摘要本专题对方中白芍、吴茱萸、罂粟壳、补骨脂的有效成分进行了定量分析，并对罂粟壳中的可待因进行了定量分析，可待因的含量采用岛津CS-930薄层扫描仪测定，其最佳条件为：在硅胶G薄层板上，氨气饱和20分钟，甲苯-丁酮-甲醇(20：20：3)为展开剂，分离出可待因，喷改良碘化铋钾显色，测定参数为：λs=505纳米，λ_R=600纳米，Sx=3，直线扫描测定含量。本法较简单、快速、准确。

1.定性鉴别

1.1吴茱萸：主要含有挥发油和生物碱，其中包括吴茱萸烯、吴茱萸内脂、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等。

1.1.1样品液及对照液的制备：

1.1.1.1吴茱萸原药材：本品粉末1g，加95%乙醇10ml，加热回流1hr，过滤，滤液浓缩至5ml。供点样用。

1.1.1.2吴茱萸标准药材：本品0.1mg，加95%乙醇10ml，加热回流1hr，过滤，滤液浓缩至3ml。供点样用。

1.1.1.3吴茱萸阴性：取按处方比例配成的吴茱萸阴性粉末6g加95%乙醇20ml，加热回流1hr，过滤，滤液浓缩至6ml，供点样用。

1.1.1.4肉果四神丸：成品研粉6g，加95%乙醇20ml，加热回流1hr，过滤浓缩至6ml，供点样用。

1.1.2薄层层析：

图1吴茱萸薄层层析图谱

硅胶GF₂₅₄

甲苯：丁酮：甲醇(20：20：3)

氨气饱和20分钟

365nm看荧光

1、吴茱萸标准药材

2、吴茱萸原药材

3、吴茱萸阴性对照

4、肉果四神丸

图2吴茱萸薄层层析图谱

硅胶G

氯仿：甲醇：乙酸乙酯

(4：2：0.5)

365nm看荧光

1、吴茱萸标准药材

2、吴茱萸原药材

3、吴茱萸阴性对照

4、肉果四神丸

图3吴茱萸薄层层析图谱

硅胶G

正丁醇-醋酸-水(7：2：1)

365nm看荧光

1、吴茱萸标准药材

2、吴茱萸原药材

3、吴茱萸阴性对照

4、肉果四神丸

1.1.3讨论：从以上薄层层析图谱看出：肉果四神丸与标准药村在相同位置上有相同颜色的荧光点，且肉果四神丸中的点分离较好。

1.2补骨脂：主要含香豆素类成分，有补骨脂内酯，异补骨脂内酯。

1.2.1样品液及对照液的制备:

1.2.1.1分别取补骨脂原药材1g,补骨脂阴性对照6g,肉果四神丸细粉6g,分别加入氯仿10ml,加热回流1hr,过滤,滤液分别浓缩至:5ml,3ml,6ml,供点样用。

1.2.1.2标准溶液:取补骨脂内酯、异补骨脂内酯各5ml,制成每ml含0.1mg的氯仿溶液,作为标准对照液,供点样用。

1.2.2薄层层析:

图4补骨脂薄层层析图谱：

硅胶G

正丁醇-醋酸-水(7：2：1)

365nm看荧光

1、吴茱萸标准药材

2、吴茱萸原药材

3、吴茱萸阴性对照

4、肉果四神丸

1.2.3讨论：肉果四神丸中，在与补骨脂内酯、异补骨脂内酯相同的位置上具有相同颜色的斑点，而阴性对照无，从而可以确定肉果四神丸中有补骨脂存在。

1.3白芍：主要含有芍药甙，牡丹酚、芍药花甙等。

1.3.1样品液及对照液的制备：分别取白芍原药材1g,白芍标准药材0.1mg，白芍阴性对照品6g，肉果四神丸细粉6g，分别加入95%乙醇20ml，浸泡24hr，过滤，浓缩，分别至5ml、3ml、6ml、6ml供点样用。

1.3.2薄层层析

图5白芍薄层层析图谱：

硅胶G

氯仿：甲醇：乙酸乙酯

(4：2：0.5)

茴香醛浓硫酸90℃烤10分钟

1、白芍原药材

2、白芍标准药材

3、肉果四神丸

4、白芍阴性

2.定量分析

2.1罂粟壳：主药，其主要镇痛成分来源于所含生物碱，主要有吗啡、可待因、罂粟碱和那可汀四种，其中吗啡和可待因药理作用明显，并具有毒副作用，所以其用量在临床及制剂中应严格控制。在肉果四神丸中主要对罂粟对罂粟壳中的可待因进行定量。

2.1.1标准溶液制备：精密称取可待因标准品0.0090g,于1ml容量瓶中先加入1滴水使溶，用95%乙醇定容，供点样用。

2.1.2测定波长及参比波长的选定

2.1.2.1薄层层析条件：

A、样品溶液制备：取研细的肉果四神丸6g，加入30ml石油醚，于沙氏提取器中回流6hr，弃去脂溶性成分，药渣先加入6ml10%碳酸钠溶液润湿，再加入少量氯化胺，调pH约8，加入氯仿：异戊醇(3：1)溶剂30ml，浸泡24hr，过滤，取滤液蒸干，用95%乙醇定容于2ml容量瓶中，备用。

B、阴性对照液的制备：取罂粟壳阴性对照品粉末6g，按上述操作，得罂粟壳阴性对照液备用。

C、薄层层析：用微量毛细管于硅胶G薄层板上点样(两点间隔不小于1.5cm)，以甲苯：丁酮：甲醇(20：20：3)为展开剂，上行法展开，取出晾干，喷显色剂，吹干，用玻璃板封严。

2.1.2.2 λs，λ_R的测定：

从吸收图谱可知：肉果四神丸在505nm处有最大吸收，且与可待因标准品相对应，阴性及喷显色剂后的薄层板在505nm处虽有吸收但很小，对于样品测定干扰不大，故可选505nm为测定波长，而在600nm处，各点吸收很小，故可选600nm为参比波长。

2.1.2.3指纹图谱：从指纹图谱中进一步证明样品可以用薄层扫描法测定。

2.1.2.4扫描参数：扫描方法，直线扫描。λs=505nm,λ_R=600nm,灵敏度×2，Sx=3，狭缝1.25×1.25mm,扫描速度20mm/min,纸速20mm/min。

2.1.3标准曲线的绘制：用定量毛细管分别点1，3，5，7，9ul可待因标准溶液于薄层板上，按上述条件展开，显色，扫描测定，得一条直线，回归方程为：y=1.28X+1.28,r=0.9984。

2.1.4样品溶液的测定：采用外标两点法，用定量毛细管点9ul样品溶液于薄层板上，同时点2ul，3ul可待因标准溶液做为参比对照。展开，测定。

2.1.5分析方法评价：回收率试验、稳定性实验均理想。

3.讨论

3.1喷雾显色的均匀性对测定结果影响很大，所以力求喷雾显色均匀。

3.2样品存在干扰可以通过净化的方法解决，但考虑到生产中的实用性问题，故直接测定，测定结果表明此方法准确可靠，而且实用性强。