我们用液相放大酶免疫分析法（L-BA-EIA）^［1］检测血清总IgE，并与传统BA-酶联免疫吸附测定(ELISA)法进行了比较。

一、材料和方法

(1)总IgE工作标准：标准液浓度为：0，10，25，100，250和500 IU/ml(WHO 75/502)。(2)McIgE抗体(Ab)，辣根过氧化物酶(HRP)结合物由中国科学院基础免疫室提供。(3)生物素-丙烯酸-PcIgEAb结合物由本室按以下方法制备：将0.033 nmol/L 聚丙烯酸、0.1 mol/L EDC和2.94 nmol/LPcIgEAb溶解在0.01 mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)中反应24小时；经Sephadex G -100过柱。收集丙烯酸-PcIgEAb-复合物，并浓缩至2 ml。加入0.73 mol/L NHS-生物素反应2小时，透析后保存。(4)生物素化牛血清白蛋白（BSA）包被的聚苯乙烯试管^［2］。(5)BA-ELISA方法参照文献［3］进行。(6)L-BA-EIA法标准操作过程：取BSA-生物素包被的试管6支，及测定管若干支；向各管分别加入标准液及血清25 μl，丙烯酸-PcIgEAb 200 μl，振摇后各管加链霉亲和素50 μl，用PBS-T洗2次；再向各管加McIgE抗体-HRP 200 μl。用PBS-T洗3次，各管加OPD，显色，加终止液，以“0”管作空白A₄₉₂比色，计算其含量。

二、结果

1.最适条件的选择：BAS-亲和素包被浓度为2 μg/ml；链霉亲和素5 μg/ml；PcIgEAb-丙烯酸-生物素结合物浓度为1∶8 000；McIgE抗体-HRP为1∶10 000。

2.精密度试验：分别重复测定5份患者血清20次，结果其平均值分别为26，90，296，540，1 200IU/ml；标准差分别为：1.2，5.8，8.3，10.5，18.4；CV值分别为4.6，6.4，2.8，1.9，1.5。

3.与BA-ELISA法相关分析：53份血清标本(正常人25份，哮喘患者28份)按同一标准(WHO 75/502)检测。结果两法呈高度相关(r=0.981，P＜0.01)。

4.L-BA-EIA灵敏度及标准曲线：按Eisenbrey等的方法计算，本试验的最低检出率为0.2 IU/ml，标准曲线测定范围为0.2～500 IU/ml。

5.平行试验：取1份哮喘患者血清标本，以2，4，6，8，16倍稀释测定各管总IgE含量。实测值分别为436，221，119.8，59，33 IU/ml；稀释后期待值为218，109，55，27；实际/期待（%）101，109，107，122，结果表明有较好的线性关系。

6.L-BA-EIA参考值统计结果：75名无过敏遗传史、寄生虫检查阴性的正常人，其测定值范围为：1～194 IU/ml；±s为(25±145) IU/ml，35例外源性哮喘病人测定值范围为：(210～1 200) IU/ml；±s为(340±1 143) IU/ml，外源性哮喘与正常人血清总IgE水平差异有非常显著意义(P＜0.01)。

三、讨论

用L-BA-EIA法检测血清总IgE，其各项指标均能满足临床需要。本法PcIgEAb经修饰后与可溶性大分子相连，在液相中可增加抗体的量，扩展了标准曲线的检测范围（0.2～500 IU/ml），并可避免空间位阻和高剂量挂钩现象。将抗原抗体首先在液相中反应，缩短了平衡时间，提高了反应动力学效应。利用本法检测总IgE全过程只需55分钟。在L-BA-EIA法中，链霉亲和素(桥臂)作为分离剂的同时并与固相包被的BSA-生物素，以及生物素-丙烯酸-PcIgEAb共同构成了BAS放大系统，确保了试验的灵敏性，且生物素-丙烯酸-PcIgE抗体复合物的结构形式可避免生物素占据IgE的结合位点。

本课题受全军九五医药卫生科研基金资助(编号：96D006)

参考文献

1Doekes G, Douwes J, Wouter I, et al. Enzyme immunoassays for total and allergen specific IgE in population studies. Occup Environ Med,1996,53:63-64.

2Olivieri V, Beccarini I, Galluccu G, et al. Capture assay for specific IgE an improved quantitative method.J Immunol Methods,1993, 157:65-66.

3Subba Rao PV, McCartney-Francis NL, Metcalfe DD, et al. An avidin--biotin micro ELISA for rapid measurement of total and allergen-specific human IgE. J Immunol Methods, 1983, 57: 71-72.

(收稿：1998-08-24修回：1999-01-12)