摘 要 建立了测定格列喹酮血浆浓度的HPLC-荧光检测法，并对10名健康受试者随机交叉口服60 mg 格列喹酮胶囊和格列喹酮片后的药代动力学性质及其生物等效性进行了研究。以黄豆苷元二甲醚为内标，血浆样品经液-液萃取处理，荧光检测波长为315/410 nm；线性范围为50～2000 μg·l^-1；本法的相对偏差(RE)＜ 4.5 %，日内RSD＜ 8.6 %，日间RSD＜ 5.2 %。格列喹酮胶囊和片剂的T_max分别为2.70±0.48和2.35±0.75 h; C_max分别为1532.3±481.8和1588.2±822.2 μg· l^-1; t_1/2分别为4.82±2.18和4.47±1.77 h; AUC_0-t分别为6872.8±2575.1和6942.2±3747.8μμg· l^-1· h。以AUC_0-t计算相对生物利用度为103.8 %±15.7 %。统计分析表明，两种制剂在人体内生物等效。

Pharmacokinetics of Gliquidone in Healthy Chinese Volunteers

SUN Lu, ZHONG Da-Fang, CHEN Xiao-Yan, ZHANG Yi-Fan

(Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110015)

Abstract A HPLC method with fluorescence detection was developed and validated to determine gliquidone in human plasma, and the pharmacokinetics of two gliquidone formulations (capsule and tablet) were studied in ten healthy Chinese volunteers. The plasma sample pretreatment based on single liquid-liquid extraction, using the 7,4¢ -dimethoxy daidzein as internal standard. The analytes were determined by fluorescence detection (315/410 nm) with a linear range of 50～2000 μg· l^-1 and assay relative error within 4.5%. Within-day and between-day precisions were within 8.6% and 5.2%, respectively. The main pharmacokinetic parameters of capsule and tablet were as follows: T_max were 2.70 ± 0.48 and 2.35 ± 0.75 h; C_max were 1532.3 ± 481.8 and 1588.2 ± 822.2 μg· l^-1 ; t_1/2 were 4.82±2.18 and 4.47 ± 1.77 h; AUC_0-t were 6872.8 ± 2575.1 and 6942.2 ± 3747.8 μg· l^-1· h, respectively. According to AUC_0-t, the relative bioavailability of capsule of gliquidone was 103.8 ± 15.7%. The results of statistical analysis showed that the two formulations were bioequivalent.

Key words gliquidone; HPLC; pharmacokinetics

格列喹酮（gliquidone）是第二代磺酰脲类口服降糖药，用于治疗非胰岛素依赖型（型）糖尿病。据文献报道，该药口服吸收良好，经肝脏代谢后主要由胆汁排泄，肾脏排泄可忽略，所以肾脏损伤或糖尿病型肾病不会影响格列喹酮及其代谢物的血浆浓度。这种消除特性使格列喹酮成为磺酰脲类药物中，有肾脏损害的糖尿病患者的首选药物^[1]。文献中关于测定生物样品中格列喹酮浓度的分析方法仅限于HPLC柱切换外标法^[1,2]。本文建立了以黄豆苷元二甲醚为内标，测定格列喹酮血浆浓度的HPLC-荧光检测法,并应用此法进行了格列喹酮在健康人体内的药代动力学研究。

材料与方法

1. 仪器与试剂

仪器：美国TSP公司P2000高效液相色谱泵；日本岛津公司RF-535荧光检测器和C-R6A积分仪；中国联想集团PC-586计算机；美国微软公司编制的统计计算软件Excel 7.0.

格列喹酮胶囊由山东天达药业有限公司研制，规格: 每粒30 mg（以格列喹酮计，下同），批号：980301；格列喹酮片由北京第六制药厂生产，规格：每片30 mg，批号：980103。格列喹酮标准品由沈阳药科大学药剂教研室提供，含量99.5 %；黄豆苷元二甲醚标准品（内标）由沈阳药科大学药化教研室提供，含量99.6 %。甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸二氢铵、乙醚、异丙醇为分析纯；空白人血浆由沈阳中心血站提供。

2. 试验对象

选择健康男性志愿受试者10名，年龄21～23岁，体重55～70 kg，签署知情同意书，于试验前在医院接受全面的体格检查，对肝、肾功能及血糖进行化验测定，并进行心电图检查，结果均属正常。受试者无既往病史和药物过敏史，精神状态良好，平时很少服药，不吸烟，不嗜酒，试验前14 d内未用任何药物，并禁忌烟酒。有关临床试验工作在辽宁省人民医院进行。

3. 给药方案与样品采集

将10名受试者随机分为两组，自身交叉服用受试制剂和参比制剂，药物清洗期为1周。受试者于试验前一日晚8:00开始禁食，试验当日晨7:00空腹口服格列喹酮60 mg，用200 ml温开水送下，服药后2 h和5 h进食统一的标准餐。服药后受试者在室内休息，采血期间避免剧烈运动。于服药前和服药后0.33，0.67，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0，7.0，9.0，11.0，14.0 h，由肘静脉取血4 ml，并立即移入经肝素处理的离心试管中，静置5 min后，离心15 min（3000 r· min^-1），分离血浆，于- 20℃冰箱中保存待测。

4. 血浆样品的分析方法

4.1 色谱条件

色谱柱为日本岛津Shim-pack CLC-ODS，150×6.0 mm I.D.，粒径5 μm；流动相为甲醇-乙腈-0.01 mol· l^-1磷酸二氢铵溶液（用氨水调pH为7.4）（10: 9: 10，v/v），流速为1.5 ml· min^-1，荧光检测激发波长315 nm，发射波长410 nm，柱温为室温，纸速为2 mm· min^-1。

4.2 血浆样品预处理

取血浆样品0.5 ml于10 ml带塞试管中，加80%的甲醇溶液100 μl，内标溶液（100 mg· L^-1黄豆苷元二甲醚80%甲醇溶液）100 μl，混匀。再加2 mol· l^-1的盐酸200 μl酸化，加3 ml乙醚-异丙醇（100: 5，v/v），涡流1 min，振摇15 min，离心（3000 r· min^-1）10 min。分离有机层置另一个10 ml带塞试管中，在40℃下氮气吹干，残留物加500 μl流动相溶解，吸取50 μl进样。

实验结果

1. 方法专属性

分别取6名受试者的空白血浆0.5 ml，按“血浆样品预处理”项下操作（不加内标），进样50 μl，色谱图如图1A；将一定浓度的格列喹酮标准溶液加到空白血浆中，依同法操作，色谱图如图1B，其中格列喹酮和内标物的保留时间分别为5.3 min和8.6 min；取健康受试者给药后采集的血浆样品0.5 ml，依同法操作，色谱图如图1C。结果表明，血浆中内源性物质不干扰格列喹酮和内标的测定。

Fig1. Chromatograms of gliquidone and internal standard. (A) Blank human plasma; (B) Blank human plasma spiked with gliquidone and internal standard;(C) Human plasma collected from a volunteer a single oral dose of gliquidone (60mg). Peak 1, gliquidone; Peak 2, the internal standard.

2. 标准曲线和线性范围

取空白人血浆0.5 ml，分别加入格列喹酮标准系列溶液100 μl,相当于血浆浓度为50, 100, 200, 500, 1000, 2000 μg·l^-1，按“血浆样品预处理”项下操作；以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰高比值为纵坐标，用加权最小二乘法^[3]进行回归运算，求得的直线回归方程即为标准曲线。本方法的线性范围为50～2000 μg·l^-1，最低定量限为50 μg·l^-1。

3. 精密度与准确度

取空白血浆0.5 ml，按“标准曲线”项下方法配制低、中、高三个浓度（分别为50，1000，2000 μg· l^-1）的质量控制（QC）样品，进行6样本分析，连续测定3 d，并与标准曲线同时进行，根据QC样品的结果，求得本法的准确度与精密度，结果见表1。本法的相对偏差（RE）＜ 4.5 %，日内RSD＜ 8.6 %（n =6），日间RSD＜ 5.2 %（n=18），均符合目前生物分析方法有关国际规范的要求^[4]。

4. 受试者血药浓度测定结果

采用本法测定了10名健康男性志愿者口服受试制剂和参比制剂后各时间点的血浆样品，以当日的标准曲线计算各时间点样本中格列喹酮的浓度，同时测定QC样本（3个浓度，双样本）以保证结果的可靠性。10名受试者口服受试制剂和参比制剂后的平均药时曲线见图2。

Fig.2. Mean plasma concentration-time profiles of two gliquidone

formulations after a single oral dose of 60 mg gliquidone in 1