第四军医大学学报1999年第20卷第10期

管文贤李开宗高昌俊王铁鹏王德盛

摘要目的： 探讨大鼠原位肝移植术的围手术期处理.方法： 通过改良的双袖套法施行大鼠原位肝移植试验观察受术大鼠状况、手术操作技巧和术前术后处理等因素对肝移植大鼠的成活率的影响.结果： ①用改良的双袖套法施行的30例大鼠原位肝移植中，24 h存活率93%，1 wk存活率90%；②以UW液保存SD大鼠肝脏18 h后施行的15例原位肝移植中，无1例长期生存；③以UW液保存Wistar大鼠肝脏18 h后施行的7例原位肝移植中，1 wk存活率达86%，另1例死于手术并发症.结论： 大鼠的体质量、品系、性别、术前状态和精细的手术操作及管理是决定大鼠原位肝移植成败的关键因素.本研究中的许多改良能有效保障大鼠肝移植模型的稳定性.

关键词：大鼠肝移植动物模型

0引言

大鼠原位肝移植是研究肝脏保存、移植免疫等课题的重要手段.自Kamada等^［1］， Miyata等^［2］采用袖套法成功地确立这一技术以来，国内外不少单位相继复制成功该动物模型，然而因手术难度大、围手术期处理复杂，现有报道多数仅从原则上描述其手术的基本方法，而对围手术期处理的技巧缺乏介绍，使该技术不能普遍推广应用.我们1998-02～09成功地复制了大鼠原位肝移植模型，实践中体会到完善的围手术期处理是提高肝移植术成功率的关键因素.

1材料和方法

1.1材料采用健康SD和Wistar大鼠(购自本校实验动物中心和陕西省中医研究院)，雄性为主，体质量160 g～230 g，按文献自制血管套管和胆管支架. 供、受体术前禁食14 h，自由饮水，受体术前肌注阿托品0.03 mg，乙醚吸入麻醉，以橡皮筋仰卧位固定四肢，清洁手术.

1.2方法在Kamada双袖套法的基础上，据预试验结果进行下列改进.严格筛选大鼠，确保供受体体质量相近，并排除呼吸道感染；尽可能缩短供肝胆管长度，胆管支架插至尾状叶胆管汇合处即可；先经腹主动脉插管，以0～4℃肝素平衡盐液作持续灌注，尔后游离肝脏；供肝血管套管时将血管断端浸入液体内进行，并尽可能缩短肝下腔静脉和门静脉的长度；受体手术取上腹部正中切口配合使用自制拉钩，将双肋牵向外上方，后背垫一直径约1.5 cm园柱形腰桥，便于上下滚动显露肝上、肝下腹腔；为防止术后出血结扎受体肝下下腔静脉壁后组织，并保留缝线；阻断受体入肝血流前，从阴茎背静脉补充平衡盐液2 mL～3 mL；阻断肝上下腔静脉时适当钳夹膈肌；按肝上、肝下顺序切除受体肝脏；吻合肝上下腔静脉时两侧适当悬吊膈肌，务求静脉壁对静脉壁作连续外翻缝合，并以肝素生理盐水冲洗管腔、驱除空气；门静脉和肝下腔静脉吻合时，在受体的血管两侧缝合牵引线，并适当放血驱除血栓，插管时务必向供肝血管套管内注水，确认无扭转；胆管插管前冲洗供、受体胆管，覆盖网膜时避免过度收紧固定线；术毕迅速向腹腔内注入37℃生理盐水复温，并补充2 mL～3 mL碳酸氢钠和平衡盐液混合液；关腹时如动物已苏醒，应及时适当追加麻醉；单人操作时，采用橡皮泥固定器械.本研究在进行上述改进后施行肝移植术30例. 按上法分别采用0～4℃ uW液保存供肝18 h后施行肝移植术， 供受体为SD大鼠组15例，供受体为Wistar大鼠组7例.

2结果

全部动物无麻醉死亡，预试验期间最易出现的意外为吻合口血栓、血管撕裂、门静脉扭转.按改进的二袖套法进行的30例肝移植中，供体手术时间约40 min，袖套准备及肝脏修整时间5 min～8 min，受体手术时间50 min～60 min，24 h存活率93% (28/30)，1 wk存活率90% (27/30)，1 wk内死亡原因主要为腹腔内出血、吻合口血栓.

以UW液保存SD大鼠肝脏18 h后施行的15例肝移植中，术中死亡5例，死因为腹腔创面渗血3例，肝上下腔静脉血栓2例，24 h内死亡4例，死因为呼吸衰竭和腹腔内出血，24 h～36 h死亡6例，死因为肝功能衰竭、消化道出血、腹腔内出血.同法开展的7例Wistar大鼠中，无术中死亡，24 h内死亡1例，死因为腹腔内出血，1 wk成活率86%(6/7).

3讨论

3.1术前管理为确保肝脏大小和相关血管、胆管的口径、长度相匹配，术前应选配体质量相近的大鼠作为供受体，如二者相差过分悬殊，将给手术带来困难，甚至失败.另外操作尚未定型前宜选择300 g左右的大鼠练习为佳.文献及本研究表明进行有关肝脏保存试验时，不宜选择SD大鼠，Weiming等^［3］的研究表明在UW液保存条件下，SD大鼠肝脏保存8 h后，1 wk存活率达100%，当保存9 h后，1 wk存活率仅56%，而Wistar大鼠的肝脏在UW液保存18 h后仍有良好的生存率，因此目前有关大鼠肝脏保存的研究多采用Wistar大鼠，这种大鼠品系间的差异原因不清.另外SD大鼠体态修长，膈肌位置较高，手术难度也大于Wistar大鼠.大鼠的健康状况，特别是呼吸道状况直接影响术后生存率，因此术前需仔细观察大鼠有无咳嗽、流涕、气喘症状，有类似症状者应果断中止手术.此外，保存试验中供体术前尽可能禁食2 d～3 d，文献表明，其与肝移植术后生存率有关.为便于从阴茎背静脉输液，尽可能选择雄性大鼠作为受体.

3.2手术技巧采用乙醚吸入麻醉操作方法简单、安全性高，但务必在术前20 min～30 min肌注阿托品，以防止分泌物阻塞呼吸道.显露方法以自动牵开器结合可上下滚动的“腰桥”，可良好地显露术野.单人操作时可使用橡皮泥固定器械，效果良好.采用经腹主动脉插管持续灌洗肝脏，此法实际上是经肝动脉和门静脉双重灌洗，灌注效果良好，无肝热缺血时间，术中还能持续保持整个肝脏中心处于低温状态.准备供肝血管袖套时，为防止血管扭曲尽可能根据右肾静脉、脾静脉断端结扎点辩清血管的左右方向，并尽可能缩短血管长度，这是预防血管扭转的关键.由于供受体大小相近，肝下下腔静脉袖套反折线一般应在右肾静脉平面以上，门静脉袖套反折面应在脾静脉汇合部远侧1 mm～2 mm处.受体肝血管阻断前补液有利于减轻骤然阻断下腔静脉和门静脉血流所致的血液动力学紊乱，减轻血液粘滞度，减少血栓发生率.为防止吻合口狭窄或梗塞，仅作肝上下腔静脉间的端端吻合，而不是如某些文献所描述的膈肌环之间的吻合.门静脉及肝下下腔静脉套接时，宜首先缝合受体相应血管的2侧壁牵引，力争一次吻合成功.本组手术胆道并发症发生率明显低于文献报道，分析其原因主要在于避免了供肝热缺血现象；最大限度地缩短了供肝胆管长度；胆道吻合时冲洗供受体胆道，并且覆盖带有血供网膜，从而减轻了供体胆管的损伤，便于其建立侧支循环，代偿肝动脉结扎后的营养供给.

3.3术后处理由于受体腹腔脏器长时间暴露及低温保存后供肝的植入，术后大鼠多处于低温状态，术毕即刻以37℃生理盐水迅速复温，有利于心肺功能复苏与恢复，加强血液循环，减少血栓发生率.术毕即刻补充适量的碱性液体，有利于纠正无肝期的酸中毒并迅速恢复血容量，纠正低血压状态，多数大鼠补液后，肠管及肝脏血供有明显的改善.此外，感染也是术后常见的并发症.为此关腹前需使用一定量的抗生素.

作者简介：管文贤, 男, 1963-08-20生,江苏吴江市人, 汉族. 1987年第四军医大学毕业. 博士， 讲师，主治医师. 发表论文40篇，主编专著1部，参编专著5部.导师李开宗. 电话:(029)3375259, 3375260

作者单位：第四军医大学西京医院肝胆外科，陕西西安 710033)

参考文献

1 Kamada N, Calne RY. A surgical experience with five hundred thirty transplants in the rat. Surgery, 1983;93(1):64-69

2 Miyata M, Fisher JH, Fuhs M et al. A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Transplantation, 1980;30(5):335-341

3 Weiming YU, Douglas C, Hinrich BS. Rat liver preservationThe components of uW solution that are essential to its success. Transplantation,1990;49(6):1060-1066