摘要目的： 考察维拉帕米(VPM)和去甲维拉帕米(NVPM)对映体的药代动力学特性。方法： 8名汉族男性健康志愿者分别po外消旋VPM 80 mg和静滴5 mg，以三甲基-β-环糊精为手性选择剂，毛细管电泳法同时测定VPM和NVPM对映体的血浆浓度，用二房室开放模型拟合药-时曲线。结果： po VPM的R/S(AUC),R/S(CL)和R/S(C_max)比率分别为3.66±1.86，0.3±0.053和4.82±0.58；NVPM的R/S(C_max)和R/S(AUC)比率为2.58和2.36。iv VPM的R/S(AUC)，R/S(CL)和R/S(C_max)比率分别为1.04±0.29，1.01±0.3和1.36±0.12。R-(+)-VPM和S-(-)-VPM的绝对生物利用度为30.3±19和9.8±5.9。结论： VPM有较大的对映体特异性首过代谢，选择优对映体S-(-)-VPM为监测对象有利于临床合理使用外消旋VPM。

ENANTIOSELECTIVE PHARMACOKINETICS OF VERAPAMIL IN

EIGHT HEALTHY CHINESE MALE VOLUNTEERS

Rui Jianzhong(Rui JZ), Pang Xiaodong(Pang XD)¹, Ling Shusen(Lin SS),

Xiang Binlen(Xiang BR)² and An Dengkui(An DK)²

(Department of Clinical Pharmacology, General Hospital of Armed Forces, Nanjing 210002;

¹Department of Pharmacy, the 153 Hospital of PLA, Zhengzhou 450012;

²Department of Pharmaceutical Analysis, China Pharmacutical University, Nanjing 210009)

ABSTRACTAIM: To investigate the enantiospecific pharmacokinetics of verapamil (VPM) and its major metabolite, norverapamil (NVPM).METHODS: Eight healthy Chinese male volunteers were given an oral dose of 80 mg or an intravenous infusion dose of 5 mg of racemic VPM. Plasma concentrations of enantiomers of VPM and NVPM were simultaneously determined by capillary zone electrophoresis using trimethyl-β-cyclodextrin as chiral selector. The concentration-time curves were fitted as two compartment open model.RESULTS: The ratios of R/S(AUC), R/S(CL) and R/S(C_max) of VPM given orally were 3.66±1.86, 0.3±0.053 and 4.82±0.58, respectively; the ratios of R/S(C_max) and R/S(AUC) of NVPM were 2.58 and 2.36. The ratios of R/S(AUC), R/S(CL) and R/S(C_max) of VPM given by intravenous infusion were 1.04±0.29, 1.01±0.3 and 1.36±0.12, respectively. Plasma concentrations of NVPM were lower than the limit of quantitative detection. Absolute bioavailability of R-(+)-VPM and S-(-)-VPM were 30.3±19 and 9.8±5.9. R/S ratio of bioavailability is 3.09.CONCLUSION: Distinct stereoselective first-pass metabolism in healthy Chinese males were observed. As racemic VPM were administered by different route or the individual variation of enantioselectove pharmacokinetics of VPM were noticeable. It is significent to monitor the concentration of S-(-)-VPM for safety, rationality and effectiveness in clinical therapy.

KEY WORDSVerapamil; norverapamil; enantiomer; pharmacokinetics; capillary electrophoresis

AcknowledgementsThe author would like to acknowledge Dr. Longstreth(Searle Co., Skokie, IL, USA) for kindly providing the standards of R-(+)-VPM·HCl, S-(-)-VPM·HCl,(±)NVPM·HCl, R-(+)-NVPM·HCl and S-(-)-NVPM·HCl.

维拉帕米(verapamil,VPM)是临床常用的抗心律失常、抗心绞痛和治疗高血压病的钙通道阻滞剂，是以外消旋形式使用的手性药物，其对映体间有较大的立体选择性药代动力学和药效学差异。S-(-)-VPM延长PR间期的药理作用为同浓度R-(+)-VPM的10～20倍，而S-(-)-VPM的清除率大约为R-(+)-VPM的2倍。由于80%左右的VPM经肝脏对映体特异性地首过代谢，po外消旋VPM后，R-(+)-VPM的生物利用度为S-(-)-VPM的2.5倍，血浆中S/R比率为0.23±0.05；VPM iv给药后，血浆中S/R型比率为0.56±0.10，iv较po给药有更高的S/R型比率，与po相比，在总浓度相等的情况下，优对映体S-(-)-VPM的浓度明显升高，产生的负性肌力、负性传导和血管扩张作用增大。去甲维拉帕米(norverapamil，NVPM)是VPM的主要代谢产物，也是手性化合物，其降压作用为原型药20%，呈现出对映体选择性的药代动力学特性^［1］。

在由不同途径给药或对映体选择性药代动力学的个体差异较大时，仅测定VPM血浆总浓度，研究VPM消旋体形式的药代动力学，不能很好地显示其剂量、浓度和药物效应的相关性。开展中国人VPM和NVPM对映体药代动力学研究，可为临床合理用药提供实验基础和理论依据。本文介绍以高效毛细管电泳法同时测定VPM和NVPM对映体血浆浓度，考察8名汉族男性健康志愿者po和iv外消旋VPM的对映体药代动力学的研究结果。

材料和方法

仪器自动毛细管电泳仪：Biofocus 2000型(Bio-Rad Laboratories, USA)；可装卸毛细管电泳柱夹套。毛细管柱：75 μm(ID)×30 cm聚丙烯酰胺涂渍柱(大连化学物理研究所)，有效长度为柱长减去4.5 cm。

试剂和药品所有试剂均为分析纯。异丙醇、乙酸乙酯、正己烷(上海化学试剂厂)，磷酸(85%)、氢氧化钠(江苏宝应化学试剂厂)；三甲基-β-环糊精(TM-β-CD)、(±)gallopamil·HCl，(±)VPM·HCl(Sigma Company, USA),R-(+)-VPM·HCl, S-(-)-VPM·HCl, (±)NVPM·HCl, R-(+)-NVPM·HCl, S-(-)-NVPM·HCL(Longstreth博士提供, Searle, USA)；盐酸VPM普通片(天津市中央制药厂，批号941062)，每片含量40 mg。盐酸VPM注射液(江苏兴化县制药厂，批号93062031)，每支2 ml，含量5 mg。

受试者8名汉族男性健康志愿者，年龄(27±5) a，体重(64.6±6.5) kg，身高(173.5±4.3) cm。试验前经体检证明肝、肾和心脏等主要脏器功能均正常。

实验设计试验于南京军区总医院临床药理科I期临床病房进行，室温25℃。8名汉族男性健康志愿者随机加入VPM po及iv给药试验，实验前两周起至整个实验期间未服用其它药物，禁止烟、酒、饮茶及含有酒精成分的饮料，实验期间统一饮食。8名受试者禁食过夜后，于早晨8:00 1次用200 ml开水伴服VPM 80 mg，服药后2 h用过渡餐，4 h用午餐，9.5 h用晚餐，次日晨正常用早餐。相隔一周后在同样条件下，将含量为5 mg的VPM注射液2 ml加入到10%葡萄糖注射液100 ml中，30 min匀速静脉输注。po及iv用药后，志愿者在静卧状态于0,0.5,1,1.5,2.5,4.5,6.5,8.5,11.5,24 h取左臂静脉血3 ml，血样置于肝素抗凝试管中，以2000×g离心10 min，取出血浆，密封后置-20℃保存。

血浆浓度测定^［2,3］用高效毛细管电泳中最常用的毛细管区带电泳模式，电泳条件为： 每一样品测定前，相继用0.1 mol·L^-1 NaOH溶液(40 s)，二次重蒸水(1 min)，pH为2.5，60 mmol·L^-1的磷酸盐背景缓冲液(1 min)，含60 mmol·L^-1 TM-β-CD的磷酸盐手性拆分缓冲液(1 min)冲洗毛细管柱；电迁移方式进样，电压为12 kV, 时间为7 s, 电流为64 μA；运行电压为14 kV, 电流为76 μA；柱温控于20℃，样品室温度为(23±2)℃；200 nm UV检测。每天样品测定结束后，用0.1 mol·L^-1 NaOH溶液冲洗5 min，二次重蒸水冲洗15 min，并用氮气吹干。样品处理：在具塞10 ml刻度离心管中加入血浆样品1.0 ml，再加入含(±)Gall-opamil·HCl 100 ng·ml^-1的内标溶液0.1 ml，涡旋混合10 s，放置5 min，再加入0.1 mol·L^-1 NaOH 1.0 ml、正已烷—乙酸乙酯—异丙醇(6∶3∶1) 5.0 ml，涡旋混合1.5 min后于2000×g离心15 min，取上层有机相4 ml，40℃下空气吹干，残渣用二次重蒸水0.1 ml溶解，先涡旋10 s，再超声5 min后进样测定。

本法可在11 min内同时测定VPM和NVPM对映体，各对映体检测的线性范围为2.50～3000 ng·ml^-1，准确度和精密度达到生物样品分析的要求(最大RSD＜12%)，R-(+)-VPM和S-(-)-VPM的相对回收率＞90%, R-(+)-NVPM和S-(-)-NVPM的相对回收率为75%左右。用本法测定健康志愿者口服和静滴VPM后各对映体的血浆浓度，每次加入一质控点，实验结果稳定。

数据分析用3P87软件对8名受试者血浆浓度均值与时间曲线进行拟合，选择二房室模型。因口服时吸收相个体差异较大，本文结合另一药代动力学参数估算软件—PKBP-N1进行数据分析，数据拟合优度高，结果良好。NVPM仅考察了AUC_(0-∞)，AUC_(0-t)，C_max和T_max。C_max和T_max以实测浓度的最大值及相应点的时间计算。

实验结果

1VPM和NVPM对映体血浆药物浓度

8名汉族男性健康志愿者po外消旋VPM 80 mg后，取样点时间上血浆中VPM对映体浓度及总浓度(两对映体浓度之和)结果见图1，R-(+)-VPM的浓度较S-(-)-VPM大4<