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供体选择：要求年龄18～50岁，死亡24小时内，无心脏疾患、肿瘤等恶性疾病，无（急性）感染及传染病史。性别不限。年龄越轻、死亡时间越短者，其组织活性越好。
标本采集：取材现场将尸体消毒后，开胸，剪开心包后依次离断上、下腔静脉，左、右肺动、静脉，升主动脉解剖至头臂血管处、主肺动脉至左、右肺动脉分叉处剪断。取出心脏及大血管，用生理盐水冲洗后放在装有生理盐水的双层无菌塑料袋内，再将无菌袋置于4℃冰瓶内迅速运回医院。
制备：材料取回后，立即在手术室无菌条件下修剪，要求保留二尖瓣的前瓣，主、肺动脉瓣环周围组织保留3～5mm。剔除主、肺动脉外膜及其根部脂肪，测定瓣环尺寸，检查瓣叶是否健康。两侧冠状动脉根部保留5mm。修剪过程中要经常用生理盐水保持瓣叶和动脉壁的湿润，避免因干燥而造成组织损害。同时注意避免直接接触瓣膜致瓣膜受损。取部分心肌组织作细菌、霉菌培养和病理检查。准确登记供体性别、年龄、血型、身高、体重及瓣环尺寸，然后将瓣环置入含抗生素的RPMI1640营养液中。室温下孵化、灭菌处理24小时，再取部分营养液进行普通菌、厌氧菌、霉菌培养（阳性者弃之），测定葡萄糖代谢率，以确定瓣膜组织活性。CVH抗生素营养液主要由先锋霉素V、庆大霉素、制霉菌素、1640液组成。
保存：采用液氮冷冻（－196℃）保存。将CVH置入防低温双层塑料袋中，加入营养液、10％胎牛血清、10％二甲基亚砜（DMSO，防冻剂）后密封。先保持4℃平衡15分钟，再置入－80℃冰箱中24小时，最后放入液相液氮罐中，以－1℃／min的速度降温至－196℃保存备用。每个CVH都要用标签注明采集时间、供体年龄、性别、血型、身高、体重及瓣环内径等。
解冻：将CVH自液氮罐中取出后，立即将CVH塑料袋置于40℃无菌生理盐水中快速解冻。解冻后，自塑料袋中取出放入含10％DMSO、10％胎牛血清的42℃RPMI1640液体中漂洗1分钟，再用不含DMSO的上述液体平衡15～30分钟。取部分动脉壁组织作细菌、霉菌、厌氧菌培养和病理检查，在培养液中室温下孵化24小时，以测定葡萄糖代谢率。严格无菌包装后送手术室备用。
葡萄糖代谢率测定：每个标本在液氮冷冻前后均测定葡萄糖代谢率，以测定瓣膜组织的活性。葡萄糖代谢率＝（孵化前营养液葡萄糖含量－孵化24小时后营养液葡萄糖含量）／孵化前营养液葡萄糖含量。
