摘要目的： 研究隐丹参酮(CT)及其代谢物丹参酮IIA(TS)在猪体内的药代动力学。方法： 实验猪5头, 单剂量(10 mg^.kg^-1) iv隐丹参酮后,采用反相 HPLC法检测CT及TS的血浆浓度。 以二苄基为内标, 流动相为甲醇—水(85∶15),检测波长254 nm。结果： CT血药时程符合二室开放模型。im与po给药后, CT和TS的血药浓度很低。 少量原药及其代谢产物在胆汁中随着给药时间的延长逐渐增多。不同途径给药后(iv及po),隐丹参酮及丹参酮IIA在尿中的排泄量占给药剂量的比例很小。结论： 猪CT及TS药代动力学数据为动物临床用药提供有价值的理论依据。

PHARMACOKINETICS OF CRYPTOTANSHINONE AND

ITS METABOLITE IN PIGS

Xue Ming(Xue M), Cui Ying(Cui Y),Luo Yongjiang(Luo YJ),

Zhang Bin(Zhang B) and Zhou Zongtian(Zhou ZT)

(Insititute of Traditional Chinese Veterinary Medicine, Chinese Academy of Agricultural Sciences Lanzhou 730050)

Wang Hanqing(Wang HQ)

(Lanzhou Institute of Physical Chemistry, Academia Sinica, Lanzhou 730050)

ABSTRACTAIM: To study the pharmacokinetics and excretion of the antibacterial constituent cryptotanshinone (CT) isolated from the roots of Saliva przewaalskii Maxim (Labiatae) and its metabolite tanshinone IIA(TS) in pigs.METHODS: Normal pigs were given CT iv 10 mg·kg^-1. The concentrations of CT and TS in porcine plasma, urine and bile were determined by an HPLC method developed in our laberatory. A waters model 480 instrument was used throughout the experiment. Dibenyl was used as the internal standard at absorption wavelength of 254 nm. A mixture of methanol and water(85∶15) was used as the mobile phase with a flow rate of 1 ml^.min^-1, and YWG C₁₈H₃₇ as stationary phase.RESULTS: The method is simple, sensitive and available for pharmacokinetics studies. Plasma drug concentration-time course of CT after iv adminstration of CT was found to be fitted to a two compartment open model and its pharmacokinetic paremeters were as follows: T_1/2α=2.36 min, T_1/2β=64.78 min, AUC=23.83 mg^.min^.L^-1. TS was detected simultaneously. Peak plasma concentration of TS was reached at about 4.6 minutes after dosing. C_max=0.62μg^.ml^-1, T_1/2β=189.04 min, AUC=22.97 mg^.min^.L^-1.The excretion of CT and TS in urine and bile in 24～48 hour was very few after iv and po administration of CT.CONCLUSION: The pharmacokinetics of CT and TS in pigs provided a useful index for clinical trial in animals.

KEY WORDScryptotanshinone; tanshinone IIA; pharmacokinetics; HPLC

隐丹参酮(cryptotanshinone， CT)是从药用鼠尾草植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)及甘西鼠尾草(S.przewaquskii Maxim)的根中分离提纯的二萜醌类化合物。体外试验证明，对金葡菌及其耐药菌株、链球菌、分枝杆菌等病源菌有较强的抑杀作用^［1，2］。临床应用以CT为主成分的总酮治疗人的一些感染性疾病，收到较好效果^［3，4］。我们开始用其治疗畜禽感染性疾病如乳腺炎、子宫内膜炎、外伤感染、腹泻等，效果满意。CT在动物体内的药代动力学未见报道。本文报道CT及其活性代谢产物丹参酮IIA(tanshinone IIA,TS)在猪体内的药代动力学、排泄与代谢。为临床合理用药、新药研制及剂型改进提供理论依据。

材料与方法

药品与试剂CT标准品由本实验室从甘西鼠尾草的根中分离纯化制得，经熔点、TLC及光谱数据证明为纯品^［2，5］。 纯度大于99％，静脉注射液用丙二醇溶解CT标准品制得，浓度为15 mg^.ml^-1。甲醇为色谱纯，重蒸水，内标二苄基(dibenzyl, DB) 为实验试剂，重结晶。其它试剂均为市售分析纯。

实验动物健康杂交猪5头，雄性阉割，体重(30±5) kg， 购自甘肃省种猪场。先iv CT 10 mg^.kg^-1, 约半月后, po CT 40 mg^.kg^-1, 并分别在代谢笼内收集(0～48) h自然排出的尿液, -20℃冰箱保存备用。另选健康猪2头, 禁食12 h后灌服CT 40 mg^.kg^-1, 在乙醚麻醉下插胆管, 并分段收集胆汁, 测定药物及其代谢物含量。

给药及采样每头猪由耳静脉插套管后，先经iv，半月后经po给药，给药前禁食12 h，不禁水。给药前即时及给药后不同时间采取静脉血5 ml，肝素液抗凝，离心(3 000 r^.min^-1) 10 min，分离血浆，每个时间点精确吸取血浆1.0 ml。同时采集胆汁与尿液，-20℃冰箱保存。

仪器与色谱条件Waters高效液相色谱仪系列； YWG-C₁₈H₃₇(10 μm)4.0mm×150mm色谱柱；Waters 510型泵;480型紫外检测器; U6K型进样阀；AST型数据处理仪；3800型打印机。流动相为甲醇—水(85∶15),流速1.0 ml^.min^-1;柱温25±0.5℃;检测波长254 nm；内标为DB。

药物检测方法及数据处理分别精确量取血浆样品1.0 ml，胆汁1.0 ml及尿液2.0 ml, 精确加入内标，再加入等体积乙酸乙酯提取3次, 涡旋1 min, 3 000 r^.min^-1离心10 min, 合并上清液, 氮气吹干, 残渣用流动相100 μl溶解, 取10μl进样, 反相HPLC检测CT及TS浓度^［6］。 iv的血药时程数据按非线性最小二乘法用MCPKP药代动力学程序处理^［7］。

结果

1色谱行为

在上述色谱条件下，空白血浆及尿液和给药后血浆及尿液的色谱图见图1，CT的保留时间(T_R)为(4.1±0.1)min, TS的T_R为(5.9±0.1)min。

Fig 1Representative chromatograms of (a) blank plasma, (b) a plasma sample from a pig(given crytotanshinone) containing cryptotanshinone 0.82 μg^.ml^-1 and tanshinone IIA 1.41 μg^.ml^-1, (c) blank urine and (d) a urine sample from a pig(given crytotanshinone) containing cryptotanshinone 8.28 μg^.ml^-1 and tanshinone IIA 3.22 μg^.ml^-1. 1: Cryptotanshinone; 2: Dibenzy(internal standard); 3: Tanshinone IIA.

2线性范围和检测灵敏度

分别配制浓度为0.05, 0.10, 0.25, 0.50, 1.00, 2.50, 5.00及12.5 μg^.ml^-1的CT及TS的标准血样及尿样各2管, 按样品测定方法操作,以CT的浓度对CT峰面积与内标DB的峰面积比值进行线性回归,得回归方程,血浆:Y=0.3068X-0.0337, γ=0.9994， 尿样:Y=0.7727X-0.0317, γ=0.9998。

以TS的浓度对TS峰面积与DB的峰面积比值进行线性回归, 得回归方程, 血浆: Y=1.1783X-0.0428, γ=0.9998, 尿样: Y=1.1116X+0.0048, γ=0.9998。

最低检测量为10 ng, 最低检测浓度为16 ng^.ml^-1。

3精密度试验

分别配制含CT 0.2, 0.5, 2.5及含TS 0.16, 0.5, 2.5 μg^.ml^-1的标准血样, 配制含CT与TS各0.8, 3.0, 12.5 μg^.ml^-1的尿样, 各管中加内标适量。依法操作，分别测定日内及日间精密度，结果日内测得各浓度的相对标准差(RSD)小于3％, 日间测得各浓度的RSD小于6％。

4回收率测定

分别于空白血浆1.0 ml中加入CT 0.2, 0.5, 2.5 μg,和TS 0.16, 0.5,2.5 μg及内标等量, 按所建立的HPLC法测定。分别于空白尿样2.0 ml中各加入CT及TS各0.8, 3.0, 12.5 μg, 并加内标等量, HPLC法测定, 结果血样平均方法回收率为:(92.57±7.33)％(CT), (91.84±2.75)％(TS); 尿样平均方法回收率: CT为(98.26±4.16)％,TS为(97.33±3.85)％。

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