佛波酯(TPA)对肿瘤细胞的作用报道不一，显示高度的细胞特异性。我们观察了TPA诱导HL60细胞分化、调亡的作用，以探讨TPA的作用机制。

一、材料和方法

细胞系及其培养：5×10/ml HL60细胞培养于含2.9×10^-4 mol/L TPA的RPMI 1640培养基中，37℃饱和温度，5%CO条件下悬浮培养24，48 h后，分别做Wright染色、四氮唑蓝(NBT)还原试验及酸性非特异酯酶(a-NAE)活性检测。提取TPA作用后HL60细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳。分别取TPA作用后的HL60细胞，70%冷乙醇固定，流式细胞仪(美国FACS-420型)测定。所得数据经Sigle histogram statitics软件处理，计算出凋亡细胞百分数和bcl-2蛋白含量及细胞周期时相的变化。

二、结果

对照组细胞在培养过程中均显示核圆，染色质分散，核仁清晰，胞浆深染，核浆比例大等特点，未见明显的形态学变化。经TPA作用后，部分HL60细胞易贴壁，染色质浓缩变粗，核仁不清或消失，核浆比例变小，核形状不规则，呈肾型、马蹄型等，呈现向单核或巨噬细胞分化的特征。同时可见部分细胞的染色体聚集、断裂、核膜崩解，断裂的染色体形成粗、细不均的颗粒弥散于胞浆中，部分细胞出现核固缩、胞浆出芽、凋亡小体形成等细胞凋亡的形态学改变。TPA作用HL60细胞24 h后，细胞还原NBT的能力和α-NAE活性分别为(48.9±4.26)%和(61.0±1.50)%，与对照组的(8.63±1.49)%和(19.5±6.83)%相比，差异有显著性(P＜0.05)。TPA处理HL60细胞24 h后，可见DNA“梯子(Ladder)”状带纹，随着处理时间的延长，“梯子”状带纹更加明显。而对照组细胞呈阴性，不显示“梯子”状带纹。HL60细胞经TPA处理后，流式细胞仪检测结果显示，凋亡细胞百分数随着处理时间的延长而增大，处理24，48 h时，其凋亡的细胞百分数分别为(15.1±1.31)%和(23.2±3.36)%，与对照组的(4.31±1.23)%相比，差异有显著性(P＜0.05)。而在此过程中，bcl-2蛋白含量无明显变化。流式细胞仪测定TPA作用24，48 h后，HL60细胞处于不同时相的细胞数，与对照组相比，差异无显著性(P＞0.05)。

讨论

HL60细胞系最显著的特征是，在不同的诱导分化剂作用下，可以向成熟的中性粒细胞，或单核和巨噬细胞系方向分化。已知α-NAE是单核和巨噬细胞的标志酶，NBT还原能力增强可作为判定HL60细胞分化成熟的标志。HL60细胞经TPA作用后，α-NAE活性和NBT还原能力均明显增强，再加上形态学的变化，均表明HL60细胞在TPA作用下开始向成熟的单核和巨噬细胞系方向分化。在细胞的两种死亡方式中。细胞凋亡被认为是由基因调控的主动过程。在生物化学上细胞凋亡最主要的变化是一种核酸内切酶被激活，使DNA在核小体间区断裂，在琼脂糖凝胶电泳上表现为核小体大小(180～200 bp)或其整倍数的DNA条带，这是判断细胞凋亡的主要标志之一。本研究结果显示，TPA作用HL60细胞24 h即出现典型的DNA“梯子”状带纹，且随作用时间的延长，“梯子”状带纹更加明显。此结果与流式细胞仪检测结果相一致，即随着TPA作用时间的延长，凋亡细胞的百分数增大。因此本研究结果充分证明，TPA在诱导HL60细胞分化的同时还可诱导其凋亡，但在此过程中与细胞所处细胞周期中的时相无明显相关性。

收稿日期：1999-02-12