一、袖套管制备:通常采用聚乙烯和特氟隆二种材料制作,亦可以自制袖套管[2]。我们认为:1.袖套管长度应适当,过短不便操作,过长对管内血流干扰太大。2.袖套管内径尽可能接近或略大于血管外径,为术后大鼠进一步生长发育留有余地。3.袖套管壁尽可能薄但能保持一定硬度,0/5丝线结扎时不致于管腔变形甚或塌陷。4.袖套管的血管外翻侧留下刻痕防止结扎线滑脱,使用前锉平袖套管口,防止锋利边沿刺伤外翻血管壁。5.操作熟练并不需要制作袖套管柄,如有管柄,安装时可分别参照肝右尾叶在肝下下腔静脉最低附着点或胆总管向肝门的走向,便于操作。6.胆管重建普遍采用单管支架法,除支架管长度对胆汁引流有影响外[3],我们发现使用内径为0.8 mm聚乙烯导管的受鼠术后3个月时肝门胆管明显扩张,内有大量胆泥形成,改用1.0 mm导管后未再出现类似情况。
二、灌洗和保存液选择:与临床肝移植有别,实验性肝移植灌洗液和保存液多为同一种液体。按保存效果优劣依次为:UW液、Collins液、乳酸林格氏液、林格氏液和生理盐水。
三、实验动物麻醉:目前采用Methoxyflurane和乙醚二种吸入麻醉剂,由于前者价格昂贵,国内基本使用后者。鼠肝耐受缺氧能力很差,乙醚吸入麻醉不平稳对大鼠呼吸系统干扰很大,可以严重影响供肝质量,其中麻醉诱导是关键环节:首先将大鼠投入2500 ml负压吸引空瓶内,注入乙醚1.5~2.0 ml,加盖,至大鼠四肢瘫软、背部肌肉松驰时取出。乙醚用量过多刺激呼吸道分泌物增加,大鼠出现呼吸浅快而不规则、眼球水肿突出和肝脏呈暗紫色等缺氧表现,甚或呼吸骤停;乙醚用量过少,诱导时间即大鼠在瓶中滞留时间过长,一可以造成总的麻醉时间增加,二是同样可以严重干扰大鼠呼吸功能。这二种因素直接降低了供肝质量。适当的乙醚用量和麻醉诱导时间(1.5~2.0分钟)不仅减少乙醚用量,而且并不一定需要使用阿托品。
四、供肝切取:1.游离肝脏。取上腹部十字形切口,助手提起大鼠左上腹侧后壁,肝脏自然倒向右侧,充分显露左三角韧带,再用血管钳将食道向左侧牵引,显露肝后食道韧带及其血管交通支,同样提起右上腹侧后壁可以清楚显示右三角韧带和右肾上腺静脉丛,游离肝下下腔静脉并将其牵引至右侧,容易将右肾动脉与右肾静脉分离,最后分离肝胃韧带和肝十二指肠韧带,在尽可能少触动肝组织的情况下游离了肝周韧带。2.入肝血管处理顺序。肝动脉未重建型大鼠原位肝移植需结扎切断的血管,按照血流量从小到大顺序是:幽门静脉→脾静脉→肝固有动脉,依照以上次序结扎各血管,可减轻对肝脏的热缺血损伤,有助于提高供肝质量。3.一般采用全身肝素化途径:经肝下下腔静脉、卵巢静脉、阴茎背静脉或尾静脉,在完成肝周韧带游离和前述入肝血管处理后,供肝实际上已处于热缺血期,肝下下腔静脉在以上四支静脉血管中口径最大,容易穿刺并能迅速达到全身肝素化,热缺血时间短有助于提高供肝质量,穿刺点应位于左肾静脉平面以下。4.肝脏原位灌注。用18FG×2″静脉穿刺针在脾静脉开口平面以下穿刺门静脉,退出针芯让静脉血滴出,随即彻底阻断穿刺点离肝侧门静脉血流,然后缓慢注入4℃灌注液5 ml。5.袖套安装应在4℃冰浴中进行,安装完毕再次检查袖套管内血管壁是否扭转,门静脉血管翻转时容易撕裂,我们在前面处理入肝血管时并未紧贴门静脉主干结扎切断脾静脉,而是在距门静脉主干约3.0 mm处用微血管钳临时阻断以便保留该段脾静脉,目的是利用这部分血管将门静脉修剪呈喇叭状,扩大其开口便于外翻。Kamada法安装袖套管是利用一根牵引线经过袖套管腔把血管拖出,我们稍作改进:即直接将微血管镊穿过袖套管腔,从另一端夹住血管壁拖出外翻结扎,操作更简捷。外翻血管壁要齐平,避免不均匀翻转,以免影响受体吻合口质量。具体方法是开始时适当多翻转一些血管壁,然后用血管钳夹住袖套管上提,血管壁自然均衡地回缩至一定长度,最后打结。6.供肝的最后处理。袖套安装完毕,用微血管钳提起肝上下腔静脉膈肌部分,在4℃保存液中上下漂动,各肝叶自然复位,然后从保存液中提出肝脏,放置在已预先平铺好的纱布上,将肝上下腔静脉稍微牵拉一下使得供肝的脏面略微前倾,将鼠肝左尾叶移至左侧显露肝门区以确认门静脉和胆总管是否处于原位,并把胆总管支架管结扎线拖出肝外,将右尾叶右移显露其下的肝下下腔静脉,左右侧纱布交叠包裹,头侧露出肝上下腔静脉,尾侧显露供肝的脏面,重新放入4℃保存液中。若动作熟练,在不到半分钟内即可完成全过程。
