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Studies on the respiratory pharmacology of essential oil extracted from Artemisia argyi-Ⅱ，effects of antianaphylactic effects
Xie Qiangmin(Xie QM),Tang Fadi(Tang FD),Wang Yan(Wang Y),et al
Zhejiang Respiratory Drugs Research Laboratory of China of Administrative Center of New Drug Research & Development,State Pharmaceutical Administration of China,Hangzhou 310031
ABSTRACTOBJECTIVE：To evaluate the antianaphylactic effects of essential oil extracted from Artemisia argyi.METHODS:The following experiments were carrind out:tracheal Schultz-Dale reaction in the sensitized guinea-pigs,histamine or carbarylcholine-induced tracheal contraction in guinea-pig，the passive cutaneous anaphylaxis and 5-HT-induced cutaneous capillary permeability in rats，the release of SRS-A in the lung of guinea pigs，and SRS-A-induced ileum contraction in guinea pig.RESULTS:The oil of Artemisia argyi inhibited the tracheal Schultz-Dale reaction in the sensitized guinea-pigs(IC50:98.6mg/L).At the concentration of 100mg/L,the oil inhibited histamine or carbarylcholine-induced tracheal contraction in guinea-pig,shifting the dose-effect curve to the right.Moreover,the oil significantly inhibited the passive cutaneous anaphylaxis and 5-HT-induced cutaneous capillary permeability in rats(ID50:0.22 and 0.52g/kg),inhibited the release of SRS-A in the lung of guinea pigs(IC50:49.7mg/L),and inhibited the SRS-A-induced ileum contraction in guinea pig(IC50:34.9mg/L)as well.CONCLUSION:Oil of Artemisia argyi has the effects of antianaphylaxis.It is beneficial for the treatment of asthma and chronic bronchitis.
KEY WORDSartemisia argyi essential oil,cromolyn sodium,antiallergic agents,ovalbumin,histamine,carbamylcholine,serotonin,SRS-A,trachea,lung
在前文中已经报道了艾叶油的支气管扩张、镇咳和祛痰作用［1］，并对艾叶油中分离的单体α-萜品烯醇、葛缕醇、葛缕酮［2］、β-丁香烯醇［3］进行了药理作用及机理探讨。本文重点研究艾叶油的抗过敏作用，现将研究方法和结果总结如下。
1材料
1.1药物与试剂艾叶油(杭州正大青春宝药业有限公司，采用真空精溜法提取，批号:950120)，盐酸沙丁胺醇(江苏盐城制药厂,批号：940212),色甘酸钠(上海信谊制药厂,批号:931001),富马酸酮替芬(上海第十六制药厂,批号890902),卵白蛋白片(上海化学试剂采购供应站,批号:950105),磷酸组织胺(中科院上海生物化学研究所,批号：8605149),精制天花粉(中科院上海有机化学研究所惠赠,批号：860703),氢氧化铝凝胶(锦州渤海制药厂,批号：860111),浓缩百日咳菌苗液(浓度50亿/ml,卫生部上海生物制品研究所特制),伊文思蓝(上海化学试剂采购供应站从Fluka进口分装,批号：82-11-02),5-羟色胺硫酸肌酐(上海化学试剂采购供应站从瑞士进口分装,批号：650228),氨甲酰胆碱(CCH,Sigma Chemical Company,批号:104F-0834)。
1.2动物Hartley品系豚鼠、SD品系大鼠、NIH品系小鼠(浙江医科大学实验动物中心,合格证号:浙实验动物实施条件准字22-9601018)。
1.3仪器402型超声雾化器(上海合力医疗器械厂),721型分光光度计(上海分析仪器三厂),台式平衡记录仪(上海大华仪表厂)。
2方法
2.1豚鼠离体气管Schultz-Dale试验按文献方法［4］，致敏豚鼠：5%卵白蛋白溶液1.0ml分两后肢大腿im，0.8 ml ip以加强免疫,4周后处死豚鼠,取出气管,制备成气管片，气管条置37℃含KHPS液水浴槽内,通氧气,气管静止张力为1.5g, 张力反应通过换能器输入记录仪，稳定30～40min后，对照组加卵白蛋白2.4mg/L，反应停止后再加入BaCl2 2×10-5mol/L,使其达最大收缩反应;处理组先加入不同浓度艾叶油与标本接触5min,再加入2.4mg/L卵白蛋白,反应停止后再加入BaCl2 2×10-5mol/L,使其达最大收缩反应。计算时以卵白蛋白/BaCl2的最大收缩百分率作为指标。
2.2组胺或氨甲酰胆碱引起的豚鼠气管平滑肌收缩试验气管条置37℃含KHPS液水浴槽内,通氧气,气管静止张力为1.5g, 张力反应通过换能器输入记录仪。稳定30～40min后，加组胺或氨甲酰胆碱后记录量效曲线，换液后，加入艾叶油100mg/L,与气管作用5min后,开始累加组胺或CCH,求出组胺或CCH的pD2。
2.3大鼠被动皮肤过敏试验(PCA)SD大鼠，体重(150±16.0)g,♂♀各半,按文献方法［5］实验。共6只，每鼠用精制天花粉1mg和氢氧化铝凝胶200mg混匀后于四足掌皮下注射，然后腹腔注射百日咳菌苗1×109，14d，从颈动脉取血，分离得血清置冰箱备用。此抗血清比价为1∶120。另取正常SD大鼠48只，♀♂各半，体重130～160g，用乙醚麻醉后，在大鼠背中线两侧将毛剪光，取上述抗血清1∶40稀释，在两侧各皮内注射两点，每点0.1 ml，72h后，艾叶油或扑尔敏ig 1h或色甘酸钠iv 5 min后，1%伊文思蓝生理盐水5ml/kg和0.2%精制天花粉5ml/kg，iv。30min后处死大鼠，剪下蓝斑皮肤，剪碎后置试管内，加入丙酮-生理盐水(7∶3)混合溶液5ml，浸泡48h后，2000r/min离心，取上清液，OD 610nm测光密度。
2.4组胺和5-羟色胺诱发大鼠皮肤毛细血管通透性试验取正常SD大鼠48只，♀♂各半，体重130～160g，用乙醚麻醉后，在大鼠背中线两侧将毛剪光，每点皮内注射0.02%磷酸组胺0.1ml或0.005% 5-羟色胺硫酸肌酐0.1ml各2点，随即以0.5%伊文思蓝5ml/kg iv，30 min后，处死大鼠，剪下皮肤蓝斑，剪碎后置试管内，加丙酮-生理盐水5ml，浸泡48h，2000r/min离心，取上清液，OD 610nm测光密度。
2.5致敏豚鼠肺组织释放SRS-A试验按文献方法［6］，致敏豚鼠同上，放血处死，打开胸腔，用Tyrode氏液冲洗肺动脉使肺组织内的血液洗净，然后取出肺脏，将其剪成1mm3的碎块，经滤纸吸去水份后称取肺组织，每份200mg置试管内，加入Tyrode氏液2.5ml或含有不同浓度艾叶油的Tyrode氏液2.5 ml，37℃水浴5min，然后加0.1%卵白蛋白0.5ml攻击，置37℃水浴振摇15min，取出后用滤纸过滤得到含有过敏介质的滤液。SRS-A测定：取正常豚鼠回肠1cm，置10ml浴槽中，以37℃ Tyrode液营养，张力换能器接记录仪描记，稳定30min,先以组胺定标，标出定量组胺所引起的回肠收缩高度，然后换入含阿托品1μg/ml，扑尔敏0.06μg/ml的Tyrode氏液，稳定10min，加入不同的肺滤液，记录滤液引起的回肠收缩高度，然后与组胺引起回肠收缩的高度相比较。1u SRS-A=5ng组胺引起的收缩高度，计算出艾叶油的抑制%。
2.6SRS-A引起离体豚鼠回肠收缩试验实验方法同SRS-A测定法，先加入试验药物，接触10min，再加入SRS-A。描记收缩幅度，计算艾叶油的抑制%。
2.7统计方法用微机和Sigma Stat统计软件(SigmaStat 1.01 for Windows 95,1992,Jandel corporation,USA),具体方法见结果中的表注。±s.Bliss权重法计算ID50和其95%可信限。
3结果
3.1对豚鼠离体气管Schultz-Dale反应的影响艾叶油能明显抑制豚鼠气管Schultz-Dale反应，IC50(95%可信限)为98.6(69.5～139.8)mg/L。
3.2拮抗组胺或氨甲酰胆碱引起的豚鼠气管平滑肌收缩作用艾叶油100mg/L对组胺和CCH均有明显的拮抗作用,给药前组胺和CCH的pD2值分别为5.39±0.07和7.44±0.11,给药后的pD2值分别为4.99±0.15(P＜0.05)和7.03±0.09(P＜0.05)。
表1艾叶油对豚鼠离体气管Schultz-Dale反应的抑制作用(
