摘要：目的：建立用无毒的乙醇作为反相高效液相色谱流动相溶剂分析中药及中成药有效成分的方法。方法：用乙醇－水系统作反相高效液相色谱流动相测定中药及中成药的主要有效成分, 并与甲醇－水或乙腈－水系统的测定结果进行比较。结果：2种色谱系统均达到基线分离，测得含量基本一致，乙醇系统与甲醇系统或乙腈系统相比，测定相对偏差＜±3％（n = 3）。结论：选择合适的柱温等色谱条件，乙醇可用作反相高效液相色谱流动相分析中药及中成药中有效成分，安全、准确。

The Application of Ethanol-Water System RP-HPLC

Method in Analyzing Chinese Traditional Medicines

and Medicinal Preparations

Fu ChunmeiLi ZhangwanLiu SankangChen Cong

（School of PharmacyWest China University of Medical Science，Chengdu610041）

Abstract：Objective：To establish RP-HPLCs using ethanol as mobile phase solvent for analyzing Chinese traditionnal medicines and Chinese traditionnal medicinal preparations.Methods:The main components of some Chinese medicines and Chinese medicinal preparations were separated and measured by RP-HPLC using ethanol-water as mobile phase .Results:The results were compared with those obtained with methanol-water or acetonitrile-water. The relative standard deviations were small than 3%(n=3).Conclusions:Ethanol can be used as RP-HPLC mobile phase solvent by adjusting the column temperature moderatly. The method is safe and accurate.

Key words：RP-HPLC,Chinese traditional medicines,Chinese medicinal preparations▲

甲醇、乙腈为反相高效液相色谱法常用溶剂，均有毒。乙醇与甲醇的理化性质相似却无毒, 但25℃时其粘度是甲醇的2倍^［1］, 限制了它在反相高效液相色谱法中的应用。本文以部分常见中药及其成药中有效成分为例，使流动相中乙醇比例在4.75％～66.5％进行研究。结果证明，在一般情况下，适当升高柱温可以用乙醇代替乙腈或甲醇作为反相高效液相色谱流动相溶剂，它在反相色谱中溶剂强度较大，可减少有机溶剂用量，而且乙醇无毒,有利于实验环境的保护。

1仪器与试药

美国HP1100型高效液相色谱仪，HP1100化学工作站；日本岛津LC－6A液相色谱仪，CR－4A色谱处理机，SPD－6AV紫外检测器。

丹参素对照品（归一化法测定，含量大于98％），上海医科大学提供；射干苷（归一化法测定，含量大于98％），重庆市药检所提供；其余对照品（供含量测定用或归一化法测定含量大于98％）, 中国药品生物制品检定所提供。各种生药市售（ 经本院生药室鉴定，符合中国药典标准）。各种中药制剂为市售或厂家提供。

乙腈为色谱纯, 其它试剂均为分析纯, 水为超纯水。

2溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取各种对照品适量，分别用适当的溶剂溶解，制成每1 mL 含黄芩苷0.025 mg、大黄素0.02 mg 、葛根素0.04 mg 、丹参素0.1 mg 、原儿茶醛0.02 mg 、丹参酮Ⅱ_A 0.01 mg、柚皮苷0.06 mg、盐酸小檗碱0.05 mg、盐酸巴马汀0.05 mg、射干苷0.05 mg、蛇床素0.015 mg的溶液作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：采用适当的方法^［2～7］分别提取适量生药及制剂，提取液过滤，取续滤液作为供试品溶液。

3色谱条件

色谱柱：Shimpack CLC－ODS（150 mm ×6 mm, 5 μm），自填国产YWG C₁₈（10 mm ×4.6 mm, 10 μm）作保护柱，除特别指出，流速均为 1 mL·min^-1，进样10 μL ，流动相、检测波长、柱温与柱压如下：

3.1丹参及丹参注射液(华西医科大学制药厂)中丹参素、原儿茶醛 Ⅰ：乙醇－0.2 mol·L^-1 醋酸铵(硫酸调pH 2.2)(4.75∶95.25)，280 nm，35 ℃，7.6 MPa；Ⅱ^［2］：甲醇－0.2 mol·L^-1 醋酸铵(硫酸调pH 2.2)(12 ∶ 88)，280 nm，35 ℃，8.0 MPa；见图1(0.09 AUFS)。

3.2葛根及松龄血脉康胶囊(成都康弘制药有限公司)中葛根素 Ⅰ： 乙醇－［36%醋酸－水(3 ∶ 72)］(11.4 ∶ 88.6)，247 nm，40 ℃，9.6 MPa；Ⅱ^［3］：甲醇－［36%醋酸－水(3∶72)］(25∶75)，247 nm ，35 ℃，11.5 MPa；见图2(0.08 AUFS)。

图1丹参(A,a)及丹参注射液(B,b)色谱图

A，B.乙醇系统a、b.甲醇系统

1.丹参素2.原儿茶醛

图2野葛(A,a)及松龄血脉康(B,b)中葛根素色谱图

A、B. 乙醇系统a、b. 甲醇系统

1. 葛根素

3.3射干及口腔舒(华西医科大学研制)中射干苷 Ⅰ：乙醇-0.05 mol·L^－1 磷酸二氢钾(17.1∶82.9，pH 3.0)，265 nm，45 ℃，9.6 MPa；Ⅱ：甲醇－0.05 mol·L^－1 磷酸二氢钾(32∶68， pH 3.0)，265 nm，40 ℃，9.6 MPa；见图3(0.16 AUFS )。

图3射干(A,a)及口腔舒(B,b)色谱图

A、B.乙醇系统a、b.甲醇系统

1.射干苷

3.4骨碎补及骨碎补胶囊(自制)中柚皮苷 Ⅰ：乙醇-36%醋酸－水(22.8∶4∶77.2 )，283 nm，35 ℃，10.3 MPa；Ⅱ^［4］ ：甲醇－36％醋酸－水(35∶4∶65 )，283 nm，35 ℃，9.8 MPa；见图4(0.08 AUFS)。

图4骨碎补(A,a)及骨碎补胶囊(B,b)色谱图

A、B.乙醇系统a、b.甲醇系统

1.柚皮苷

3.5黄芩及参柴颗粒(成都华宇制药厂)中黄芩苷 Ⅰ：乙醇－0.2 mol·L^－1 磷酸二氢钠(磷酸调pH 2.7)(24.7∶75.3)，275 nm，0.9 mL·min^-1，45 ℃，12.8 MPa； Ⅱ^［5］： 甲醇－0.2 mol·L^－1 磷酸二氢钠(磷酸调pH 2.7)(45∶55)，275 nm，0.9 mL·min^-1，35 ℃，12.8 MPa；见图5(0.08 AUFS)。

图5黄芩(A,a)及参柴颗粒(B,b)中黄芩苷色谱图

A、B. 乙醇系统a、b. 甲醇系统

1. 黄芩苷

3.6黄连及痛宝胶囊(四川恩威制药有限公司)中盐酸小檗碱 Ⅰ：乙醇－水－磷酸二氢钾－十二烷基硫酸钠(408.5 mL∶591.5 mL∶3.4 g∶1.7 g)，345 nm，60 ℃, 10 MPa；Ⅱ^〔6〕： 乙腈－水－磷酸二氢钾－十二烷基硫酸钠(500 mL∶500 mL∶3.4 g∶1.7 g )，345 nm，25 ℃, 7.3 MPa；见图6(0.08 AUFS)。

图6黄连(A,a)及痛宝胶囊(B,b)色谱图

A、B. 乙醇系统 a、b. 乙腈系统

1. 巴马汀 2. 盐酸小檗碱

3.7蛇床子及洁尔阴洗液(四川恩威制药有限公司)中蛇床素 Ⅰ：乙醇－水－磷酸(51.3∶48.7∶0.2)，322 nm，50 ℃，12.2 MPa； Ⅱ：甲醇－水－磷酸(75∶25∶0.2)，322 nm，35 ℃，9.8 MPa；见图7(0.08 AUFS)。

图7蛇床子(A,a)及洁而阴洗液(B,b)色谱图

A、B. 乙醇系统 a、b. 甲醇系统

1. 蛇床素

3.8大黄生药、制首乌及异功化瘤颗粒(成都中医药大学研制)中大黄素 Ⅰ：乙醇－0.2 mol·L^－1 磷酸二氢钠（57∶43，pH 3.0），289 nm，55 ℃，11.9 MPa； Ⅱ： 甲醇－0.2 mol·L^－1 磷酸二氢钠（80∶20，pH 3.0），289 nm<