摘要：采用一步液液提取反相高效液相色谱法对甘氨酸茶碱钠缓释片（受试制剂）与普通片（参比制剂）在人体内药物动力学行为进行了对比检测，绘制了12名健康男性志愿受试者分别单剂量和多剂量随机交叉口服上述两种制剂后的茶碱血浆浓度-时间曲线并计算主要的药动学参数.经统计检验，两种制剂的AUC无显著性差异.单剂量和多剂量口服甘氨酸茶碱钠缓释片的相对生物利用度分别为(91.7±16.8)%和(107.5±18.6)%.与普通片相比，甘氨酸茶碱钠缓释片的C_max较低，而C_min较高，T_max明显滞后，MRT延长，血药浓度波动幅度显著减小，符合缓释制剂的特点，可较为安全地应用于临床.

分类号：R969.1

Comparative Study of the Pharmacokinetics of Theophylline Sodium Glycinate Sustained-Release Tablets and Conventional Tablets

Yao ZhihongHou JinggangZhang Yifan Li XueqingZhong Dafang

（Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, Shenyang Pharmacetical University, Shenyang 110015）

Abstract：The pharmacokinetics of a new sustained-release Tablet，theophylline sodium glycinate sustained-release tablet (Test formulation) was studied in comparison with that of a conventional tablet，Ganfeilin Tablet (Reference formulation).The theophylline concentrations in plasma were determined by the liquid-liquid extraction-RP-HPLC method with UV detector and the plasma concentration-time curves were plotted after a single oral dose as well as multiple oral doses of a 100 mg sustained-release tablet and 165 mg conventional tablet in 12 Chinese healthy male volunteers according to a randomized 2-way crossover design.The main pharmacokinetic parameters of the two formulations and the relative bioavailability of the sustained-release tablet were obtained.The results of the statistical analysis showed no significant difference between the AUC values of the two formulations.The oral relative bioavailabilities of the sustained-release tablet if compared with the conventional tablet were （91.7±16.8）% for a single dose and （107.5±18.6）% for multiple doses respectively. Compared with the conventional tablet, the sustained-release tablet had lower C_max, higher C_min and prolonged T_max and MRT.The peak to trough fluctuation index(FI) of the sustained-release tablet was less than that of the conventional tablet.The above data demonstrated that the theophylline sodium glycinate sustained-release tablet possessed good characteristics of sustained-release formulation and was fitted to be safely used in clinical treatment.

Key words：theophylline；theophylline sodium glycinate；pharmacokinetics；relative bioavailability；sustained-release tablet；RP-HPLC ▲

茶碱化学名为1,3-二甲基黄嘌呤，具有较强的舒张气管平滑肌作用，是常用的平喘药.据文献报道，茶碱的治疗窗较窄，有效治疗浓度范围为10～20 μg/mL，当体内血药浓度高于20 μg/mL时易产生毒副作用^〔1〕，因此对茶碱进行临床药物监测以控制用药剂量尤其是制备更为安全有效的茶碱缓释制剂一直为人们所关注.关于各种茶碱制剂的药物动力学与人体生物利用度研究国内外虽有许多报道^〔2，3〕，但有关甘氨酸茶碱钠缓释片与普通片相对比的药物动力学研究国内未见报道.甘氨酸茶碱钠缓释片为茶碱的甘氨酸钠盐的缓释片剂，作者以甘氨酸茶碱钠普通片为参比，对其进行药物动力学研究，计算其口服相对生物利用度，并考察其在体内的缓释作用，为临床用药提供依据.

1材料与方法

1.1仪器与试药

高效液相色谱仪：包括LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器和C-R6A积分仪均为日本岛津公司产品.

甘氨酸茶碱钠缓释片（受试制剂）由沈阳华泰药物研究所研制，含茶碱100 mg/片，批号980301；甘非林片（参比制剂，甘氨酸茶碱钠普通片）由丹东制药厂生产，含茶碱165 mg/片，批号960601；茶碱对照品由沈阳药科大学药分研究室提供，含量99.5%；内标多索茶碱由沈阳药科大学药化研究室提供，含量99.0%；甲醇为色谱纯；其它试剂均为分析纯；空白人血浆由沈阳中心血站提供.

茶碱标准系列溶液的配制：精密称取茶碱对照品25.0 mg，用甲醇配成浓度为1 mg/mL的储备液。取该储备液适量，分别用流动相稀释成含茶碱0.4、2.0、5.0、8.0、20.0和40.0 μg/mL的标准系列溶液.

1.2试验对象

选择健康男性志愿受试者12名(年龄20～24岁，体重60～70 kg),签署知情同意书，并于试验前在医院接受包括肝、肾功能和血压及心电图等全面检查，各项指标均正常.试验期间禁忌其它药物、烟酒、茶及任何含咖啡因饮料.

1.3给药方案与样品采集

试验中将12名受试者随机分为两组，遵从两制剂双周期随机交叉自身对照试验设计方案，两周期间隔时间为7 d.

单剂量试验：受试者于试验当日早晨空腹口服被试制剂（T）1片（100 mg）或参比制剂（R）1片（165 mg），于服药前(0 h)和服药后0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36 h分别采取受试者静脉血4 mL，置肝素化试管中，离心(3 500 r/min)15 min，分离血浆，于-20℃保存待测.

多剂量试验：受试者于单剂量试验末次采血后第2 d早晨开始空腹口服被试制剂（T）1片（100 mg）或参比制剂（R）1片（165 mg），早晚各服1次，间隔12 h（注：服药须于早饭前2 h或晚饭后2 h进行）.首次服药后第3～5 d于每晚服药前采取受试者静脉血4 mL以测定其血药谷浓度，第6 d于受试者服药前和服药后0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36 h分别采静脉血4 mL，血样处理同上.

1.4血浆样品的分析方法

作者参考了文献^〔4〕中茶碱血药浓度的测定方法并进行了改进.

色谱条件：色谱柱为日本岛津Shim-pack CLC-ODS C₁₈柱，150 mm×4.6 mm I.D.，粒径5 μm；流动相为甲醇-水(体积比为35∶70)；流速为1.2 mL/min；检测波长为 UV 275 nm；柱温为室温；记录纸纸速为2 mm/min.

血浆样品的测定：取0.2 mL血浆样品置10 mL带塞试管中，加入流动相50 μL、内标溶液(多索茶碱40 μg/mL) 50 μL、0.05 mol/L的磷酸二氢铵缓冲溶液200 μL 及二氯甲烷-异丙醇(体积比为95∶5) 2 mL，涡流30 s，往复振荡10 min，离心10 min(3 500 r/min)，分离有机相并于50℃下氮气吹干. 残余物加500 μL流动相溶解，进样50 μL，记录色谱图. 样品测定当天随行标准曲线和QC样品.

1.5药动学参数的计算与统计分析

本试验根据血药浓度-时间曲线进行参数计算.采用梯形法计算AUC值，以半对数作图法由消除相的末4个浓度点计算t_1/2和K_e.C_max、C_min和T_max采用实测值，并计算Cav、MRT和FI.首先，对所有与浓度有关的参数进行剂量折算，然后对AUC进行对数转换(ln)后采用方差分析，并进行双单侧t检验和(1-2α)置信区间检验^〔6〕，以评价缓释制剂的口服相对生物利用度；对C_max、C_min、C_av和FI进行对数转换(ln)后进行方差分析；对T_max和MRT直接进行方差分析.

2实验结果

2.1分析方法确证

方法的专属性：分别取6名受试者的空白血浆(不加内标)或一定浓度的茶碱标准溶液加入空白血浆、以及健康受试者服药4 h后收集的血浆样品，按“血浆样品的测定”项下操作，得色谱图如图1所示.结果表明，空白血浆中的内源性物质不干扰茶碱的测定.

Fig.1HPLC chromatograms of theophylline

A—Blank plasma sample;B—Plasma sample spiked with theophylline and internal standard;C—Volunteer plasma sample 4 h after a single oral dose of theophylline sodium glycinate sustained-release tablet (100 mg); 1—Theophylline;2—Internal standard

标准曲线的制备：取空白血浆0.2 mL置于10 mL带塞试管中，分别加入茶碱标准系列溶液,配制成相当于浓度为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 μg/mL的血浆样品，按“血浆样品的测定”项下操作，进样50 μL，记录色谱图；以待测物浓度为横坐标、待测物与内标物的峰高比值为纵坐标，用加权最小二乘法^〔5〕进行回归运算，求得直线回归方程即为标准曲线.本方法的线性范<