，去掉嗅球、小脑及低位脑干，沿冠状面切成5片，立即置于TTC染液(含4 % TTC 1.5 ml, 1 mol/L K₂HPO₄ 0.1 ml, 双蒸水3.4 ml) 5 ml中，避光37℃水浴孵育30 min。取出脑片放入10 %福尔马林中固定。正常组织染成玫瑰红色，坏死组织呈白色。用重量求积法测量梗塞面积，计算梗塞区域占全脑面积的百分比。用干湿重法测定脑水含量。大鼠MCAO 24 h时，断头取脑，去掉嗅球、小脑及低位脑干，立即称取湿重，置120 ℃的烤箱中烘烤约18 h后称取干重。

2.5抗氧化酶活性的测定 大鼠断头取脑，去掉嗅球、小脑及低位脑干，在冰上用4 ml缓冲液(含250 mmol/L sucrose, Tris-HCl5 mmol/L, EDTA 0.1 mmol/L, pH 7.5) 制成10 %组织匀浆，经10 000×g于4 ℃离心20 min，取上清液按试剂盒说明书分别测定SOD，GSH-PX，CAT及GSH-ST的活性。蛋白质定量用Lowry法^［9］。

3统计方法

所有计量资料均以±s表示，差异的显著性用t检验。

结果

1Sal对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

大鼠MCAO 24 h再灌注2 h后，所有动物均出现了神经功能缺损，主要表现为提尾悬空时，左肩内旋，左前肢内收，肌力下降，行走时向左侧环转，生理盐水组尤为明显。脑组织出现明显的梗塞灶及水肿，见表1。

而在再灌注24 h时，由表2可见，大鼠的行为障碍更为明显，梗塞灶进一步扩大，脑水肿加重。于MCAO术后10 min，24 h或36 h iv Sal 2.5, 5.0, 10.0 mg/kg，能显著改善大鼠的神经功能缺损，缩小脑梗塞面积，减轻脑水含量。Sal的这种神经保护作用在MCAO后再灌注2 h尤为明显，其有效剂量低达2.5 mg/kg。

表1Sal对MCAO 24 h再灌注2 h大鼠的神经

保护作用(n=8,

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