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材料与方法共收集43例女性结肠癌及癌周组织标本(距肿瘤5 cm以上)，其中30例为外科手术标本，13例为肠镜下活检标本。方法：(1)组织DNA的提取是采用蛋白酶K消化，酚-氯抽提的方法。(2)标本PGK杂合子的鉴定是利用限制性内切酶BstXI消化，以标本DNA为模板扩增PGK基因产物的方法，即出现一条带(566 bp或734 bp)者为纯合子；出现两条带者为杂合子。(3)组织PGK基因的克隆性鉴定是首先用限制性内切酶HapⅡ消化癌及非癌组织DNA，消化降解显性PGK基因，然后PCR扩增，扩增产物经BstXI酶切消化，以DNA条带的大小及数量确定其克隆性。
结果(1)PGK基因杂合子鉴定：43例标本中20例为杂合子(即出现两条DNA带)。(2)病理所见：20例杂合女性结肠癌标本，术前7例行肠镜下活检，3例中度不典型增生(其中2例不除外腺癌)，3例腺癌，1例慢性炎症，阳性诊断率为71%，这7例活检标本手术后病理证实均为结肠癌(其中1例高分化腺癌伴有明显的淋巴细胞浸润)。13例手术标本4例为中分化腺癌；3例为低分化腺癌，6例为高分化腺癌(其中1例伴有明显的淋巴细胞浸润)。(3)克隆性鉴定：20例癌周组织标本均为两条DNA条带，即呈多克隆性。20例结肠癌中，18例出现单一的DNA条带，呈单克隆性；2例高分化腺癌伴明显淋巴细胞浸润，样品为两条DNA条带，呈多克隆性。阳性诊断率为90%。
讨论有关结肠癌致癌基因、抑癌基因及错配修补基因的异常改变用于肿瘤分子学诊断的报道较多，然而仅用这些方法，对于结肠癌的诊断有其局限性。近年来国外学者报道了通过X染色体上PGK基因的RFLP，分析该基因不同的甲基化形式，判断人类肿瘤的克隆性。
正常组织细胞中，两个PGK等位基因在不同细胞中随机呈现显性或隐性，因此用该方法鉴定PGK基因为多克隆性，即检查结果为两条DNA带；相反恶性肿瘤是由一个癌变细胞无限增殖形成的，其PGK基因的显性或隐性形式只有一种，即表现为单克隆性，凝胶电泳后出现一条DNA带。而男性和纯合女性双酶切后均出现相同DNA条带，不适用此检测方法。
本研究中43例结肠癌标本PGK杂合子的比例(47%)与国外发表的数据相符。将克隆性检测结果(阳性率90%)与病理学结果(肠镜活检阳性率71%)进行对比，该检查方法阳性率高于肠镜下病理学诊断，可以补充病理学诊断的不足，为确诊结肠癌提供可靠的依据。分析PGK基因的甲基化类型，有助于判断结肠肿瘤的良恶性，因可利用活检标本，所需组织量少，故该方法可用于癌症的早期诊断，为恶性肿瘤的临床诊断提供一种新的分子生物学诊断方法。
(收稿：1997-11-27修回：1998-02-24)
