中图分类号：R733.75文献标识码：A

文章编号：1000－467X(1999)04－0451－01

真核细胞核内的核基质结构和功能复杂,已知核基质的功能与细胞的分化、增殖等生命活动过程有关,且与细胞的癌变和凋亡有关^[1]，我们比较了肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡前及凋亡过程核基质蛋白的改变,并分析了核基质蛋白在K562细胞凋亡过程的可能作用及其意义。

1材料与方法

1.1K562细胞的培养

K562细胞为本实验室冻存复苏,细胞培养用含10％小牛血清的RPMI1640液。

1.2肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡

参照文献Voelkd－Johnson等^[2]介绍的方法,用还原反应测定肿瘤细胞存活率,细胞DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳按常规方法进行,细胞形态学观察凋亡细胞。

1.3细胞核基质蛋白的提取

用肿瘤坏死因子前及用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡过程细胞核基质蛋白的提取按照Fey^[3]等介绍的方法。

1.4SDS－PAGE电泳

每个样品用10μg进行SDS－PAGE电泳,胶用银染色。

2结果

用肿瘤坏死因子前及用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡过程核基质蛋白的电泳结果见图1。

图1A：标准分子量；

B：K562细胞凋亡前核基质蛋白的电泳结果

C：K562细胞凋亡过程核基质蛋白的电泳结果

通过图1比较用肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡前及凋亡过程核基质的改变,主要表现为核基质蛋白在分子量为25、26、35、97.4Kd区带的蛋白质的消失,分子量为40、42、55、60、68Kd区带的蛋白量减少。

3讨论

肿瘤坏死因子是由激活的巨噬、单核细胞产生的具有抑制肿瘤、抗感染和调节机体免疫功能的细胞因子,肿瘤坏死因子通过增加细胞内Ca2＋浓度和DNA的断裂来诱导细胞的凋亡,K562细胞株对肿瘤坏死因子是敏感的^[4]。核基质(NuclearMatrix)或称核骨架(NuclearSkeleton)是指细胞核内除核膜、Lemina、染色质与核仁以外存在的精密网架体系,核基质的成分复杂,已测定核基质中,蛋白质占98％以上,主要是非组蛋白的不溶性纤维蛋白^[5],核基质不仅提供了DNA超螺旋袢附着点,而且与DNA的转录、复制过程是不可分割的,核基质的成分与细胞的分化、癌细胞的发生有密切关系,并参与了肿瘤细胞的凋亡过程^[1]。K562细胞是具有急性红白血病特性的细胞株,由本实验结果可以看出,在肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡过程中,分子量为25、26、35、97.4Kd区带的蛋白质的消失,分子量为40、42、55、60、68Kd区带的蛋白量减少,提示分子量为25、26、35、97.4、40、42、55、60、68Kd区带的核基质蛋白质与肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡有关系,K562细胞核基质蛋白参与了肿瘤坏死因子诱导的K562细胞的凋亡过程,这些分子量的核基质蛋白可能与K562细胞的凋亡基因的抑制有关,对这些分子量的核基质蛋白功能的进一步研究,有助于了解肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡的机制。

基金项目：国家自然科学基金资助课题(39870327)

参考文献

1Monique MFJ,Marie－Helere JH,Guul PM,et al.Alterations in cytosketal and nuclear matrix－associated proteins during apoptosis[J] .European Journal of Cell Biology,1995,68：35～46.

2Voelkd－Johnson C,Entingh AJ,Wold WSM， et al.Activation of intracellular proteuses is an early event in TNF－induced apoptosis[J] .J Immunal,1995,154：1707～1716.

3Fey EG,Penman S.Nuclear matrix proteins reflect cell type of origin in cultured human cells[J] .Proc Natl Acad Aci USA,1988,85：121～125.

4李龙,罗绍凯,张国材，等.重组人TNF介导白血病细胞程序性死亡及其临床意义[J].癌症，1998,17(3)：175

5Stuurman N, Meijne AML, Vanderpol AJ,et al.The nuclear matrix from cells of different origin [J] . The J of Biol Chemistry， 1990,265：5460～5465.

收稿日期：1998－09－01；修回日期：1999－01－19