胰岛素样生长因子I(Insulin－like Growth factor－1,简称IGF－1)是胚胎发育期中枢神经系统重要的生长调控因子，具有类似生长激素和胰岛素的刺激组织生长发育、细胞有丝分裂等作用。胚胎期所需的高水平IGF－1于出生后迅速下降。成年后机体所需IGF－1主要由肝脏合成，由血液运送，完成类似生长激素与胰岛素的功能。近年发现，鼠胶质母细胞瘤C6细胞中高表达的IGF－ 1与其自身存在的IGF受体形成自分泌环，刺激肿瘤细胞的生长，而以IGF－1反义RNA技术处理瘤细胞系又取得明显抑瘤效果，因而有必要检测人脑肿瘤组织中IGF－ 1表达状况，以探索其与肿瘤发生的关系并为针对IGF－1的基因治疗提供实验依据，目前国内外尚未见报道。

1材料与方法

1.1标本取材与制备

78例颅内肿瘤及8例正常脑组织标本包括胶质瘤40例：其中Ⅰ级4例；Ⅱ级9例；间变型星形细胞瘤Ⅲ级10例；胶质母细胞瘤15例，髓母细胞瘤2例。脑膜瘤38例均 属Ⅰ级。异硫氰酸胍－有机溶剂法提取所有标本组织总RNA；对其中53例颅内肿瘤及8例正常脑组织标本行免疫组化研究；对其中5例颅内肿瘤及1例正常脑标本在单去污剂裂解液存在下提取组织蛋白，用于Western分析。

1.2Northern印迹杂交

IGF－1cDNA探针获自质粒Cvn－IGF－1（美国Renato Baserga博士馈赠）。β－actin片段由上海肿瘤研究所提供。30μg组织总RNA先经甲醛固定的0.9％琼脂糖凝胶电泳，再以虹吸印迹法转至NC膜。分别以50μCi、100μCi－α³²P－dCTP经 promega随机引物标记药盒用于标记25ngβ－actin、50ngIGF－1 cDNA探针，杂交炉中65℃预杂交4小时，68℃杂交18小时，同富士底片压于暗盒，置－70℃放射自显影，1周观察结果并洗膜，以β－actin为内对照同上法进行2次杂交。

1.3免疫组织化学染色

冰冻切片经0.3％H₂O₂处理灭活内源性过氧化物酶及羊血清封闭非特异性抗原后，加入1:200的IGF－1单克隆抗 体（NIH,USA）4℃过夜，次日用生物素化抗鼠IgG及亲和素－生物素过氧化物复合物染色（ABCKit北京中山公司）。

1.4Western杂交

15％PAGE－SDS蛋白凝胶垂直板电泳，电转仪100V1小时将蛋白转移至硝酸纤维素膜上，切下蛋白分子标准 (GIBCO)进行氨基黑染色，其余部分5％BSA封闭1小时，IGF－1单抗(1:1000)杂交过夜，抗鼠－碱磷酶Ⅱ抗5小时，BCIP－ NBT染色。鼠肌动蛋白单抗为内对照。

2结果

2.1IGF－1mRNA表达

78例颅内肿瘤与8例正常脑组织中所提取的RNA经电泳后，均呈现出清晰的5S,18S,28S条带。脑肿瘤均有1.0kb与 1.3kb的IGF－1mRNA表达，而正常脑组织几无表达，经统计学处理发现胶质瘤表达水平明显高于Ⅰ级脑膜瘤，且高恶度胶质瘤表达水平极明显高于低恶度者，但 Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤之间无显著差异。

2.2IGF－1蛋白表达

高倍镜下观察IGF－1免疫组化染色结果，可见阴性对照无棕染；正常脑组织几无阳性细胞，脑肿瘤中IGF－ 1阳性细胞率极明显高于正常脑组织，脑肿瘤IGF－1阳性细胞率与病理分级呈正相关(r=0.88,P＜0.01)。Ⅰ级脑膜瘤与低恶度胶质瘤IGF－1的阳性细胞率无明显差别； Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤之间阳性细胞率存在显著差异。对部分标本的Western杂交分析显示脑组织中IGF－1约7.5kD，可初步看出其表达水平随脑肿瘤恶性程度升高而增高，与免疫组化结果相符。

3小结

近年研究发现：1)IGF－1与c－myc等原癌基因具有高度同源性；2)IGF－1可促进体外培养的人脑胶质瘤和脑膜瘤细胞系的生长；3)人小细胞肺癌、乳腺癌等肿瘤细 胞中IGF－1表达异常升高；4)Trojan等利用反义IGF－1技术成功抑制了鼠C6脑胶质瘤在动物体内的生长，因而推 测IGF－1的异常表达与人脑肿瘤的发生发展密切相关。

本研究证实：IGF－1在正常脑组织几无表达；胶质瘤表达强于良性脑膜瘤；高恶度胶质瘤表达极明显高于低恶度胶质瘤；IGF－1表达随脑肿瘤恶性程度增高而升高。目前，Trojan等已利用反义IGF－1技术成功抑制了胶质母细胞瘤在大鼠体内的发生、肿瘤切除后复发并能使已存在的肿瘤消除，从而揭示了广阔的实用前景，本研究无疑为该技术应用于临床提供了理 论依据。

(李雅玲校对)

(1999－04－27收稿)