摘要：用高效毛细管电泳法测定盐酸多柔比星的含量。考察不同试验条件下盐酸多柔比星的胶束动电毛细管电泳行为。选择50mmol/L十二烷基硫酸钠，50mmol/L硼砂溶液(pH8.7)含10%乙腈为运行缓冲液，以β-萘磺酸钠为内标，于231nm波长处测定。在0.17～0.85g/L的范围内呈良好的线性关系，r=0.9994，重现性实验RSD为2.5%(n=5)。

中图分类号：R927.2文献标识码：A

文章编号：1001-8689(2000)04-0278-02

Determination of doxorubicin hydrochloride by

high performance capillary electrophoresis

Wang JianandHuang Zong-yu

(Zhejiang Institute for Drug Control，Hangzhou 310004)

ABSTRACTA new analytical method of doxorubicin hydrochloride was developed using micellaen eletrekinetic capillary chromatography (MECC) by optimizing the major affecting factors. The running buffer solution was 50mmol/L borate buffer (pH8.7) added 50mmol/L SDS and 10% acetonitrile. The internal standard was β-naphthalene sulfonate. The UV detector was set at 231nm. The method showed good linearity (r=0.9994) and reproducibility (RSD=2.5%, n=5). The concentration range was 0.17～0.85g/L.

KEY WORDSDoxorubicin hydrochloride；HPCE；Determination

盐酸多柔比星为抗肿瘤抗生素，收载于《美国药典》第23版^［1］，用高效液相色谱法测定含量。盐酸多柔比星由微生物发酵得到柔红霉素，再通过半合成制得，产品中所含杂质较多。本文用高效毛细管电泳法(HPCE)^［2］考察盐酸多柔比星的电泳行为，分离盐酸多柔比星中的合成前体、杂质，并用内标法测定含量。

1材料与方法

1.1仪器和试药

Beckman P/ACE System 5500毛细管电泳仪，带Gold软件的数据工作站，Beckman毛细管柱37cm×75μm。

盐酸多柔比星对照品(含量97.4%)及原料药，内标β-萘磺酸钠，盐酸柔红霉素(浙江海正药业提供)，十二烷基硫酸钠(SDS日本进口，上海化学试剂站分装，分析纯)，其余试剂均为分析纯。

1.2溶液配制

1.2.1缓冲溶液取硼酸和硼砂适量，用水分别制成50mmol/L溶液；取50mmol/L硼酸溶液，分别用50mmol/L硼砂溶液调节制成pH为7.4、7.7、8.2、8.7、8.9的50mmol/L硼砂缓冲液。

1.2.2电泳缓冲液称取SDS适量，加50mmol/L硼砂缓冲液，制成SDS含量为10、25、50、75mmol/L溶液。50mmol/L硼砂电泳缓冲液，用0.2μm滤膜过滤。

1.2.3β-萘磺酸钠内标贮备液取β-萘磺酸钠适量，加水溶解，制成2.5g/L溶液。

1.2.4盐酸多柔比星对照品贮备液精密称取盐酸多柔比星对照品适量，加水溶解制成1.66g/L溶液。

1.3实验方法

电泳缓冲液：50mmo/L SDS、50mmol/L硼砂缓冲液(pH8.7)含10%乙腈；操作电压：20kV；检测波长：231nm。电泳见图1。

图1毛细管电泳图

1：内标；2：多柔比星；3：柔红霉素

毛细管分别用水、硼砂缓冲液冲洗2min后，以压力方式于阳极处进样3S。

2实验与结果

2.1实验条件选择

2.1.1检测波长的选择盐酸多柔比星在231和254nm波长处均有最大吸收，但在254nm波长处检测，内标吸收度很小；在231nm波长处检测，多柔比星与内标均有较大的响应，因此选择231nm为检测波长。

2.1.2SDS浓度的影响随着SDS浓度的增加，迁移时间增加，多柔比星峰形变好(图2)， 当SDS浓度为50mmol/L时，柱效最高，故选择浓度为50mmol/L。

图2SDS浓度对迁移时间的影响

2.1.3缓冲液浓度与电压的影响当缓冲液浓度增加时，迁移时间延长(图3)，柱效增加。但由于增加缓冲液浓度，电流增加，焦耳热增加，使基线不稳，选最佳硼砂缓冲液浓度为50mmol/L。

图3缓冲液浓度对迁移时间的影响

随着电泳电压增加，迁移时间缩小，但电压过高，电流大，基线不稳，故选择20kV。

2.1.4缓冲液pH的影响实验表明，随着pH增加，分离效果有所改善，迁移时间变化见图4。当pH为8.7时，基线相对稳定，故选用此pH值。

图4pH值对迁移时间的影响

1：内标；2：多柔比星；3：柔红霉素

2.1.5有机改性剂的影响试验表明，甲醇对分离没有改善作用，乙腈有显著的分离多柔比星与合成前体柔红霉素的作用，随着乙腈量的增加，迁移时间延长，多柔比星与柔红霉素的分离度变大(图5)，但当乙腈量大于10%时，峰形变差，故选择乙腈的加入量为10%。

图5乙腈浓度对迁移时间的影响

1：内标；2：多柔比星；3：柔红霉素

2.2定量分析

2.2.1线性范围与校正因子精密量取对照品贮备液1、2、3、4、5ml，分别置10ml容量瓶中，各精密加入内标贮备液1ml，加水至刻度，摇匀，以选定实验条件电泳，以盐酸多柔比星与β-萘磺酸钠峰面积比为纵坐标，盐酸多柔比星浓度为横坐标，进行线性回归，其线性方程为Y=0.04937+2.389C，r=0.9994，定量线性范围0.17～0.85g/L。

2.2.2重现性实验精密称取同一批号样品5份，分别置50ml容量瓶中，分别精密加入内标贮备液5ml，加水至刻度，摇匀，以上述实验条件电泳，内标法计算，RSD为2.5%(n=5)。

2.2.3样品测定精密称取盐酸多柔比星原料药适量(约25mg)置50ml容量瓶中，精密加入内标贮备液5ml，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照上述实验条件电泳并计算含量，990114、990115、990116批号样品含量分别为96.3%、93.9%、95.6%。

3结论

用HPCE法测定盐酸多柔比星提高了柱效，用内标法提高了测定的准确性。在本实验条件，盐酸多柔比星与合成前体、杂质得到很好分离，可用于盐酸多柔比星的质量控制。

作者简介：王建：男，生于1963年，硕士，副主任药师。

参考文献

［1］ United States Pharmacopeia Convention Inc. The united states pharmacopeia ⅩⅩⅢ ［S］. Tamnton: Rand McNally，1995：553

［2］ Reinhoud N J, Tjaden UR. Bioanalysis of antharacyclines in human plasma by capillary electrophoresis with lasser-induced fluorescence detection ［J］. J Chromatogr，1992；574：2，327

收稿日期：1999-07-19