主题词 肝硬化/治疗；肝硬化，实验性/治疗；肝硬化/病理学；汉防已甲素/治疗应用

中国图书资料分类号 R575

汉防已甲素（又称粉防已碱；Tetrandrine;Tet）是从防已科千金藤属植物粉防已（stephania tetrandra S.Moore）的块根中分离出的主要生物碱，其分子式为C₃₃H₄₂N₂O₆，化学结构属于双苄基异喹啉类，现代药理研究证实，Tet是一咱钙离子拮抗剂，主要作用于钙离子通道，影响钙离子的跨膜转运以及细胞内的分布利用，近年来，Tet对肝纤维分的防治作用已渐渐为人闪重视。随着肝脏细胞分离培养技术的建立及分子生物学技术的进步，Tet抗肝纤维化的研究已深入到细胞、亚细胞及分子水平，本文这近年来的有关研究作一综述。

1 Tet对大鼠实验性纤维化的影响

用四氯化碳（CCI₄）诱导大鼠肝纤维化模型，研究Tet对实验性肝纤维化的防治作用。结果显示各期治疗组的大鼠肝组织及血清透明质酸（hyaluronic acid,HA）含量、血清谷丙转氨酶活性（ALT）均低于模型对照组（P＜0.01），3wk时治疗组大鼠肝脏细胞变性、坏死炎细胞浸润程度均显著低于模型对照组。12wk时模型对照组成纤维细胞增生达2.8级，HE及VG染色均示假小叶形成；而治疗组虽有成纤维细胞及胶然后增生，但肝小叶形态完整。表明Tet能显著改善肝功能，减轻肝脏病理损害程度，抑制肝脏细胞外基质形式^[1]。Tet能抑制遥纤维化大鼠组织中储脂细胞（Ito细胞）的增殖转化，使Ⅳ型胶原沉积减少，结蛋白阳性细胞数量少于生理盐水对照组（P＜0.01）。Tet治疗组的Ito细胞数量及Ito细胞和粗面内质网平均面积也较生理盐水对照组减少（P＜0.05）^[2，3]。在肝硬变门脉高压大鼠中，Tet可使肝细胞损害减轻，肝内纤维减少，ALP、碱性磷酶（ALP）和血清的门静脉压力和平均动脉压^[5]。Tet血清Ⅲ型前胶然原肽（procollagenⅢ peptide,PⅢOP）、HA和肝内炎症等均有明显抑制作用，与传统抗及原沉积的抑制则优于秋水仙碱，且该药无明显副作用^[6]。

2 Tet抗肝纤维化的细胞学研究

肝纤维化系由肝结缔组织弥漫增生所致，是多种慢性肝病发展成肝硬变的渐进过程，参与肝纤维化形成的细胞主要有成纤维细胞、Ito细胞、免疫活性细胞、肝细胞、内皮细胞及库普弗细胞等，这此分泌产生胶原等过多的细胞外基质，与细胞成分共同的肝脏沉积，导致肝纤维化。

2.1 Tet对成纤维细胞生长增殖的影响 成纤维细胞能大量合成和分泌胶原蛋白、纤弱连接蛋白（fibronectin,FN）、HA及层连蛋白（laminin,LN）等结缔组织接地基质成分，因此，它的生长增殖对肝纤维化的形成具有不可忽视的作用，采用流式细胞术观察不同浓度的 tet （10、20、30、40、50、60μg/mL）对₃T₆成纤维细胞生长增殖的影响，结果表明Tet能显著延缓细胞G1-S期的进程，抑制S期DNA的含量而增加G1和G2期蛋白质的含量，使细胞呈现不平衡生长直至死亡。此作用遤一定的量效关系。加入外源的Ca²⁺及ATP证明， tet对成纤维细胞生长增殖的作用与阻断Ca²⁺内流无关^[7，8]。也有研究报道， tet （1.0μg/mL）阻止细胞由G1期进入S期，Tet（1.5,2.0μg/mL）则能显著增加₃T₆细胞G2+M期细胞，降低细胞RNA含量，增加细胞蛋白质量，但DNA含量不变，使细胞不平衡生长，从而对其殖产生剂量依赖性的抑制作用^[9]。以³H-脯氨酸掺入量及掺入抑制率为指标，观察Tet对₃T₆成纤维细胞增殖及胶原合成的影响，结果表明，10μg/mL-50μg/mL浓度范围内，以显著抑制₃T₆成纤维的胶原合成，此抑制作用丐浓度成正相关，倒置显微镜下观察发现细胞生长良好，无明显形态改变，表明Tet对细胞增殖及胶原合成的抑制作用非直接杀伤作用，而是在分子水平上起作用^[10]。 tet也可浓度依赖性地抑制胚肺成纤维细胞的增殖及胶原合成，抑制率随时间延长而升高。

2.2 Tet对肝细胞生长增殖的影响 肝细胞为肝脏的实质细胞，占肝脏90%以上，既能合成Ⅰ，Ⅳ型胶原，又能合成疏酸软骨素及HA等基质，在生理条件下，其胶原合成很少，但在某些病理条件下其合成胶原的能力明显增强，在培养的肝细胞中直接加入CCI₄造成损伤模型，观察细胞膜流动性及细胞存活率降低和乳酸脱氢酶的释放，稳定Ca²⁺浓度，保持细胞膜流性，具有保护肝细胞的作用^[11]。采用流式细胞技术检测不同浓度的 tet对大鼠RBL肝细胞生长增殖的影响，结果显示随着 Tet浓度的增加（10、20、30、40、50、60μg/mL）G1-S期的进程加速，且D期DNA含量及G1和G2期蛋白质含量均增加，呈正量效关系，经加入外源性Ca²⁺及ATP证明 tet促进细胞生长增殖的作用与阻断Ca²⁺内流无关，结果提示具有钙通过阻断作用的Tet可促进肝细胞生长增殖^[12]。但也有研究得出不同结论^[10-13]，以³H胸腺嘧啶（³H-TdR）、³H-脯氨酸掺入量及掺入抑制率为指标，研究 tet对人胎肝细胞及大鼠肝细胞DNA及胶原合成的影响，结果显示 10μg/mL-50μg/mL浓度范围内，Tet能明显抑制细胞DAN及胶原合成，抑制程度与浓度呈相关。

2.3 Tet对Ito细胞生长增殖的影响 Ito细胞位于肝窦周围间隙内，其功能是储存和维生素A，此外还要产生结缔组织和基质，现在认为Ito细胞是肝小叶内一种相对不活动的成纤维细胞，在一定的条件下可转化为成纤维细胞，在肝硬变的发生发展中具有重要作用。它是正常及绒纤维化时产生硬变的发生发展中具有重要作用，它是正常及肝纤维时产生胶原的主要细胞。在CCI₄诱导的大鼠肝纤维化模型中，Tet能明显抑制肝组织中Ito细胞的增殖及转化^[2，6]。体外培养的Ito细胞中加往前Tet后，其DN及胶原合成显著受抑，抑制程度与Tet浓度及作用时间成正相关，Tet还可阻断血小板衍生长因子（platelet-derived growth factor;PDGF）的促Ito细胞增殖明亮胶原合成作用，结果提示Tet除直接作用外，还通过抑制PDGF的作用而起到间接的抗肝纤维化作用^[14]。

3 Tet抗肝维化的亚细胞学研究

肝实持细胞富含线粒体（mitochondria,Mc）、微粒体（microsome,Ms）、溶酶体（lysosome,Ls）等细胞器，研究表明，Mc和Ms的作用不再限于能量代谢与蛋白质合成，它们还参与调节胞质损伤、死亡的重要原因，而持续的肝损伤往往会导致肝纤维化，Mc中的单胺氧化酶（monoamine oxidase;MAO）是参与胶原合成代谢的酶，血清中MAO活性升高是反映肝纤维化形成的灵敏指标，N-乙酰β氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-glu-cosaminidase,NAG）则广泛分布于Mc，因参与基质蛋白多糖分解而与肝纤维有关，血清中NAG活力升高，表明基质的合成分解均很活跃，在CCI₄-诱导大鼠模型中的实验说明小剂量Tet能明显降低Mc的MAC和NAG活性，增加Mc对Ca²⁺的主动摄取，减少基被动释放；增加Mc内膜表层和脂双层中心处的流动性及巯基含量（SH）^[10，11]。结果提示小剂量Tet具有良好的Mc保护和纤维纤维化作用，Tet也可增加Ms中的SH含量，降低MS的NAG活性，增加Ms的标志酶-葡萄糖-6、磷酸酶-的活性，对Ms具有良好的保护作用。

4 Tet抗肝纤维的分子生物学研究

体外培养的₃T₆细胞中，以cDNA为探针进行核酸分子杂交^[15]。结果显示Tet能显著降低₃T₆细胞Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型前胸部原mRNA水平（P＜0.05-0.01）。在CCI₄大鼠肝纤维模型中，Tet早期治疗组显著降低了Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型前胶原mRNA水平（P＜0.05-0.01），提示Tet对Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型胶然后基因的表达具有抑制作用是地男女老少水平^[16]。Tet迹可降低肝纤维化时PDGF，PDGF受体β（platelet-derived growth factor receptor,PDGFRβ）及转化生成因子β₁（transforming growth factor,TGFβ₁）的mRNA表达水平，提示Tet可能通过抑制TGFβ₁，PDGJ等肝纤维化相关生长因子的表达而间接抑制胶然后合成^[17，18]。

5 Tet治疗肝硬变和慢性肝临床观察

33例肝硬变患者口服Tet 3mo后，其静脉色氨酸耐量试验明显改善；服药18mo后，血清Ⅲ胶前原肽（procollagenⅢ peptide,PⅢP）含量显著下降（P＜0.01）^[19]。54例肝硬变患者口服Tet治疗后，随访8mo，结果血清HA，PⅢP、肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原与治疗前相比有显著差异（P＜0.05-0.01），与用肝泰乐治疗的对照组比较也有统计学意义（P＜0.01）.Tet治疗组患者肝肾功能也有不同程度改善^[20]。115例慢性肝病患者口服Tet治疗后随访6mo，结果发现：血清HA，PⅢP含量较治疗前显著降低（P＜0.01）；14例（15.4%）肝纤维化消失，54例（58.1%）胶原纤维沉积明显减轻，19例（20.4%）胶原纤维轻度减轻；炎细胞浸润明显减轻或消失，Ito细胞数量减少，与肝泰乐对照组相比有显著差异（P＜0.001）^[14]。结果表达Tet对临床上肝纤维细化的治疗有确实的疗效。

总之，Tet对肝纤维化的防治作用已为实验和临床等各方面所证实，随着对Tet药代动力学、药物配伍、最佳药物剂型及其用药疗程等各方面的深入研究，Tet可望作为一种被广泛应用于临床的抗肝纤维化药物。

6 参考文献

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