摘 要 本文首次报道了测定苯丙哌林血浆浓度的高效液相色谱法及该药在人体内的药代动力学行为。绘制了10名健康男性受试者服用磷酸苯丙哌林两种制剂60 mg（以苯丙哌林计）后的血浆浓度-时间曲线，用TopFit 2.0软件进行房室模型拟合，结果表明苯丙哌林体内药动学过程符合二室模型。磷酸苯丙哌林分散片和胶囊的T_max分别为1.76 ± 0.29 h和1.80 ± 0.41 h, C_max分别为479.4 ± 171.5和456.4 ± 173.9 μg· L- ¹；AUC_0-t为4309.4 ± 1549.9和4119.5 ± 2018.8 μg· L-¹· h。统计检验表明，10名受试者服用两种制剂后的药代动力学参数无显著性差异，具有生物等效性。

Pharmacokinetics of Benproperine Phosphate and Relative Bioavailability of its Preparations in Healthy Volunteers

DU Zong-Min, ZHANG Yi-Fan, ZHONG Da-Fang, CHEN Ren-Di

( Laboratory of Drug metabolism and pharmacokinetics,Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110015)

Abstract An HPLC method was developed to determine benproperine in human plasma and the pharmacokinetic behavior of benproperine was reported for the first time. The plasma concentrations of benproperine in ten healthy volunteers after an oral dose of 60 mg of two benproperine preparations were determined and concentration-time profils were shown to fit a two compartment model. Pharmacokinetic parameters were calculated with the aid of TopFit 2.0 program. Parameters of benproperine phosphate dispersible tablet and capsule were obtained as follows: T_max were 1.76 ± 0.29 and 1.80 ± 0.41 h; C_max were 479.4 ± 171.5 and 456.4 ± 173.9 μg·L- ¹；AUC_0-t were 4309.4 ± 1549.9 and 4119.5 ± 2018.8 μg·L-^1·h, respectively. There was no statistically significant difference for benproperine between the two formulations on pharmacokinetic parameters.

Key words benproperine; bioavailability; pharmacokinetics; HPLC method

磷酸苯丙哌林（benproperine phosphate）化学名为1-[2-(2-苄基苯氧基)-1-甲基乙基]-哌啶磷酸盐。它是兼具外周和中枢作用的非成瘾性镇咳药，能阻断来自肺-胸膜的牵张感受刺激而产生的迷走神经反射，对咳嗽中枢也有直接抑制作用，镇咳作用较可待因强2～4倍，且毒性小，不抑制呼吸，药物不良反应少而轻，疗效确切[ ^1] 。该药被收载于国家基本药物品种目录中，长期作为镇咳基本药物使用。但是，有关其在人体中的药代动力学国内外均未见报道。有人用比色法测定尿中的苯丙哌林，但该法灵敏度低，不能用于测定血浆中的苯丙哌林[ ^2] 。本文首次建立测定血浆中苯丙哌林浓度的高效液相色谱法，研究了它在人体内的药代动力学，并测定了其分散片的相对生物利用度。

材料和方法

1. 仪器与试剂

高效液相色谱仪：LC-10AT泵, SPD-10A紫外检测器, C-R6A积分仪（均为日本岛津公司产品）；PC-586计算机（联想集团）；统计计算软件Excel 6.0由美国微软公司编制。

磷酸苯丙哌林标准品由沈阳药科大学药剂教研室提供，含量99.0 %；米帕明标准品由沈阳药科大学药剂教研室提供。磷酸苯丙哌林分散片（受试制剂）由唐山某制药公司研制，规格: 每片20 mg（以苯丙哌林计，下同），批号: 980621；磷酸苯丙哌林胶囊（参比制剂）由东北第六制药厂生产，规格: 每粒20 mg，批号: 980201。乙腈为色谱纯（山东禹王实业总公司试剂厂）；磷酸二氢铵为分析纯（天津市化学试剂六厂）；磷酸为分析纯（沈阳市试剂二厂）；空白人血浆由沈阳中心血站提供。

2. 试验对象

选择健康男性受试者10名，年龄20～23岁，体重51～75 kg。受试者于试验前在医院接受全面的体格检查，化验肝、肾功能，并进行心电图检查，各项指标均属正常。受试者无既往过敏史和药物过敏史，精神状态良好，受试前两周未服任何药物，不吸烟，不嗜酒，均于试验前签署知情同意书。受试者服药后统一进餐，受试期间在室内休息，避免剧烈运动。本试验经伦理委员会批准，有关临床部分工作在辽宁省人民医院进行。

3. 给药方案

采用双周期随机交叉试验设计，将受试者随机分为两组，第一周期由第一组口服受试制剂3片（60 mg），第二组口服参比制剂3粒（60 mg），于第一次服药七天后开始第二周期试验，两组交换服药。两种制剂均用200 ml温开水送下。

4. 样品采集与保存

于服药前及服药后0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，14.0，24.0 h由肘静脉取血5 ml，并立即移入涂有肝素的试管中，离心，分离血浆，于- 30℃冰箱保存。

5. 血浆样品的分析方法

5. 1色谱条件

色谱柱为Nucleosil C₁₈, 5 m m, 200× 4.0 mm ID（德国Macherey-Nagel公司生产）；流动相为乙腈：0.07 mol· L- ¹磷酸二氢铵：85 %磷酸（450：550：2，v/v/v）；流速为1.0 ml·min- ¹；检测波长为UV 220 nm，纸速为3 mm· min- ¹。

5. 2血浆样品的测定

取受试者血浆0.5 ml于10 ml带塞试管中，加入内标溶液50 m l（米帕明，2.5 mg· L- ¹的0.1 %磷酸溶液），混匀，加入2 mol· L- ¹的氢氧化钠溶液100 m l碱化样品，再加入3 ml提取溶剂（正己烷：异丙醇，95：5），涡流1 min，振荡15 min，离心，转移有机层置另一10 ml带塞试管中，加入0.5 mol· L- ¹ 磷酸200 m l，涡流1 min，振荡15 min，离心，吸取下层磷酸溶液50 m l进样，记录色谱图。样品测定时随行标准曲线，把待测物和内标物的峰高之比代入当天的标准曲线计算出未知样品的浓度，以质控样品是否合格决定该批样品测定结果的取舍。

6. 数据处理

6. 1药代动力学参数的计算

药代动力学参数用TopFit 2.0软件进行房室模型拟合，C_max、T_max和AUC_0-µ 采用模型拟合计算值，以梯形法求算AUC_0-t。

6. 2生物等效性评价

将10名受试者服用苯丙哌林两种制剂后的AUC_0-t, C_max对数变换后进行方差分析；T_max直接进行方差分析；以受试制剂和参比制剂的AUC_0-t计算苯丙哌林分散片的相对生物利用度；对两制剂的药代动力学参数进行双单侧检验和（1- 2a ）置信区间法检验。

结 果

1. 分析方法确证

1. 1标准曲线的制备

取空白人血浆0.5 ml于10 ml带塞试管中，加入标准系列溶液50 m l，使之成为相当于浓度为20.0，40.0，80.0，200.0，400.0，800.0 μg · L- ¹的血浆样品。按“血浆样品的测定”项下依法操作，进样50 m l，记录色谱图；以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰高比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算^[3]，权重系数为1/x², 求得的直线回归方程即为标准曲线。本方法在20.0～800.0 μg· L- ¹范围内线性良好。典型的线性回归方程为Y= – 0.007212 + 0.003380 X, r = 0.9948。

1. 2方法的专一性

分别取6名受试者的空白血浆0.5 ml，按“血浆样品的测定”项下操作，进样50 m l（不加内标），色谱图如图1A；将一定浓度的苯丙哌林标准溶液加入空白血浆依法操作，色谱图如图1B，其中苯丙哌林的保留时间为5.83 min，内标物的保留时间为4.10 min；取健康受试者服药后4h的血浆样品0.5 ml, 依法操作，色谱图如图1C。

Fig. 1. HPLC chromatograms of a blank plasma sample (a)；a plasma

sample spiked with benproeprine (400 m g· L^-1) and internal standard

(b)；and a volunteer plasma sample 4h after an oral dose of benproperine

phosphate (c).1. internal standard; 2. benproperine

1. 3精密度与准确度

取空白血浆0.5 ml，按“标准曲线的制备”项下配制低、中、高三个浓度（分别为20.0，200.0，400.0 μg· L- ¹）的质控样品，6样本，测定3d，并与标准曲线同时进行，计算质控样品的浓度。对每一浓度下3批样品测定结果进行单因素（浓<