解脲脲原体(Uu)感染的发病率有日渐增高的趋势^［1］。分离培养检测Uu操作繁琐、周期长。聚合酶链反应(PCR)受诸多因素影响且系统本身的局限性难以避免。为提高准确率、缩短检测周期，我们采用培养结合聚合酶链反应检测221例泌尿生殖道感染患者Uu，现将结果报道如下。

一、材料和方法

1.标本来源与采集：标本来自221例泌尿生殖系感染患者，其中男46例，女175例，年龄18～56岁。患者均为首诊病例，检查前未用过抗菌药物。标本采集按常规方法进行，同一患者取两个拭子，一个接种在支原体液体培养基中，另一个用于PCR检测。

2.试剂：Uu培养基购自中联达试剂公司；PCR试剂购自华美生物工程公司，引物序列为：5′-CACGTAAATTAGTACC-AGGAGC-3′(正义链)； 5′-AGTCTAACGCTATCACCAGTTG-3′(反义链)。

3.支原体培养：样品拭子接种于液体培养基中，37℃培养1～3天，培养基变为紫红色后接种于固体培养基上继续培养1～4天，低倍显微镜下观察菌落生长情况，见典型的“油煎蛋”样菌落为阳性，阴性结果观察1周以上。

4.PCR检测：按操作程序。10 μl PCR反应产物于2％琼脂糖凝胶上进行电泳，凝胶电泳在紫外线下可见与阳性对照平齐的452 bp的DNA条带即为阳性。

二、结果

1.PCR检测221份标本，阳性91份，阴性130份，91份阳性标本经培养确诊86份阳性，5份阴性，假阳性率为5.5％；130份阴性标本经培养确诊105份阴性，25份阳性，假阴性率19.2％。

2.221份标本经液体培养基增菌可能阳性的138份,分别采用固体养基接种/显微镜检和PCR检测，两种方法均确诊阳性111份。

三、讨论

研究表明，PCR检测Uu存在一定的假阳性和假阴性。决定PCR特异性和敏感性的关键因素是引物。引物的特异性取决于靶序列基因的保守性，由于基因变异及物种间同源性序列的存在，即使在最保守的靶序列区段设计引物，也难保证完全的特异性。引物的敏感性取决于靶序列的拷贝数、引物在靶序列上所处的位置等。同一靶序列上不同位置的引物，其灵敏度相差10～10³倍^［2］。PCR检测的局限性与反应体系有关，尤其与引物的设计关系密切^［3］。另外，PCR无法反映Uu的存活状况。因此，单纯PCR仅作为临床诊断的参考，不能作为确诊依据，更不能作为治愈标准。

我们采用以培养为主，结合PCR检测Uu，效果令人满意。固体培养基接种、显微镜镜检和PCR法确诊Uu感染的符合率基本一致。结合法和传统培养法相比：(1)将1周以上的培养周期缩短为2～3天。(2)采用选择性液体培养基增菌，纯化Uu菌系，扩增Uu菌落，增加起始模板量，提高了PCR的灵敏度和特异性。

总之，培养结合PCR检测Uu，克服了各自单独应用的弊端，提高了对Uu感染的检测水平，值得推广。

参考文献

1王荷英，王千秋，张树文，等.性传播疾病中的支原体感染.临床皮肤科杂志，1996，25：6-8.

2He Q ,Marjamaki M, Soini H, et al. Primers are decisive for sensitivity of PCR. Biotechniques,1994,17:82-87.

3张敏丽，郭兆彪，杨瑞馥，等.五对聚合酶链反应引物检测解脲脲原体的比较.中华医学检验杂志，1997，20：38-40.

(收稿：1998-12-14修回：1999-03-22)