摘要目的：研究促细胞代谢素注射液的促进细胞呼吸和促进脂肪细胞对葡萄糖摄取的生物活性。方法：“促细胞代谢素注射液”促进细胞呼吸试验采用微量呼吸减压法进行，促进脂肪细胞对葡萄糖摄取试验采用³H法进行，并与进口爱维治进行比较。结果：促细胞代谢素注射液具有刺激豚鼠肝匀浆线粒体的呼吸活性，呼吸活力QO₂＞4.0 μl O₂(mg·h)，刺激指数SI＞2.5；促细胞代谢素注射液具有促进大鼠脂肪细胞摄取³H标记的葡萄糖的生物活性，刺激指数μ＞2.0。结论：促细胞代谢素注射液具有促进细胞呼吸和促进脂肪细胞对葡萄糖摄取的生物活性，且此生物活性与爱维治无显著差异。

THE EXPERIMENTAL STUDY OF THE BIOLOGICAL ACTIVITY OF

THE “PROMOTING CELLULAR METABOLIC AGENT INJECTION” (PCMA)

Yu Hongru, Xiao Jianying, Liu Yongzhang, et al.

(Biochemistry Department of Jinzhou Medical College, JinZhou 121001)

ABSTRACTOBJECTIVE: To study the biological activity of the national fourth grade new drug “Promoting Cellular Metabolic Agent Injection” (PCMA) to promote the cellular respiration and to promote the adipocytes to intake the glucose. METHODS: The method of microrespiration decreasing pressure was used to study the PCMA to promote the cellular respiration; The method of H³ was used to study the PCMA to promote the adipocytes to intake the glucose; At the same time the rseults of the PCMA was compared with the imported drug “actovegin”. RESULTS: PCMA had the bilogical activity to to promote the liver homogenate respiration, the respiration avtivity QO₂＞4.0μl O₂/mg·h, the stimulation indes SI＞2.5; PCMA had the bilogical activity to promote the rat adipocytes to intake the H³-D-glucose, the stimulation indes μ＞2.0; the bilogical activity of PCMA was similar to “actovegin” （P＞0.05). CONCLUSION: PCMA had the bological activity to promote the cellular respiration and to promote the adipocytes to intake the glucose, and its biological activity was the same as “actovegin”.

KEY WORDSPromoting cellular metabolic agent injection; Rspiration activity; Adipocytes intaking

我们以小牛血清为原料，采用微量呼吸减压法和同位素法测定促细胞代谢素注射液的呼吸活性和脂肪生成增加活性，同时与进口爱维治进行对照，为控制产品质量及进一步研究其药效学和临床疗效提供科学的依据。

材料与方法

1材料

1.1仪器微量呼吸减压仪(SKW-3型，上海科技大学仪器厂)，液体闪烁仪(FJ2101型，西安2627厂)，多头细胞收集器(HYS-4型，海军医学研究所上海跃进医疗器械厂)；震荡水浴器(DS60型，北京市医疗设备厂)，显微镜(CH30-213E型，日本OLMYPOS)。

1.2实验动物豚鼠：雄性，体重250～350 g；大鼠：雄性，Wistar种，体重180～200 g。

1.3主要试剂麝香草酚及2,5-二苯口恶唑5′-苯基口恶唑及胶原酶（Sigma公司）吖啶橙（Chroma公司）,D-³H-葡萄糖（Amersham pharmacia piotech公司）。

2方法

2.1呼吸活性测定方法用瓦氏呼吸减压仪测定豚鼠肝匀浆的呼吸活力。从测得的耗氧量计算出呼吸活力QO₂（μl O₂/(mg·h)）和刺激指数SI。

2.1.1雄性豚鼠肝匀浆液取体重250～350 g的豚鼠1只，放血处死后， 取出肝脏，用生理盐水洗净，置滤纸上吸干、称重，移置玻璃匀浆器内，按重量1∶3加入生理盐水，研匀制成匀浆液。

2.1.2测定方法① 预先把测压计反应瓶洗净并干燥备用；② 装好测压液于测压管内，调节液面至150 mm；③ 加20% KOH溶液0.2ml于反应瓶中间小杯中；④ 反应瓶中先加入0.2 mol/L KH₂PO₄溶液1.1 ml，肝匀浆液1.0 ml，然后加供试品0.2 ml于反应瓶中；⑤ 由于肝匀浆本身有耗氧作用，故试验时以0.2 mol/L KH₂PO₄0.2 ml代替供试品，其他试剂相同作空白管；⑥ 将装好的反应瓶按管号与测压计相连（注意密闭，勿使漏气），置37 ℃恒温水浴中；⑦开动震荡器10 min（120次/min）使反应瓶内外温度一致。关闭三向活塞，将测管内的样品倾入反应瓶中，调节闭口管液面至150 mm处，记下开口端液面初读数（A），开始计时，反应30 min记下开口端液面最后读数（B），重复6次，求其平均值。

2.1.3分组分成样品与空白两组，空白组4支管，样品组为10支管。样品组每管加20% KOH 0.2 ml，KH₂PO₄ 1.1 ml，肝匀浆1.0 ml及样品液0.2 ml；空白组每管加KOH 0.2 ml，KH₂PO₄ 1.3 ml及肝匀浆1.0 ml。

2.1.4计算方法

QO₂（μl O₂/(mg·h)）＝（A-B-ΔC）×K/(G·I)

K:反应瓶常数，G:肝匀浆干重（105℃恒重）（mg），I:反应时间（h），刺激指数（SI）＝供试品QO₂/空白QO₂

2.2脂肪生成增加率的测定用同位素标记法测定放射性标记的葡萄糖掺入脂肪细胞的量，由此计算出刺激指数μ。

2.2.1脂肪细胞的分离取雄性Wister大鼠（180～200 g），低脂饲料喂养2 d，乙醚麻醉，杀死动物，切开阴囊取出附睾脂肪垫，于生理盐水溶液中漂洗，按脂肪组织重量每1g组织加入100 mg胶原酶，3 ml保温缓冲液，在37℃水浴中震荡（150次/min）保温12 h，分散脂肪细胞，用镊子去掉未分散的大块组织，细胞悬液置离心管中离心（400 r/min ）1 min，脂肪细胞悬浮于上层，用吸管吸去下层溶液，脂肪细胞加10ml保温缓冲液，用玻璃棒轻轻搅动，洗涤细胞，再置离心管中离心（400 r/min）1 min，吸去下层溶液，如此反复操作洗涤细胞3次, 细胞悬液用吖啶橙染色后，置细胞计数板上，在显微镜下进行细胞计数，调整细胞浓度为3×10⁵～3.5×10⁵个细胞/ml。

2.2.2测定取6张96孔培养板，每张板1～12孔为本底组，10～24孔为空白对照组，25～36孔为爱维治组，37～48孔为样品组。本底组每管加缓冲液0.7 ml及生理盐水0.3 ml；空白组每管加细胞悬液0.1 ml，缓冲液0.7 ml及生理盐水0.2 ml；爱维治组每管加细胞悬液0.1 ml，缓冲液0.7 ml及爱维治0.2 ml；样品组每管加细胞悬液0.1 ml，缓冲液0.7 ml及样品0.2 ml。保温缓冲液中含350 nCi的D-³H-葡萄糖。各管37℃保温1 min，用多头细胞收集器收集细胞，将滤纸烘干，剪下置液闪瓶中，加入4 ml闪烁液，摇匀，用液闪计数仪测闪烁次数（cpm）。

2.2.3计算刺激指数

（μ）＝（样品组cpm平均值-本底）/（对照组cpm平均值-本底）

3统计方法

用t检验处理数据。

结果

1呼吸活性的测定结果

促细胞代谢素注射液组和爱维治组QO₂分别为(6.8±1.10)和(6.4±0.98)μlO₂/(mg·h)（P＞0.05），SI分别为(3.6±0.49)和(3.2±0.48)μlO₂/(mg·h)（P＞0.05）。

2脂肪生成增加率结果

两组脂肪生成增加率（μ）分别为促细胞代谢素注射液组(2.6±0.39)，爱维治组(2.4±0.41)（P＞0.05 ）。

讨论

进口爱维治在国内应用已近8年，收到了令人满意的临床效果，在临床上主要用于脑缺血、脑痴呆及脑外伤等疾病的治疗^［1～4］。爱维治不同于其他脑活素类药物的主要特点是其具有明显的生物活性，这也很可能是该药临床疗效确切的理论基础。

本研究表明，促细胞代谢素注射液具有刺激豚鼠肝匀浆呼吸及具有促细胞脂肪细胞对葡萄糖摄取的生物活性，而且其呼吸活力QO₂＞4.0 μl O₂/(mg·h)，SI＞2.5，脂肪μ＞2.0。同时研究表明，其生物活性与进口爱维治基本相同(P＞0.05)，有研究表明^［5］ ，爱维治的生物活性可能与其中含有的氨基酸多肽有关，但有关这方面的问题还要进一步研究。

参考文献

1，王彩英.爱维治的临床应用.山东医药,1996,35(1)∶602

2，魏镜,彭斌,李欢，等.静脉点滴素高捷疗对脑梗塞急性期的临床疗效观察.中国新药杂志,1995,4(6)∶31

3，朱文炳,谢瑞满,俞永华，等.爱维治治疗脑部疾病的临床疗效观察.中国临床医学杂志,1998,5(2)∶94

4，陈保生,赵颖,方宏钧.爱维治与传统方法治疗急性脑梗塞的临床对照.临床交流,1997,(6)∶12