摘要：用毛细管区带电泳法同时测定喘咳宁片中的盐酸麻黄碱和巴比妥的含量．以苯巴比妥为内标物，以20 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氢钠（pH 7.0）为运行缓冲液，分离电压为9.0 kV时，在9 min内完成分离．盐酸麻黄碱和巴比妥分别在0.17～1.39 mmol/L和0.54～4.16 mmol/L范围内有良好线性关系（r=0.998 7和r=0.996 3），最低检测限分别为2.97μmol/L和3.26 μmol/L（S/N＞3），回收率分别为99.4%和102.2%，系统的精密度良好，RSD在5.0%以内.

分类号：R914.1

Capillary Electrophoresis for the Determination of Ephedrine Hydrochloride and Barbital in the Chuankening Tablets

Li FameiYu LiningZhang Liru

（Department of Basic Courses，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110015）

Abstract：A capillary zone electrophoresis method was developed for the simultaneous determination of ephedrine hydrochloride and barbital in the Chuankening Tablets．The running buffer was 20 mmol/L borate-20 mmol/L NaH₂PO₄ （pH 7.0），phenobarbital was chosen as the internal standard．The separation was completed within 9 min at a voltage of 9.0 kV．The linear ranges were 0.17～1.39 mmol/L and 0.54～4.16 mmol/L，the recoveries were 99.4% and 102.2% and the limits of detection were 2.97μmol/L and 3.26 μmol/L（S/N＞3）for ephedrine hydrochloride and barbital respectively．An RSD＜5.0% was achieved for both compounds.

Key words：capillary zone electrophoresis（CZE）；ephedrine hydrochloride；barbital；the Chuankening Tablet▲

喘咳宁片（在有的省药品标准中称为喘可宁或喘宁片）是一用于治疗支气管哮喘的药物，其主要成分为盐酸麻黄碱和巴比妥．各省地方药品标准均用滴定分析法测定这两种组分的含量^〔1，2〕，操作繁琐，终点不易观察．麻黄碱的测定方法很多，除容量分析法外还包括薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法、电位滴定法及导数光谱、双波长等各种可见-紫外分光光度法^〔3〕．类似地，薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法、紫外分光光度法及离子选择电极法都曾用于巴比妥的测定．有人用三阶导数法和差示分光光度法分别测定喘咳宁片中的盐酸麻黄碱和巴比妥含量^〔4〕．最近又有同时测定这两组分的高效液相色谱法的报道^〔5〕．毛细管电泳（CE）为一新兴的分离分析技术，广泛用于药物分析测定．已有多种毛细管电泳法用于测定中药、复方制剂及体液中的盐酸麻黄碱和药物中的巴比妥含量^〔6～11〕．但未见同时测定盐酸麻黄碱和巴比妥含量的毛细管电泳方法．作者报道同时测定喘咳宁片中这两种组分含量的毛细管区带电泳法（CZE）.

1仪器与试药

GDY-30kV型毛细管电泳高压电源仪（山东大学化学院）；Spectra-100可变波长检测器（Spectra-Physics， USA）改装成毛细管电泳检测器；日立655-60型积分仪；石英毛细管（河北永年光导纤维厂），内径75 μm．

盐酸麻黄碱、巴比妥、苯巴比妥对照品由中国药品生物制品检定所提供；喘咳宁片样品为市售品（丹东制药厂生产，批号960201）；淀粉、糖粉、硬脂酸镁等辅料由本校药剂教研室提供；甲醇为色谱纯（山东省禹王实业总公司化工厂）；硼砂、磷酸二氢钠、磷酸和氢氧化钠均为分析纯试剂．

2实验方法

2.1溶液的配制

2.1.1对照品储备液的配制

精密称取盐酸麻黄碱对照品约15 mg、巴比妥对照品约75 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇-水（体积比1∶1）溶解并稀释至刻度．

2.1.2内标溶液的配制

精密称取苯巴比妥对照品适量，用甲醇-水（体积比1∶1）溶解并稀释至浓度约为4.3 mmol/L.

2.2喘咳宁片中盐酸麻黄碱和巴比妥的测定

2.2.1分离条件

毛细管长度为50 cm，有效长度为40 cm；以20 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氢钠（用磷酸调节至pH 7.0）为运行缓冲液；分离电压为9.0 kV；压差进样5 s，进出口液面高度差25 cm；检测波长为214 nm；柱温为室温．

每次开机后，依次用1 mol/L氢氧化钠及重蒸馏水冲洗毛细管2 min，2次进样之间均用缓冲液清洗毛细管2 min，以获得更好的重现性．所有清洗操作均用注射针管抽真空进行．

上述溶液均用重蒸馏水配制，并在使用前经0.45 μm微孔滤膜滤过并超声脱气．

2.2.2样品测定

取喘咳宁片20片，精密称定．研细后精密称定细粉适量（约为平均片重），置50 mL量瓶中，用甲醇-水溶解并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2.0 mL置10 mL量瓶中，加入内标溶液1.0 mL，用甲醇-水稀释至刻度，进样测定．

3结果与讨论

3.1分离条件的选择

3.1.1运行缓冲体系的选择

通过实验发现在硼砂-磷酸盐体系中盐酸麻黄碱、巴比妥和苯巴比妥（内标物）能实现分离．进一步考察缓冲溶液浓度对各组分电泳行为的影响，发现随缓冲溶液浓度的升高，迁移时间延长（图1）．这主要是由于缓冲溶液浓度升高，其粘度增大，使迁移速度变慢．而且在高浓度缓冲液中焦耳热严重，使峰形变宽．为了实现高效快速分离，本实验选用的运行缓冲液浓度为20 mmol/L．

Fig.1The effect of buffer concentration on migration time

1—Ephedrine hydrochloride；2—Barbital；

3—Phenobarbital（internal standard）

3.1.2运行缓冲溶液pH值的选择

在20 mmol/L的缓冲溶液中，考察其pH值对电泳行为的影响，发现在pH 7.0～9.0范围内，盐酸麻黄碱的迁移时间随pH值的升高缓慢缩短，而巴比妥和苯巴比妥的保留时间逐渐延长（图2）．其原因是盐酸麻黄碱（pKa=10）在这一pH值范围内主要以阳离子形式存在，pH值升高对其电泳速度影响极小，而电渗迁移速度增加，结果使迁移时间略有缩短．而巴比妥和苯巴比妥（pKa₁为7.4）则随pH值升高，其阴离子对中性分子的比例增加，电泳速度的增加超过电渗速度的增加，使总迁移速度降低，因此迁移时间延长．但在pH 9.0时苯巴比妥的迁移时间开始缩短.此外，pH值升高使巴比妥峰形变宽，其与内标物的分离度降低．因此选用pH 7.0的缓冲溶液．

Fig.2The effect of pH on migration time

1—Ephedrine hydrochloride；2—Barbital；

3—Phenobarbital（internal standard）

3.1.3分离电压的选择

在毛细管区带电泳中，迁移时间随工作电压的升高而缩短，这是由于在高电压下，虽然电泳迁移速度和电渗迁移速度均增大，而后者大于前者，因而使组分的总迁移速度变大．但是如果电压过高，则焦耳热严重，使区带展开显著，降低柱效和分离效率，而且还易在毛细管内形成气泡，使分离无法进行．通过实验确定分离电压为9.0 kV．

综上所述，最后确定“2.2.1”项下的电泳条件为最佳分离条件．在此电泳条件下，喘咳宁片中的盐酸麻黄碱、巴比妥和内标物三者均实现基线分离（图3），辅料无任何干扰.而且分离迅速，在9 min内完成一个样品的测定．

Fig.3Electropherogram of the Chuankening Tablets

1—Ephedrine hydrochloride；2—Barbital；

3—Phenobarbital（internal standard)

3.2标准曲线的制定

精密量取对照品储备液1.0、2.0、3.0、5.0、8.0 mL于10 mL量瓶中，加入内标溶液1.0 mL，用甲醇-水稀释至刻度，进样．分别以两组分与内标峰面积之比为纵坐标（Y），以浓度为横坐标（X），经回归处理，得盐酸麻黄碱、巴比妥的回归方程分别为：

Y=2.860 44X-0.024 64，r=0.998 7；

Y=4.727 6X+0.494 87，r=0.996 3．

可见，盐酸麻黄碱在0.17～1.39 mmol/L、巴比妥在0.54～4.16 mmol/L的浓度范围内线性关系良好．

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