摘要：目的：探讨Hp与胃腺癌的相关性,特别是cagA因子与胃腺癌的相关性。方法：利用血抗Hp－IgG、RUT、PCR-Hp－DNA3种方法检测270例病人耳垂血或胃粘膜活检组织中的Hp及其cagA基因。结果：Hp感染率为68.52％（无性别差异），cagA^＋Hp感染率为54.73％（男性64.00％＞女性41.94％,P＜0.05）。cagA^＋Hp致胃炎程度及活动性均较cagA^－Hp及Hp-者高（P＜0.05）；男性感染cagA^＋Hp更易发展为CAG、IM（P＜0.05）；感染Hp者胃腺癌的分化程度低，且向周围浸润及淋巴结转移的能力强（P＜0.05）,但与cagA因子无关（P＞0.05）；非贲门腺癌患者血抗Hp－IgG抗体阳性率为76.32％，大于贲门癌（52.90％）（P＜0.05）。结论：Hp感染与胃腺癌发生、发展相关；cagA因子可能为胃腺癌，特别是男性胃腺癌的致癌因子之一，主要作用于胃腺癌发生的早期阶段。

分类号：R735.2文献标识码：A

文章编号：1000－467X(2000)03－0226－04

The relationship between Helicobacter pylori, its cagA factor and the gastric adenocarcinoma

CHEN Yi－guiCHEN Yu－liWU Tinget al.

（Department of Gastroenterology, The First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350005,P.R.China）

Abstract：Objective： To investigate the relationship between Helicobacter pylori (Hp), especially its cagA factor, and the gastric adenocarcinoma (GAC). Methods：The Hp in gastric biopsy specimens from 270 patients with chronic gastritis or GAC, were detected by PCR，the serum anti－Hp－IgG detection and RUT while cagA gene expression was detected by PCR. Results：The infection rate of Hp was 68.52％ without difference between sex, while of cagA＋ Hp strains infection it was 54.73％ (64.00％ in male patients, 41.94％ in female patients, P＜0.05). The inflammatory index and activity in gastric mucosa induced by cagA＋ Hp strains were higher than that induced by cagA－ Hp strains or that without Hp infection (P＜ 0.05). The prevalence of chronic atrophic gastritis (CAG) or intestinal metaplasia(IM) was higher in the male patients infected with cagA＋ Hp strains than that infected with cagA－ Hp or uninfected with Hp (P＜ 0.05). The GAC infected with Hp had lower differentiation, more noncardiac adenocarcinomas, and higher invasive or lymph node metastatic abilities than that without Hp infection (P＜ 0.05), but not correlated with the cagA factor (P＞0.05). Conclusions： The infection of Hp is correlated with the genesis of GAC, that influence the development of GAC via non－cagA pathways. The cagA factor may be a carcinogenic factor of GAC, especially in the male GAC, and may play a role in the early stage of gastric carcinogenesis.

Key words：Helicobacter pylori(Hp)/Genotype; CagA gene; Stomach neoplasms/Etiology▲

近年来大量研究表明幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染与人胃癌发生相关，特别是与非贲门肠型腺癌发生相关，并认为其可能作用于胃癌发生的起始阶段，是胃癌发生的“启动子”之一[1～3]。1994年WHO/IARC会议确定Hp作为一类致癌原，为胃腺癌较明确的致癌原之一^[4]。

细胞毒素相关蛋白(Cytotoxin associated protein,CagA，其基因为cytotoxin-associated geneA,cagA)为Hp重要的毒力因子。许多研究发现：CagA与胃粘膜萎缩及肠化密切相关^[5]；感染CagA^＋Hp株的患者发展为胃腺癌的危险性比感染CagA^－Hp及Hp－的患者高^[6]。故多数学者认为CagA可作为Hp重要的毒力因子，并认为此因子与胃腺癌发生相关，可能是致癌因子之一。

胃癌(Gastric Carcinoma，GC)是严重危害人类健康最常见的恶性肿瘤之一，而福州地区又是胃癌高发区之一。已有足够的流行病学和病理学证据表明，慢性浅表性胃炎(Chronic superficial gastritis，CSG)→慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis，CAG)→伴肠化(Intestinal metaplasia，IM)→伴不典型增生(Dysplasia，Dys)→胃腺癌（Gastric Adenocarcinoma,GAC),为胃腺癌、特别是肠型胃腺癌发生的演变过程。

本课题通过检测福州地区胃腺癌演化系列患者胃粘膜中的Hp及其cagA基因,来探讨Hp及其cagA因子与胃腺癌的相关性。

1对象与方法

1.1研究对象与标本收集

1.1.1对象：随机选择1998年2月～6月来我院接受胃镜检查及行胃腺癌切除术的福州地区患者（近4周未服抗Hp药物者）共270例，其中男160例，女110例，年龄17～76岁，平均46±18岁。

1.1.2标本收集：每例受检者采耳垂血一滴，滴于抗Hp-IgG快速测试条上；胃镜检查时在胃窦距幽门3cm以内活检二块胃粘膜组织，一块即刻行RUT检测，另一块送于－70℃冰箱保存，备用于PCR-Hp-DNA检测。

1.2方法

1.2.1抗Hp-IgG检测：选用美国赠送以斑点金免疫渗滤试验(Dot Immunogold Filtration Assay,DIGFA)原理制成的抗Hp^－IgG快速测试条，采耳垂血一滴，即刻滴于抗Hp^－IgG快速测试条上，阳性反应为试条上出现红色指示带，阴性则无显色反应。

1.2.2RUT：采用三明三强公司HpUT－H104试剂盒(分析化学法)，活检组织置于试剂板中观察，5分钟以内显黄至棕黄色则为阳性，不变色为阴性。

1.2.3PCR-Hp-16SrRNA基因：采用上海永朋(分子生物制剂)公司的HP基因检测试剂盒，引物序列为：CP-1：5’-GCG CAA TCA GCG TCA GGT AATG-3’，CP-2：5’-GCT AAG AGA TCA GCC TAT GTC C-3’，扩增片段500bp^[7]。取冷藏胃粘膜标本，加入100μl裂解液，混匀，加入10mg/ml蛋白酶K4μl，55℃水浴1小时，取出后再沸水浴5分钟，离心(15000r/min)5分钟，取上清液10μl做模板。采用25μl扩增体系，扩增反应在Perkin－Elmer公司的PE9600仪上进行：93℃4分钟，而后93℃30秒→50℃30秒→72℃60秒,循环35次，最后72℃5分钟，扩增产物以2％琼脂糖凝胶电泳，在紫外透射仪下检测，出现与阳性对照同一位置的明显条带则为阳性。每次扩增时设阳性对照、阴性对照及空白对照。

1.2.4PCR-Hp-cagA^[8]：设计引物序列为：F1：5'-GAT AAC AGG CAA GCT TTT GAG G-3',B1：5'-CTG CAA AAG ATT GTT TGG CAG A-3'（由上海植物生理研究所合成）,扩增产物349bp，扩增条件为：95℃5分钟，而后95℃1分钟→55℃1分钟→72℃1分钟，循环35次，最后72℃5分钟。其余同PCR-Hp-16SrRNA基因。

1.2.5诊断Hp感染（Hp现症感染或Hp＋）标准：抗Hp-IgG、RUT、PCR-Hp-16SrRNA基因三项检测中二项及以上阳性，则诊断Hp＋，三项均阴性诊断Hp－，单项阳性者剔出本试验。

1.2.5病理分组：根据病理结果，选出胃腺癌演化系列病例参与本试验，其余剔出本试验。

1.2.6标本分类、分组：根据Hp及cagA检测结果，将标本分为cagA^＋Hp、cagA^－Hp、Hp-3大类；结合病理分组将标本共分为3类5组。选出标本共216例。

1.2.7炎症程度(Inflammation Indexes,II)及炎症活动度（Inflammation Activity,IA）评分：对入选的慢性胃炎，按照1990年悉尼系统分类法，对胃炎的炎症程度及活动度评分：1).炎症程度积分(II)计算方法：无炎症为0分,轻度为1分,中度为2分,重度为3分；2).炎症活动度(IA)指活动性胃炎占同组胃炎的百分比。

统计学处理：所有数据统计用统计学软件包SPSS8.0版统计。率的比较用χ²检验或Fisher's精确检验；均数以±s表示；不配对非参数检验，两组间比较用Mann Whitney U检验，大于两组间比较用Fisher’s Protected Least检验；相关分析用Spearman’s相关分析。取P＜0.05为差异有显著性．

2结果

2.1福州地区胃癌演化系列患者Hp、cagA^＋Hp感染情况及其性别差异

福州地区总Hp感染率为68.25％，无性别差异（男66.13％,女71.26％,P＜0.05）．单指标血抗Hp-IgG阳性率为81.48%（220／270）；胃腺癌演化系列中，Hp感染率在CAG阶段以前是女性高于男性（P＜0.05），到CAG阶段两者相似，CAG阶段以后是男性高于女性；神州地区总cagA⁺Hp感染率为54.17%，男性高于女性（男63.41%，女41.94%，P＜0.05）．cagA⁺Hp感染率从CSG（中度）阶段起一直为男性高于女性（P＜0.05），感染高峰男性是在CAG、IM阶段，女性在CSG（中度）阶段略高，其他阶段稳定在低水平．Dys组因例数太少统计学意义不明显（见表1）．

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