关键词： 肝肿瘤癌，肝细胞丙型肝炎抗体，单克隆免疫组织化学

【摘要】目的研究广西肝癌高、中、低危区的癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒(HCV)的表达，探讨HCV在广西肝细胞癌(HCC)病因中的地位。方法用HCV的C区、NS3和NS4区3种单克隆抗体及抗HBsAg抗体进行检测。免疫组化染色用SP法。结果HCC高、中、低危区肝癌中HCV阳性率依次为38.1%(24/63)、37.1%(23/62)和39.0%(30/77)；HBsAg阳性率依次为84.1%、83.8%和84.4%。HCC中HCV感染的总数为77/202(38.1%)，乙型肝炎病毒感染总数为170/202(84.2%)。结论HCC经常伴随乙型肝炎病毒(HBV)感染，但HCV可见于1/3的HCC。在广西肝癌高、中、低发地区，HBV与HCV感染情况无明显差别。

The relationship between hepatocellular carcinoma and hepatitis C virus infection in Guangxi, ChinaDeng Zhuolin, Ma Yun, Li Defu, et al. Guangxi Medical University, Nanning 530021

【Abstract】ObjectiveTo study the significance of HCV infection as a risk factor for hepatocellular carcinoma (HCC) in Guangxi. MethodsMonoclonal antibodies against the core, NS3 and NS4 region of HCV, and anti-HBsAg antibody were used for immunohistochemical staining. ResultsThe frequency of HCV infection from regions with high, intermediate and low prevalence of HCC was 24/63(38.1%), 23/62 (37.1%) and 30/77(39.0%), respectively, while that of HBsAg was 84.1%, 83.8% and 84.4%, respectively. The overall positive rate of HCV infection was 77/202 (38.1%), and of HBV infection was 170/202 (84.2%). ConclusionWhile HBV infection frequently accompanies HCC, HCV infection is present in more than 1/3 of HCC. This is generally the case regardless of geographical difference in HCC prevalence.

【Subject words】Liver neoplasmsCarcinoma, hepatocellularHepatitis CAntibodies, monocloneImmunohistochemistry

自从Choo等^［1］从非A非B型肝炎中成功克隆出丙型肝炎病毒(HCV)基因组之后，已经用其抗原成分建立起血清学和免疫组织化学诊断方法，发现过去所谓非A非B型肝炎中绝大部分(80%以上)属于丙型肝炎，并且在日本和意大利等丙型肝炎高发国家，已经证明HCV与肝癌密切相关。广西是我国肝细胞癌(HCC)高发区。癌症多病因学说已被广泛接受，因此我们继黄曲霉毒素(AFB₁)和HBsAg的研究^［2］之后，进一步采用免疫组织化学方法研究了HCC及癌旁肝组织中HCV的表达，现将结果报告如下。

材料与方法

在广西境内，按肝癌死亡率高、中、低分3个地理区域，收集HCC外科手术切除标本202例：(1)省会南宁以西的西部地区属肝癌高发区，年平均死亡率在30/10万以上，收集标本63例。(2)南宁以东的东南部属中等高发区，HCC年平均死亡率约20～29/10万，收集标本62例。(3)东北部桂林、柳州地区为相对低发区，HCC年平均死亡率一般在19/10万以下，收集标本77例。标本为癌及癌旁肝组织，经福尔马林固定，石蜡包埋，平均面积约1 cm²。切片经常规脱蜡、水化后进行免疫组化SP染色。3种抗HCV不同区域的单克隆抗体(包括抗核蛋白区抗体、抗非结构区NS3和NS4区的抗体)由北京中国药品生物制品检定所研制，加一抗前的切片经微波抗原修复和胰酶消化处理。抗HBsAg一抗和SP试剂盒为Maxim产品，染色步骤按试剂盒说明书操作。DAB显色。空白对照用磷酸盐缓冲液替代一抗。

结果

HCV阳性结果的判断需反复比较做出决定。其要点是肝细胞浆中出现密集的细颗粒状棕色物质，而对照染色则无这种物质出现。本研究3种抗HCV的抗体染色结果基本一致，只在染色强度上略有区别。3种抗体染色结果互相补充，有助于对结果的最终判断。HBsAg阳性物质染色较深，且常有界限膜包绕，结果易于判断。

HCV阳性物质的分布特点：散布于整个肝细胞胞浆，或占据核周围胞浆，环绕胞核；或位于胞膜侧，使胞膜增厚易误为膜型，但实际上是抗原边集，高倍镜下可见膜的内侧呈花边形棕色颗粒状。有时阳性物质团集位于核的一侧胞浆内，境界较清晰，但无明显界限膜，不似包含体。阳性细胞可成片占据整个变形的肝小叶，更常见的是散在分布于肝小叶内，倾向于小叶边缘靠近炎细胞处。位于炎症间质中的死残肝细胞累积抗原多，染色最深。常常只有少数肝小叶内有阳性细胞分布，而且这些阳性的肝小叶有聚集在一起的倾向，另外一些小叶则全部阴性，故有可能使肝穿刺得出假阴性结果。癌细胞中亦常见阳性抗原物质分布，但较癌旁组织中稀少且淡染，可能是因HCV的积累需时日，而癌细胞代谢过快，因而缺乏足够数量的积累。抗原主要位于胞浆而不见于胞核，但当核内有胞浆包含物时，可有阳性HCV染色。Kuffer细胞和胆管上皮细胞阴性，但假胆管上皮可呈阳性，可见HCV主要在肝细胞中复制。此外还必须排除假阳性，最常见的假阳性为“边缘现象”，常见于切片边缘处，染色强度由外向内渐减，缺乏细颗粒状特征，而且不会在3种抗体染色中同时出现。

本组标本中，广西西部高发区63例，HCV阳性24例，占38.1%；HBsAg阳性53例，占84.1%。广西东南部中等高发区62例，HCV阳性23例，占37.1%；HBsAg阳性52例，占83.8%。广西东北部相对低发区77例，HCV阳性30例，占39.0%；HBsAg阳性65例，占84.4%。以上共计HCV阳性77例，总阳性率为38.1%；HBsAg阳性170例，总阳性率为84.2%。HCC年死亡率不同的地区，HCV及HBsAg阳性率却相同。

讨论

广西历年恶性肿瘤死亡率普查资料表明，肝癌始终居癌症死亡率之首，且还有上升趋势。我国70年代和90年代两次全国性死亡原因调查资料^［3］显示，肝癌上升38.8%，仅次于肺癌，而其中广西增长的幅度最大，为全国第一。肝癌的主要病因，一个是黄曲霉毒素高污染，另一个是乙型肝炎病毒感染。但现在由于预防接种和居住条件的改善，在日本，乙型肝炎已不是肝癌的主要危险因素^［4］。据文献^［5］报道，近年来日本丙型肝炎问题较突出，80%以上的HCC患者体内发现HCV-RNA，每年有5%～7%的HCV-RNA阳性肝硬化患者发生HCC^［5］。目前对广西HCC患者感染HCV的情况尚未有适当估计。Yuan等^［6］1996年检测广西39例HCC，血清样品中HCV抗原全部阴性，认为广西是丙型肝炎低流行区；Okuno等^［7］1994年报道广西186例HCC中，有10例(5.4%)抗HCV抗体阳性；而同年张振全等^［8］检测78例HCC患者，其HCV阳性率为33.3%。上述作者均是用Elisa法检测患者血清中抗HCV抗体，时间、地点近同，而检出率相差甚大。为此，我们与中国药品生物制品检定所协作，取同期、同地标本，用多种单克隆抗体直接检查HCC患者肝中HCV抗原的表达。首批150例标本在北京进行检测，HCV阳性率为15.1%^［9］。本研究中202例标本，是按HCC高、中、低危区重新收集的，为避免因肝组织过少产生假阴性，剔除了癌旁肝过少和无癌旁肝的病例。结果显示，HCV阳性77例，总阳性率高达38.1%。再次肯定广西有相当一部分HCC与HCV相关，而且所占比率高于以往报道。应该指出的是，HCC患者血清中出现抗HCV抗体并不代表有活动的HCV感染，但在肝中检出HCV抗原，则能表示HCV复制。本组HCC患者中38.1%的HCV感染率在世界上属于中等偏高水平^［10］。此外，本组HBsAg阳性率为84.2%，有HCV或HBV一种以上病毒感染者占89.1%(180/202)。

有必要说明的是，广西HCC高、中、低危区HCV阳性率十分接近，最高与最低之间相差不过2%，其分布特点，与在广西各地检测HCC中HBsAg情况一样，地区之间亦无差别^［2］。但这不能表明B与C两种肝炎病毒与HCC高发无关，而应肯定其是HCC高发的重要因素，只是若在此基础上再加上AFB₁污染的因素，则HCC的发病率将更加突出。

参考文献

1Choo QL, Kuo G, Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a bloodborne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science, 1989, 244: 359-362.

2邓卓霖，潘朗星，马韵，等. 广西黄曲霉毒素高危区肝癌p53基因序列改变. 中华肿瘤杂志，1997，19： 18-21.

3李连弟，鲁凤珠，张思维，等. 中国恶性肿瘤死亡率20年变化趋势和近期预测分析. 中华肿瘤杂志，1997，19：3-9.

4Okuda K. Hepatocellular carcinomas associated with hepatitis B and C virus infections. Hepatology, 1995, 22:1883-1886.

5Arase Y, Ikeda K, Murashima N, et al. The long tenm efficacy of glycyrrhizin in chronic hepatitis C patients. Cancer, 1997, 79: 1494-1496.

6Yuan JM, Govindarajan S, Henderson BE, et al. Low prevalence of hepatitis C infection in hepatocellular carcinoma cases and population controls in Guangxi, a hyperendemic region for HCC in the People′s Republic of China. Brit J Cancer, 1996, 74: 491-494.

7Okuno H, Xie ZC, Lu BY, et al. A low prevalence of antihepatitis C virus an