摘要 18名健康男性志愿者交叉单剂量口服杭州默沙东产50mg氯沙坦钾片和英国默克产50mg氯沙坦钾片，以HPLC-UV法测定血浆中氯沙坦钾及其活性代谢产物E-3174的浓度，并对两种制剂进行生物等效性评价。试验结果表明：口服杭州产及默克产氯沙坦钾，氯沙坦钾C_max分别为352.20± 196.09和291.20± 124.41m g·L^-1， T_max分别为0.91± 0.38和1.33± 0.69h，AUC_0-∞分别为547.44± 226.77和499.52± 157.31 m g·h·L^-1，t_1/2分别为1.89± 0.49和1.80± 0.51h；E-3174 C_max分别为545.07± 150.49和534.02± 142.88m g·L^-1， T_max分别为3.15± 1.07和3.37± 0.66h，AUC_0-¥ 分别为3641.57± 637.17和3631.72± 687.94 m g·h·L^-1，t_1/2分别为8.33± 2.05和7.74± 1.22h。统计分析表明，两制剂间氯沙坦钾的C_max、T_max有显著差异，而氯沙坦钾的AUC_0-∞、E-3174的C_max、T_max 和AUC_0-∞ 无显著差异。

RELATIVE BIOAVAILABILITY OF LOSARTAN TABLET IN HEALTHY VOLUNTEERS

WEI Yang, SHAO Qing-Xiang, ZHANG Mei-Yun,

WANG Ke-Sheng, HAO Zhuan-Ye, SANG Guo-Wei

(Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310013)

HUANG Hui-Fang，SUN Dong-Sheng

(The People’s Hospital of Zhejiang Province)

CHEN Jian-Xin²

(Hangzhou MSD Pharmaceutical Co., Ltd.)

Abstract This is an open randomized, two-period crossover study in 18 healthy male volunteers. Subjects receive a single oral dose of 50mg losartan tablet produced by Hangzhou–MSD and by U.K-MERCK .The plasma concentrations of unchanged losartan and its active metabolite, E-3174 are determined by using HPLC method. The main pharmacokinetic parameters are as follows: C_max of losartan (Hangzhou-MSD) and losartan (U.K.-MERCK) are 352.20± 196.09 and 291.20 ± 124.41mg·L^-1, T_max are 0.91± 0.38 and 1.33± 0.69h, AUC_0-∞ are 547.44± 226.77 and 499.52± 157.31 m g·h·L^-1, t_1/2 are 1.89± 0.49 and 1.80± 0.51h, respectively；C_max of E-3174 (Hangzhou-MSD) and E-3174(U.K.-MERCK) are 545.07± 150.49 and 534.02 ± 142.88mg·L^-1, T_max are 3.15± 1.07 and 3.37± 0.66h，AUC_0-∞are 3641.57± 637.17 and 3631.72± 687.94 mg·h·L^-1，t_1/2 are 8.33± 2.05 and 7.74± 1.22h,respectively. According to statistic study , the differences of two parameters,C_max and T_max of unchanged losartan between two formulations are significant,but AUC_0-∞of unchanged losartan and three parameters,C_max,T_maxand AUC_0-∞of E-3174 show no significant difference between two formulations.

Key words losartan; E-3174; metabolite

氯沙坦钾，2 -丁基 - 4 - 氯-1-[[2'-（1H - 四唑-5-基）[1,1'-联苯] -4- 基]甲基]-1H-咪唑-5-甲醇单钾盐，是一种口服有效的非多肽类血管紧张素Ⅱ受体（AT1亚型受体）拮抗剂，为一类新型抗高血压药物。本研究采用标准双周期交叉研究评价单次口服杭州默沙东产氯沙坦钾片和英国默克产氯沙坦钾片后母体化合物氯沙坦钾及其活性代谢产物2 -丁基 - 4 - 氯-1-[[2'-（1H - 四唑-5-基）[1,1'-联苯] -4- 基]甲基]-1H-咪唑-5-羧酸(E-3174)的生物等效性。

材料与方法

1. 药品与试剂

受试制剂氯沙坦钾片，杭州默沙东产，规格每片50mg，批号8442-002；对照制剂氯沙坦钾片，英国默克公司产，每片50mg，批号9810770。

氯沙坦钾标准品，批号005H069，纯度99.7%；E-3174标准品，批号002X008，纯度99.1%；内标L-158,854标准品，批号000F004，均由杭州默沙东制药有限公司提供。

乙腈、甲醇、甲基-叔-丁基醚，HPLC级；双重蒸馏水，自制；磷酸二氢钠、氢氧化钠、柠檬酸钠、柠檬酸、正己烷、异丙醇、磷酸（85%），AR级。

2. 仪器

HPLC系统：岛津LC -10A双泵、 SPD-10A检测器、CTO-10A柱温箱、DGA -10A脱气仪；7125手动进样阀；MN公司Nuclesil 100-5CN柱（250×4.6mm）；杭州英谱公司HS色谱数据工作站（3.5版）。

3. 受试对象

本研究对象为18名健康男性志愿者，平均年龄20.9± 1.6岁，体重为62.6± 6.1kg。所有受试者在试验前签署了知情同意书，并经浙江省医学科学院医学伦理委员会批准进入本试验。

4. 试验方案

本研究为一随机、开放、双周期交叉研究。所有参试对象按随机表分别先后口服两种片剂，每次50mg，两次服药的间隔洗净期为14 d。

每次服药前12h至服药后36h受试对象在心血管内科病房住院观察，进食统一标准餐；服药前8h至服药后3h禁食。受试对象在上午8:00左右以250ml温开水送服氯沙坦钾1片。给药前及给药后0.33，0.67，1，1.33，1.67，2，3，4，5，6，8，10，12，18，24，36h分别于上肢静脉取血7ml，离心后得血浆约3ml，-20oC保存待分析。

服药前1h内及服药后1，2，4，6，8，12，24，36h记录一次坐位心率/血压。在整个研究过程中对各种不良反应与事件进行监测。

5. 分析方法

5.1 色谱条件

检测波长：254nm; 柱温:40oC；灵敏度: 0.001 AUFS；流动相：磷酸盐缓冲溶液(pH=2.9):乙腈（74:26, v/v），流速:1.0ml·min^-1。

5.2 血浆样品的预处理方法

15ml圆底试管编号并加入内标工作液100m l（1.0 mg·L^-1），用氮气将甲醇吹干。冷冻血浆在室温下融化，涡旋20s后于3000r·min^-1离心5min，取1.0ml上层血浆至上述试管中，涡旋30s使内标溶解，在各试管中加125m l 1.0M H₃PO4，涡旋20s，再加甲基-叔-丁基醚(MTBE)8ml，涡旋2min，3000r·min^-1条件下离心10min，将试管置于-70oC低温冰箱中10min使水层冻结。将有机层倾入预先加有200m l 0.05mol·L-1NaOH的15 ml聚丙烯尖底试管中，涡旋2min，3000r·min^-1条件下离心5min，将试管于-70oC放置 7min使水层冻结，弃去有机相，将残余MTBE用氮气吹干，在尖底试管中加入75m l 0.5M pH=4.3的柠檬酸缓冲溶液，涡旋混匀；加入6ml正己烷，涡旋2min，3000r·min^-1条件下离心5min，将试管置于-70oC 7min使水层冻结，弃去正己烷，残余正己烷用氮气吹干。加入20 μl 1.0 mol·L-1H₃PO4和50m l异丙醇，涡旋混匀，取100m l进样。

5.3 标准曲线的绘制

配制氯沙坦钾与E-3174浓度均为1000，700，300，100，70，30，10和5m g·L^-1的系列标准血浆溶液，按血浆处理方法处理测定，以样品的色谱峰面积为定量依据，以待测样品峰面积与内标峰面积的比值（Y）对样品浓度（X）进行线性回归得标准曲线方程。

6. 数据处理

取可检测到药物的最后3个时间点浓度C的自然对数值lnC对相应时间t进行线性回归分别求得氯沙坦钾和E-3174在人体内的末端相消除速率常数l ； 用梯形法求算药时曲线下面积AUC_0-t值；计算AUC_0-¥ =AUC_0-t+l /tn。血浆峰浓度C_max和达峰时间T_max取观测值。

AUC和C_max分别作对数转换，T_max不作转换。采用适用于标准2´ 2交叉试验的方差分析方法分析lnAUC、lnC_max和T_max。根据方差分析得出的均方差，参照t-分布计算均值比率或差的90%可信区间，用方差分析求得均方误差后按Schuirmann标准双单侧检验程序进行评价，统计软件SAS。

结 果

1. 血药浓度测定方法的评价

在选定的分析条件下，氯沙坦钾和E-3174的线性范围均为5～1000m g·L^-1，氯沙坦钾的工作曲线为Y= 0.0078X-0.0084 (r²=0.9992)，E-3174的工作曲线为Y = 0.0146X + 0.0033 (r²=0.9996)。

在线性范围内，测定各浓度氯沙坦钾和E-3174的回收率均接近100%，天内变异系数均＜5%（表1）。对高（800m g·L^-1