摘 要 目的：建立人血清中反式曲马朵（(±)-trans T）与氧去甲基曲马朵（(±)-M1）对映体的测定方法，研究血清中 (±)-trans T和（±）-M1对映体浓度与临床效果的关系。方法：以磺丁基-β-环糊精为手性选择剂，高效毛细管电泳（HPCE）法测定人血清中(±)-trans T与(±)-M1对映体的浓度；监测20例术后病人静滴盐酸(±)-trans T 400 mg·d^-1 或 300 mg·d^-1后血清中 (±)-trans T与 (±)-M1对映体浓度，并观察临床镇痛效果及药物不良反应。结果：血清中 (±)-trans T与 (±)-M1对映体分离效果良好，(±)-trans T与 (±)-M1对映体的线性范围分别为20～640 mg·L^-1 和10～160mg·L^-1，相对回收率在92.30%～107.80%之间，日内RSD小于10%，日间RSD小于15%，最低检测浓度为1.10mg·L^-1。400 mg·d^-1 组病人血清中(±)-trans T对映体的浓度、药物不良反应的发生率和严重程度明显高于300 mg·d^-1 组病人，而400 mg·d^-1组和300 mg·d^-1组病人血清中（±）-M1对映体浓度及镇痛效果无明显区别。结论：所建立的HPCE方法可用于临床治疗药物监测。血清中（+）-M1的浓度与镇痛效果密切相关，(±)-trans T对映体浓度过高可能是药物不良反应的发生率增高和程度增强的原因之一。

Determination of the Enantiomers of (±) -Trans Tramadol and (±)-Trans O-demethyltramadol in Human Serum and Its Application in Therapeutic Drug Monitoring

LIU Hui-CHen,YANG Yan-Yan,WANG Ya-Li,HU Yu-Qin,HOU Yan-Ning

(Bethune International Peace Hospital, Shijiazhuang 050082)

Abstract OBJECTIVE: To establish a method for determining the enantiomers of (±)-trans tramadol ((±)-trans T) and (±)-trans O-demethyltramadol ((±)-M1) in human serum, and to study the relationship between the clinical actions and the serum concentrations of the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1. METHODS: By using sulfobutylether-b-cyclodextrin as a chiral selector, a high performance capillary electrophoresis (HPCE) method was developed to analyze the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1. Twenty postoperative patients were divided into two groups and given multiple intravenous doses of (±)-trans T hydrochloride, 400 mg·d^-1 or 300 mg·d^-1. The relationship between the clinical actions and the serum concentrations of the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1was studied. RESULTS: The enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1 in human serum were separated well. The linear ranges were 20～640 mg·L^-1 for the enantiomers of (±)-trans T, 10～160 mg·L^-1 for the enantiomers of (±)- M1. For the enantiomers of (±)-trans T and (±)-M1, the within-day and day-to-day RSDs were less than 10% and 15% respectively; the relative recoveries were from 92.30% to107.80%; the limit of detection was 1.10mg·L^-1. The concentrations of the enantiomers of (±)-trans T, the frequency and serious level of adverse reactions were higher in 400 mg·d^-1 group than that in 300 mg·d^-1 group. The concentrations of the enantiomers of (±)- M1, and the analgesic effect were similar between the two groups. Conclusion: The HPCE method could be used in clinical therapeutic drug monitoring. There was close relationship between the analgesic effect and the concentration of (+)-M1 in serum. The frequency and serious level of adverse reactions might be attributed to the higher concentrations of the enantiomers of (±)-trans T, which may be due to the saturated metabolism.

Key words (±)-trans tramadol; (±)-trans O-demethyltramadal; enantiomer

反式曲马朵（trans tramadol,(±)-trans T）为新型中枢镇痛药，临床上用于中度、中重度疼痛的治疗，不易引起呼吸抑制、成瘾和滥用。T分子中含两个手性碳原子，有四个立体异构体，其中（+）-（1R，2R）-T（（+）-trans T）和（-）-（1S，2S）-T （（-）-trans T）为药用品。（+）-trans T和（-）-trans T的作用机理是抑制单胺递质的再摄取和促进单胺递质的释放，（+）-trans T的代谢物（+）-（1R，2R）-氧去甲基曲马多（（+）-trans O-demethyltramadol, （+）-M1）则是通过激动μ-阿片受体而发挥作用^[1,2]。为了评价和优化临床盐酸(±)-trans T的给药方案，本文在前文^[3]基础上建立了同时测定人血清中(±)- trans T和(±)-M1对映体浓度的高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis, HPCE）法，并研究了术后病人血清中 (±)-trans T和（±)-M1对映体浓度与临床效果的关系。

材 料 与 方 法

1．仪器与试剂

P/ACE 5000 HPCE, 配紫外检测器及Gold色谱软件; 未涂层石英毛细管(75mm，i.d.), 总长37 cm, 有效长度30 cm, 美国Beckman公司产品。盐酸(±)-trans T（批号5D7416）、 盐酸（+）-trans T（批号06）、 盐酸（-）-trans T（批号07）、(±)-M1（批号TK168）， 德国Grünenthal Gmbh公司惠赠；盐酸(±)-cis T，锦州医学院化学教研室合成。磺丁基-β-环糊精，中国科学院兰州化物所合成；Tris，H3PO4，NaOH，HCl 均为市售分析纯；超纯水。

2．病例与分组

20例接受心胸外科肿瘤切除术后入住ICU病房的病人，受试前需征得受试者知情同意，随机分为两组。400 mg ·d^-1组：10例，男6例， 女4例；年龄（59±7）岁，体重（60±10）kg；贲门癌7例，食管癌2例，肺癌1例。300 mg·d^-1组：10例，男8例，女2例；年龄（64±12）岁，体重（64±8）kg；贲门癌7例，食管癌2例，肺癌1例。两组病人术前、术中、术后的其它用药尽可能保持一致。

3．药品与给药方法

盐酸(±)-trans T注射液，每支100 mg，德国Grünenthal Gmbh公司生产，批号9706。病人术后到ICU病房完全清醒后即开始给予盐酸(±)-trans T注射液，加于50mL生理盐水中恒速静滴，日剂量平均分为3次，每次6 h，间隔2 h。连续给药5次后，即第1次给药后38h取血3 mL，离心分离血清，冻存备用。

4．样品处理与测定

1 ml血清中加 1mg·L^-1 盐酸cis T溶液100μl，0.5 mol·L^-1 NaOH 0.5 ml，乙酸乙酯5 ml，充分混匀2 min，离心(5000 r·min^-1)15 min，取上清液4 ml以氮气流吹干，残渣用100μl水溶解，取30μl上机分析。分析条件：磺丁基-β-环糊精以40 mmol·L^-1 Tris缓冲液（H3PO4 调pH至2.5）溶解配制分离介质，磺丁基-β-环糊精的浓度0.8 mmol·L^-1；进样电压10 kV，20 s，入口为阳极；分离电压15 kV，柱温25 ℃，检测波长214 nm。

5．临床效果评价

目测划线法（visual analgesic scale, VAS）记录用药后疼痛的程度，设0为无痛，10为重度疼痛。治疗开始后密切观察并记录出现的药物不良反应及其程度，并根据药物不良反应的判断标准判定不良反应与药物的关系。

6. 统计学处理

两组病人疼痛评分采用t-检验，药物不良反应发生率采用c2-检验。

结 果

1 血药浓度测定方法^[3]

1.1 分离效果

T的四种立体异构体及(±)-M1对映体达到基线分离，且血清组分无干扰峰。(±)-cis T对映体的tR分别为8.16 min和8.73 mim ，(+)-trans T和(-)-trans T的tR分别为9.46 min和10.52 mim；(+)-M1和(-)-M1的tR分别为7.98 min和8.43 mim。典型电泳图谱见图1。

1.2 标准曲线

以(±)-cis T后出峰的对映体为内标，血清中(+)-trans T，(-)-trans T浓度在20～640 mg·L^-1范围内，(+)-M1和(-)-M1浓度在10～60 mg·L^-1范围内，其峰面积和内标峰面积的比值（Y）与浓度（X）呈良好的线性关系,回归方程分别为

(+)-trans T：Y=-0.1587+0.01827X(n=6, r=0.9957)；(-)-trans T：Y=-0.5037+0.01865X(n=6, r=0.9924)；(+)-M1：Y=-0.3020+0.02000X(n=5, r=0.9949)；(-)-M1：Y=0.1073+0.01987X(n=5, r=0.9980)。

Fig1. Electropherogram of a serum sample spicked with ( )-cis

tramadol. 1. an unknown metabolite; 2. (+)-trans O-demethyltramadol; 3.

one enantiomer of ( )-cis tramadol; 4. (-)-trans O-demethyltramadol;

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